MODULISTICA DI PRESENTAZIONE
PROGETTI DI “RICERCA CORRENTE 2015”
N. identificativo progetto: IZS PB 07/15 RC
Progetto presentato da:
ISTITUTO ZOOPROFILATTICO SPERIMENTALE
DELLA PUGLIA E DELLA BASILICATA
Area tematica: Sicurezza degli alimenti
Titolo del progetto: L’innovazione della Droplet Digital
PCR (ddPCR) per la rilevazione e quantificazione del
virus dell’epatite A e di Norovirus in alimenti
Responsabile Scientifico: Dr. Giovanna La Salandra
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Modulo 1 - Presentazione complessiva del progetto
Progetto presentato dall’ISTITUTO ZOOPROFILATTICO SPERIMENTALE DELLA PUGLIA E DELLA
BASILICATA
N. identificativo progetto: IZS PB 07/15 RC (*)
1.
Titolo del progetto: L’innovazione della Droplet Digital PCR (ddPCR) per la rilevazione e quantificazione del
virus dell’epatite A e di Norovirus in alimenti.
2.
Durata del progetto (espressa in mesi): 36 mesi
3.
Area tematica: Sicurezza degli alimenti
4.
Linea di ricerca n. 2 - Titolo linea di ricerca:
Sviluppo di metodologie innovative per l’individuazione e/o la ricerca di residui, contaminanti ambientali, sostanze
impiegate ad uso fraudolento, additivi e organismi geneticamente modificati negli alimenti di origine animale, vegetale,
compreso negli alimenti ad uso zootecnico e, infine, approfondimento sulle cause di introduzione nella catena
alimentare e valutazione del rischio
5.
Responsabile scientifico del progetto:
Cognome: La Salandra Nome: Giovanna
Qualifica: Dirigente Sanitario
Telefono: 0881/786396 Fax: 0881/786366
E-mail: [email protected]
6.
Elenco delle Unità operative impegnate nel progetto:
a) n. identif. U.O.: .....1 IMS Responsabile U.O.: Dott.ssa Giovanna La Salandra (IZS PB)
b) n. identif. U.O.: ....1 EMS Responsabile U.O.: Dott.ssa Elisabetta Suffredini (ISS – LNR per il controllo delle
contaminazioni Virali dei Molluschi Bivalvi)
c) n. identif. U.O.: .....2 EMS Responsabile U.O.: Dott. Vito Martella (UNI BA – Dipartimento di medicina veterinaria)
(*) Identificativi per IZS: AM=Abruzzo-Molise; LT=Lazio-Toscana; LER=Lombardia-Emilia Romagna;
ME=Mezzogiorno; PLV=Piemonte-Liguria-Valled’Aosta; PB=Puglia-Basilicata; SA=Sardegna; SI=Sicilia;
UM=Umbria-Marche; VE=Venezie
Esempio: IZS AM 01/11 RC
RC = Ricerca Corrente
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CURRICULUM VITAE DEL RESPONSABILE DEL PROGETTO
Nome:
Nata:
Qualifica:
Ente di appartenenza:
tel:
indirizzo e mail:
Laurea:
Specializzazione:
Giovanna La Salandra
Foggia il 30 luglio 1963
Dirigente sanitario
Istituto Zooprofilattico Sperimentale della Puglia e della Basilicata Via Manfredonia, 20
71100 Foggia
+39 0881786396
[email protected]
Scienze Biologiche
Scienza dell’alimentazione indirizzo nutrizionistico
Responsabile U.O.” Ricerca e sviluppo scientifico - Laboratorio di Biologia molecolare e Batteriologia speciale”
Responsabile scientifico di progetti di ricerca corrente nell’area tematica sicurezza alimentare.
Autore e coautore di pubblicazioni scientifiche e comunicazioni nazionali ed internazionali su argomenti di sicurezza
alimentare e controllo igienico-sanitario degli alimenti.
Editor progetti Ricerca finalizzata Ministero della Salute anno 2013
Pubblicazioni area scientifica del progetto
2009 La Salandra G., Crisetti E., Pedarra C., Chiocco D., Parisi A., Celano G.V., Germinario G.L., Mula G.,
Normanno G. “Antibiotic resistance in the food chain: characterization of S. aureus isolated from milk and cheese in
Italy”. Clinical Microbiology and Infection volume 15, supplement n. 4, may 2009.
2009 G. La Salandra, G. Normanno, E. Crisetti, L. Serrecchia, T. Onni, M. Fiori, V. Lorusso, S. Tola. “Molecular
typing of enterotoxigenic strains of Staphylococcus aureus isolated from different foods of animal origin”. Clinical
Microbiology and Infection volume 15, supplement n. 4, may 2009.
2009 Lorusso V, Dambrosio A, Quaglia NC, Parisi A, La Salandra G, Lucifora G, Mula G, Virgilio S, Carosielli L,
Rella A, Dario M, Normanno G. “Verocytotoxin-producing Escherichia coli O26 in raw water buffalo (Bubalus
bubalis) milk products in Italy”. J Food Prot. 2009 Aug; 72(8):1705-8.
2011 Lorusso V, Dambrosio A, Quaglia NC, Parisi A, La Salandra G, Mula G, Virgilio S, Lucifora G, Dario M,
Normanno G. “Development of a Multiplex PCR for Rapid Detection of Verocytotoxin-Producing Escherichia coli O26
in Raw Milk and Ground Beef.” Journal of Food Protection, 2011 Jan; 74(1):13-7.
2011 E. Crisetti, A. Cataleta, T. Onni, M.A. Cafiero, S. Tola, G. La Salandra. “Occurrence of methicillin-resistant
Staphylococcus aureus in dairy products of Apulia region Italy” Clinical Microbiology and Infection, 17: S108–S668.
2011 A. Q. Nabi, A. Vernile, G.Spano, G. La Salandra, L. Beneduce, G. Colelli, S.Massa. ”PCR-based Quality
Control of Listeria spp. and L. monocytogenes in Ready-To-Eat Salads sold in Italy”. Current Nutrition & Food
Science, 2011, 7, 57-62.
2013 M.G. Basanisi, E. Crisetti, R. Pedale, M.C. Nardella, G. La Salandra. “S. aureus in Puglia da formaggi a latte
crudo ovino e profilo di antibiotico resistenza”. Large Animal Review. Supplemento 1 al n. 5 – Ottobre 2013, anno 19.
Pag. 94.
2014 La Bella G., D’Alessandro M., La Salandra G. “Monitoring of Hepatitis A virus and Norovirus in mussels from
Puglia (South Italy)”. 24th ECCMID – Barcelona, Spain 10-13 May 2014.
2014 La Bella G., D’Alessandro M., La Salandra G. “Monitoraggio delle contaminazioni da Norovirus e virus
dell’epatite a in molluschi bivalvi in Puglia”. ISTISAN Congressi 14/C3, pag. 57 edito da Istituto Superiore di Sanità
2015 F. Mancini, M. Monaco, M.G. Basanisi, G. La Salandra, A. Pantosti. “An unusual PVL-positive MRSA strain in
milk and dairy products from a region of South Italy”. Journal of Global Antimicrobial Resistance 3 (2015) 151–152.
2015 M. G. Basanisi, G. Nobili, G. La Bella, R. Russo, G. Spano, G. Normanno, G. La Salandra. “Molecular
characterization of Staphylococcus aureus isolated from sheep and goat cheeses in southern Italy”. Small Ruminant
Research, submitted.
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Curriculum vitae et studiorum ELISABETTA SUFFREDINI
Esperienza professionale
- 10.07.2014 – presente: Responsabile del Laboratorio Nazionale di Riferimento per il controllo delle contaminazioni
Virali dei Molluschi Bivalvi (art. 33 del Reg. (CE) n.882/2004)
- 31.10.2013 – presente: Ricercatore (tempo indeterminato) presso l’Istituto Superiore di Sanità, Dipartimento di
Sanità Pubblica Veterinaria e Sicurezza Alimentare
- 18.10.2004 – 30.10.2013: Collaboratore Tecnico Enti di Ricerca presso l’Istituto Superiore di Sanità
- 23.06.2000 – 17.10.2004: Ricercatore a progetto presso l’Istituto Superiore di Sanità
Istruzione e formazione
- 24.11.2010 Diploma di Specializzazione in Microbiologia e Virologia
- 28.02.2007 Dottorato di Ricerca in Biologia Cellulare e dello Sviluppo
- 13.10.2002 Diploma di Specializzazione in Chimica e Tecnologie Alimentari
- 18.04.2000 Diploma di Laurea in Scienze Biologiche
Esperto nei seguenti gruppi di lavoro:
- CEN/TC 275/WG 6/TAG 3 commission per l’elaborazione di metodi analitici molecolari per la ricerca o il
conteggio di batteri in matrici alimentari
- CEN/TC 275/WG 6/TAG 4 commission per l’elaborazione di metodi per la ricerca dei virus negli alimenti
- Gruppo Tecnico per la valutazione dei piani di monitoraggio dei Molluschi Bivalvi – nota DGISAN 937-P11/01/2013 del Ministero della Salute
- EFSA BIOHAZ Working Group on Heat treatment of bivalve molluscs; M-2015-0055, EFSA-Q-2015-00161
- Technical sub-group (analytical methods) in the EFSA BIOHAZ Working Group Baseline survey of Norovirus in
oysters; EFSA-Q-2015-00455, EFSA-Q-2015-00455
Lecturer nei seguenti corsi universitari:
- Corso di Microbiologia Agraria, Laurea Specialistica in Nutrizione Umana, Università di Roma "Tor Vergata"
(2004 - presente)
- Corso di Microbiologia Generale, Laurea in Scienze Biologiche, Università di Roma "La Sapienza" (2005 - 2012)
Pubblicazioni
Suffredini E, Ciccaglione AR, Rizzo C, La Rosa G, Capuano F, Proroga Y, Alfonsi V, Bruni R, Tosti ME, Cozzi L,
Di Pasquale S, Equestre M, Scavia G, Taffon S, Dimaro O, Losardo M and De Medici D. Multidisciplinary approach
in the investigation of a Hepatitis A outbreak and in the management of HAV contaminated shellfish production areas
- Campania Region, Italy, 2015. In: 13th National Congress of the Italian Society for Virology. Abstract book;
September 14-16, 2015; Orvieto. 2015. p.22.
Suffredini E, Lanni L, Arcangeli G, Pepe T, Croci L, Mazzette R, Ciccaglioni G, Croci L. Qualitative and
quantitative assessment of viral contamination in bivalve molluscs harvested in Italy. International journal of food
microbiology 2014;184:21-26.
Suffredini E, Mioni R, Mazzette R, Bordin P, Serratore P, Fois F, Piano A, Cozzi L, Croci L. Detection and
quantification of Vibrio parahaemolyticus in shellfish from Italian production areas. International journal of food
microbiology 2014;184:14-20.
Suffredini E, Cozzi L, Ciccaglioni G, Croci L. Development of a colony hybridizaton method for the enumeration of
total and potentially enteropathogenic Vibrio parahaemolyticus in shellfish. International journal of food
microbiology 2014;186:22-31.
Pavoni E, Consoli M, Suffredini E, Arcangeli G, Serracca L, Battistini R, Rossini I, Croci L, Losio MN.
“Noroviruses in Seafood: A 9-Year Monitoring in Italy”. Foodborne Pathog Dis. 2013 Jun;10(6):533-9
Croci L, Suffredini E. Real-time PCR detection of food-borne pathogenic vibrio. In: Rodrfguez-Lázaro D, ed. “Realtime PCR in food science” Norfolk: Caister Academic Press; 2013. p.135-148.
Suffredini E, Magnabosco C, Civettini M, Rossetti E, Arcangeli G, Croci L. “Norovirus contamination in different
shellfish species harvested in the same production areas” J Appl Microbiol. 2012 Sep;113(3):686-92
Pepe T, Ventrone I, Suffredini E, Ceruso M, Croci L, Anastasio A, Cortesi ML. “Norovirus monitoring in bivalve
molluscs harvested and commercialized in southern Italy”. J Food Prot. 2012 May;75(5):976-81
Suffredini E, López-Joven C, Maddalena L, Croci L, Roque A. Pulsed-field gel electrophoresis and PCR
characterization of environmental Vibrio parahaemolyticus strains of different origins. Applied and environmental
microbiology 2011; 77(17):6301-6304.
Suffredini E, Pepe T, Ventrone I, Croci L. Norovirus detection in shellfish using two Real-Time RT-PCR methods.
New Microbiol. 2011 Jan; 34(1):9-16.
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FORMATO EUROPEO
PER IL CURRICULUM
VITAE
INFORMAZIONI PERSONALI
Nome
VITO MARTELLA
Indirizzo
VIA PESCE N. 50, 70010 CASAMASSIMA (BA) - ITALIA
Telefono
0804679805
0804679843
[email protected]
Fax
E-mail
Nazionalità
Luogo e Data di nascita
Codice fiscale
Italiana
Torino, 30 /04/1970
MRTVTI70D30L219C
ESPERIENZA LAVORATIVA
• Date (da – a)
• Nome e indirizzo del datore di
lavoro
• Tipo di azienda o settore
• Tipo di impiego
• Principali mansioni e
responsabilità
• Date (da – a)
• Nome e indirizzo del datore di
lavoro
• Tipo di azienda o settore
• Tipo di impiego
• Principali mansioni e
responsabilità
CAPACITÀ E COMPETENZE
ORGANIZZATIVE
Ad es. coordinamento e
amministrazione di persone, progetti,
bilanci; sul posto di lavoro, in attività di
volontariato (ad es. cultura e sport), a
casa, ecc.
Dall’01/03/2001 ad oggi
Università degli Studi di Bari, Palazzo Ateneo, Corso Umberto I n.1, 70100, Bari.
Università
Professore associato SSD VET/05 (Malattie infettive degli animali domestici) presso il
Dipartimento di Medicina Veterinaria, Strada prov. Per Casamassima Km 3, 70010 Valenzano
(BA)
Ricerca ed insegnamento
Dal 01/08/2000 al 27/02/2001
Università degli Studi di Bari, Palazzo Ateneo, Corso Umberto I n.1, 70100, Bari.
Università
Ricercatore universitario SSD VET/05 (Malattie infettive degli animali domestici) presso
Dipartimento di Medicina Veterinaria, Strada prov. Per Casamassima Km 3, 70010 Valenzano
(BA)
Ricerca ed insegnamento
ATTIVITA’ DI COORDINAMENTO DI PROGETTI DI RICERCA
Coordinatore scientifico e/o responsabile di unità operativa nell’ambito di numerosi progetti di
ricerca corrente e finalizzata finanziati dal Ministero della Salute e di progetti PRIN e PON
finanziati dal MIUR.
ATTIVITA’ ISTITUZIONALE ED ATTIVITA’ SCIENTIFICA
2015:
Membro del Gruppo di Studio sui Calicivirus per l’ICTV (International Commette for
Taxonomy of Viruses)
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2014 ad oggi:
Componente del Gruppo di lavoro per la ricerca dell’Università degli Studi di Bari
2013 ad oggi:
Coordinatore dell’ISGEV (Italian Study Group for Enteric Viruses)
2012:
Membro del panel dei Revisori per la Valutazione di progetti per conto del Ministero
dell'Istruzione, dell'Università e della Ricerca e per la valutatazione dei prodotti della
ricerca (VQR 2004-2010) per conto dell'ANVUR
Professore a contratto (2 gg) presso Universidade Estadual Paulista "Júlio de
Mesquita Filho", Brasile
2011 ad oggi:
Direttore della Scuola di Dottorato “Sanità Animale e Zoonosi” dell’Università degli
Studi di Bari.
Membro del Noronet (norovirus classification working group), gruppo di studio
internazionale per i norovirus
Incluso nell’elenco dei TIS (Top Italian Scientists)
2010:
Visiting scientist (3 mesi) presso il FARP, Columbus State University, Wooster, Ohio,
USA, collaborando con la Prof.ssa Linda J. Saif.
2009-2010:
Valutatore di progetti per la Ohio State University.
2008 ad oggi:
Membro del RCWG (Rotavirus Classification Working Group)
2006 ad oggi:
Incluso nell’elenco di esperti per i panel scientifici dell’ECDC (European Centre for
Disease Prevention and Control);
2005:
Membro del panel di esperti CIVR (Comitato di indirizzo per la valutazione della
ricerca).
2001:
Visiting scientist (2 mesi) da parte del Baker Institute, Cornell University di Ithaca, New
York, USA
ATTIVITA’ EDITORIALE E DI
Membro dell’editorial board delle riviste Archives of Virology (dal 2008 a 2012),
Journal of Medical Science (dal 2012 ad oggi) and Virus Genes (dal 2010 a 2014).
Referee per riviste scientifiche internazionali, incluse The Lancet, Virology, Archives of
Virology, Veterinary Microbiology, Journal of Virological Methods, Microbes and
Infection, Journal of Medical Microbiology, Journal of Medical Virology, Epidemiology
and Infection, Journal of Clinical Microbiology, Journal of General Virology, Journal of
Virology, Virus Gene, Virus Research, Emerging Infectious Diseases.
Referee per tesi di PhD per università estere.
ATTIVITA’ DIDATTICA
Dall‘anno accademico 2000-2001 ha svolto attività didattica in modo continuativo in
corsi di laurea e scuola di specializzazione, presso l’Università degli Studi di Bari
PREMI
Miglior contributo scientifico SIDiLV (2015)
Miglior contributo scientifico SIDiLV (2013)
Scopus Highly Cited Italian Scientists (2013)
Miglior contributo scientifico SIDiLV (2012)
Top Italian Scientist (2011)
Miglior contributo scientifico SIDiLV (2011)
Fast Breaking Papers (2006)
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PUBBLICAZIONI
Autore e coautore di 285 pubblicazioni su riviste internazionali con impact factor soggette a
valutazione di referee (H index =42, Scopus, Novembre 2015).
ELENCO 10 PUBBLICAZIONI SIGNIFICATIVE ULTIMI 5 ANNI
1. Terio V, Di Pinto A, Di Pinto P, Martella V, Tantillo G. RNA extraction method for
the PCR detection of hepatitis A virus in shellfish. Int J Food Microbiol. 2010.
142(1-2):198-201
2. Kroneman A, Vega E, Vennema H, Vinjé J, White PA, Hansman G, Green K,
Martella V, Katayama K, Koopmans M. Proposal for a unified norovirus
nomenclature and genotyping. Arch Virol. 158(10):2059-68. doi: 10.1007/s00705013-1708-5.
3. Giammanco GM, De Grazia S, Tummolo F, Calderaro A, Bonura F, Buonavoglia A,
Martella V, Medici MC. Norovirus variant GII.4 Sydney 2012 in Italy in the
2012/2013 winter season. Emerg Inf Dis. 2013. 19(8): 1348-9.
4. Martella V, Medici MC, De Grazia S, Tummolo F, Calderaro A, Bonura F, Saporito
L, Terio V, Catella C, Lanave G; Buonavoglia C, Giammanco GM. Evidence for
recombination between the pandemic GII.4 norovirus strains New Orleans 2009
and Sydney 2012. J Clin Microbiol. 2013. 51(11): 3855-7
5. Giammanco GM, De Grazia S, Terio V, Lanave G, Catella C, Bonura F, Saporito L,
Medici MC, Tummolo F, Calderaro A, Hansmann G, Martella V. Analysis of early
strains of the norovirus pandemic variant GII.4 Sydney 2012 identifies mutations in
adaptive sites of the capsid protein. Virology. 2014. 450-451:355-8
6. Medici MC, Tummolo F, Martella V, Giammanco GM, De Grazia S, De Conto F,
Arcangeletti MC, Chezzi C, Calderaro A. Novel recombinant GII.P16_GII.13 and
GII.P16_GII.3 norovirus strains in Italy. Virus Research. 2014. 188: 142–145.
7. Di Martino B, Di Profio F, Ceci C, Di Felice E, Green KY, Bok K, De Grazia S,
Giammanco GM, Massirio I, Lorusso E, Buonavoglia C, Marsilio F, Martella V.
Seroprevalence of norovirus genogroup IV antibodies among humans, Italy 20102011. Emerg Infect Dis. 2014, 20: 1867-1871.
8. Medici MC, Tummolo F, De Grazia S, Calderaro A, De Conto F, Terio V, Chironna
M, Bonura F, Pucci M, Bányai K, Martella V, and Giammanco GM.
Epidemiological dynamics of norovirus GII.4 variant New Orleans 2009 in Italy. J
Gen Virol. 2015. 96 (9): 2919-27.
9. de Graaf M, van Beek J, Vennema H, Podkolzin AT, Hewitt J, Bucardo-Rivera F,
Templeton K, Mans J, Nordgren J, Gábor R, Lynch M, Rasmussen LD, Iritani N ,
Chan MC, Martella V, Balay K, Vinjé J, White PA, Koopmans MP. Emergence of a
novel GII.17 norovirus – End of the GII.4 era? Eurosurveillance. 2015. Jul 2;20(26).
pii: 21178.
10. Medici MC, Tummolo F, Calderaro A, Chironna M, Giammanco GM, De Grazia S,
Arcangeletti MC, De Conto F, Chezzi C, Martella V. Identification of the emerging
Kawasaki 2014 GII.17 human norovirus, Italy, 2015. Eurosurveillance. 2015. 3;
September, 20 (35)
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Razionale del progetto
I virus enterici rappresentano un importante problema nel settore della sanità pubblica, a causa della
loro persistente presenza nell’ambiente e della possibile contaminazione di alimenti e acqua.
I Norovirus (NoV) e il virus dell’epatite A (HAV) sono importanti agenti virali d’infezione
nell’uomo a trasmissione alimentare e rappresentano rispettivamente la maggiore causa di
gastroenterite acuta non batterica e una comune causa di epatite virale (foodborne viruses).
Differenti studi epidemiologici indicano i molluschi bivalvi come importanti vettori di tali
patologie, a causa della loro capacità di filtrare l’acqua e di concentrare oltre alle sostanze nutrienti
anche virus e batteri (Terio et al., 2010). Non esistono attualmente metodi di routine per la coltura
di questi virus e la loro diagnostica è basata su metodi molecolari. Nel 2013 sono state pubblicate
due procedure standardizzate, la UNI CEN ISO/TS 15216-1:2013 e la UNI CEN ISO/TS 152162:2013, per la determinazione di HAV e di Norovirus negli alimenti mediante Real-Time RT-PCR
(RT-qPCR). La RT-qPCR presenta alcuni limiti intrinseci alla metodica quali la necessità di analisi
multiple e di curve standard per la quantificazione dell’acido nucleico target in base ai valori di Ct,
presentando così delle difficoltà per rilevare e quantificare un basso numero di copie del DNA
target. La droplet digital PCR (ddPCR) è un nuovo metodo molecolare utile per una precisa
quantificazione degli acidi nucleici che utilizza un'analisi di diluizione del campione, mediante un
generatore di droplet (goccioline), e la metodica statistica della distribuzione di Poisson, così da
limitare analisi multiple e il ricorso a curve standard per consentire la quantificazione assoluta del
numero di copie del DNA target. Inoltre, questo approccio può ridurre la difficoltà di quantificare i
virus in presenza di inibitori associati alla tipologia di matrice alimentare (Rački et al., 2014). La
ddPCR è una misurazione end-point e utilizza un sistema di reazione di amplificazione simile come
sistema alla qPCR basata su tecnologia TaqMan®, ma con il vantaggio di poter calcolare in maniera
più accurata e sensibile il numero assoluto di copie del genoma target (copie/µL), specialmente per
campioni con una piccola concentrazione di RNA/DNA e anche in campioni complessi.
Recentemente sono stati pubblicati alcuni lavori che mostrano l’elevata potenzialità di questa
metodica innovativa nella quantificazione assoluta di virus enterici in alimenti (Rački et al., 2014;
Coudray et al., 2015). Prima dell’adozione di una metodica nuova, sono tuttavia necessarie prove di
validazione e valutazione comparativa, con riferimento a metodi che già sono in uso e ben validati.
Tali indagini sono necessarie per fornire agli organi deputati al controllo degli alimenti, uno
strumento efficace, in termini di specificità, accuratezza e rapidità dell’analisi.
Obiettivi del presente progetto sono:
1.
Messa a punto di un protocollo per la ricerca di HAV e Norovirus in alimenti mediante la
tecnica della ddPCR;
2.
Confronto della ddPCR con i metodi previsti dalle linee guida (RT-qPCR) per la rilevazione
e quantificazione di HAV e Norovirus negli alimenti;
3.
Raccolta ed analisi comparativa di campioni di molluschi bivalvi prelevati in diverse aree
della costa pugliese, mediante screening in parallelo di campioni di campo.
BIBLIOGRAFIA:
Terio V, Di Pinto A, Di Pinto P, Martella V, Tantillo G. RNA extraction method for the PCR detection of hepatitis A virus in shellfish. Int J Food
Microbiol. 2010;142(1-2):198-201.
Terio V, Martella V, Moschidou P, Di Pinto P, Tantillo G, Buonavoglia C. Norovirus in retail shellfish. Food Microbiol. 2010: 27(1):29-32.
ISO/TS 15216-1:2013 Microbiology of food and animal feed -- Horizontal method for determination of hepatitis A virus and norovirus in food using
real-time RT-PCR -- Part 1: Method for quantification.
ISO/TS 15216-2:2013 Microbiology of food and animal feed -- Horizontal method for determination of hepatitis A virus and norovirus in food using
real-time RT-PCR -- Part 2: Method for qualitative detection.
Nejc Rački, Dany Morisset, Ion Gutierrez-Aguirre, Maja Ravnikar. One-step RT-droplet digital PCR: a breakthrough in the quantification of
waterborne RNA viruses. Anal Bioanal Chem (2014) 406:661–667.
Coralie Coudray-Meuniera, Audrey Fraissea, Sandra Martin-Latila, Laurent Guillierb, Sabine Delannoyc, Patrick Fachc, Sylvie Perellea. A
comparative study of digital RT-PCR and RT-qPCR for quantification of Hepatitis A virus and Norovirus in lettuce and water samples. International
Journal of Food Microbiology 201 (2015) 17.
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Descrizione complessiva del progetto
1.
Breve sintesi delle conoscenze già disponibili sull’argomento
I virus enterici rappresentano un importante problema nel settore della sanità pubblica, a causa della
loro persistente presenza nell’ambiente e alla loro possibile contaminazione di cibi e acqua.
Norovirus (NoV) ed Hepatovirus A (HAV) rappresentano rispettivamente la maggiore causa di
gastroenterite acuta non batterica e di epatite. Differenti studi epidemiologici indicano i molluschi
bivalvi come importanti vettori di tali patologie, a causa della loro capacità di filtrare l’acqua e di
concentrare oltre alle sostanze nutrienti anche virus e batteri.
Si ipotizza che un certo numero di infezioni sia in parte da attribuire al consumo di alimenti
contaminati da questi patogeni. È ormai accettato dalla comunità scientifica internazionale,
considerare questi virus come “foodboorne pathogen”. I molluschi bivalvi costituiscono una matrice
complessa, in cui i virus target possono essere presenti e capaci di dare infezioni a basse dosi (1-10
UFP). Non esistono attualmente metodi di routine per la coltura di questi virus e la loro diagnostica
è basata su metodi molecolari. Nel 2013 sono state pubblicate due procedure standardizzate, la UNI
CEN ISO/TS 15216-1:2013 e la UNI CEN ISO/TS 15216-2:2013, per la determinazione di HAV e
di Norovirus negli alimenti mediante Real-Time RT-PCR (RT-qPCR). In realtà la RT-qPCR
presenta alcuni limiti relativi all’efficienza di amplificazione (sono necessarie analisi multiple del
campione) e si basa su curve standard per la quantificazione dell’acido nucleico target in base ai
valori di Ct, presentando così delle difficoltà per rilevare e quantificare un basso numero di copie
del DNA target. La droplet digital PCR (ddPCR) è un nuovo metodo molecolare utile per una
precisa quantificazione degli acidi nucleici che utilizza un'analisi di diluizione del campione,
mediante un generatore di droplet (goccioline), e la metodica statistica della distribuzione di
Poisson, così da limitare analisi multiple e il ricorso a curve standard per consentire la
quantificazione assoluta del numero di copie del DNA target. Inoltre, questo approccio può ridurre
la difficoltà di quantificare i virus in presenza di inibitori associati alla tipologia di matrice
alimentare (Rački et al., 2014). La ddPCR è una misurazione end-point e utilizza un sistema di
reazione di amplificazione simile come sistema alla qPCR basata su tecnologia TaqMan ®, ma con il
vantaggio di poter calcolare in maniera più accurata e sensibile il numero assoluto di copie del
genoma target (copie/µL), specialmente per campioni con una piccola concentrazione di
RNA/DNA, anche in campioni complessi.
2.
Quali nuove conoscenze/informazioni il progetto si prefigge di produrre
L’obiettivo del progetto è la messa a punto di un protocollo di rilevazione di virus enterici, quali
HAV e Norovirus, mediante la tecnica della Droplet Digital PCR, e la valutazione delle sue
caratteristiche prestazionali ai fini della possibile applicazione come alternativa al metodo
standardizzato, basato sull’utilizzo della Real Time RT-PCR. Allo stesso tempo si procederà al
confronto del nuovo metodo con quelli standardizzati, fornendo dati di performance analizzando
campioni reali di molluschi bivalvi prelevati in diverse aree della costa pugliese.
3.
Metodologia
Preparazione di standard a RNA e cDNA dei virus target per la valutazione del limite di
rilevazione della ddPCR.
Estrazione degli acidi nucleici da campioni di campo, prelevati nella zona Pugliese,
mediante kit commerciali, come indicato nelle procedure tecniche ISO/TS 15216-1:2013 e
ISO/TS 15216-2:2013, o mediante metodologie alternative ugualmente performanti.
Analisi molecolare degli estratti per la rilevazione e la quantizzazione dei virus HAV e
Norovirus con applicazione delle procedure standardizzate ISO/TS 15216-1:2013 e ISO/TS
Pagina 9 di 26
15216-2, mediante Real-Time RT-PCR.
4.
Messa a punto del protocollo operativo in ddPCR su standard precedentemente preparati. Si
tratta di un saggio basato sull’utilizzo di sonde fluorescenti target specifiche che non
necessità di ripetizioni di analisi. Dopo aver preparato la mix di reazione, il campione sarà
processato nel generatore di droplet e in seguito sottoposto ad amplificazione PCR. Al
termine il software calcolerà la concentrazione del DNA target in copie per microlitro
utilizzando l’analisi di distribuzione di Poisson.
Analisi in ddPCR degli estratti dei campioni già analizzati in Real-Time RT-PCR.
Interpretazione dei risultati.
Applicazione di test statistici per l’elaborazione dei dati ottenuti e confronto delle
performance delle metodiche
Descrizione dei criteri di trasferibilità e di diffusione dei prodotti e dei risultati da
conseguire
Al termine del progetto si provvederà alla diffusione dei risultati raggiunti e dei dati di performance
delle due metodiche, disseminando i prodotti realizzati (documenti metodologici e rapporti tecnici)
a tutti gli operatori del settore potenzialmente coinvolti e comunicando i risultati prettamente
scientifici nell’ambito di convegni, congressi, etc. In particolare, i risultati del presente progetto
saranno oggetto di pubblicazione su riviste nazionali ed internazionali. A conclusione di tutte le
attività si procederà all'organizzazione di eventi formativi (giornate di formazione/corsi di
aggiornamento) per tutti gli stakeholder del settore.
5.
Valore aggiunto dell’aggregazione tra soggetti diversi che partecipano al progetto
Le diverse UU.OO., che partecipano al progetto, forniscono competenze e professionalità, ognuna
per le diverse fasi del progetto. In particolare, la U.O. 1IMS, radicata sul territorio fornirà la base
del campionamento e svilupperà la metodica ddPCR, avendo già avviato la ricerca di HAV e
Norovirus in alimenti mediante tale strumento con una precedente ricerca. Le UU.OO. 1EMS e
2EMS, forniranno il supporto scientifico indispensabile per la messa a punto della metodica e la
stesura del protocollo operativo con confronto in termini di performance delle metodiche oggetto
del lavoro. La potenzialità del progetto è basata proprio sull’aggregazione dei soggetti partecipanti.
6.
Descrizione e spiegazione dell’articolazione del programma in fasi fra le varie UU.OO.
La ricerca si articolerà in sei work package:
•
WP1: Ricerca bibliografica.
•
WP2: Campionamento e analisi molecolare dei campioni di mitili mediante Real Time RTPCR.
•
WP3: Messa a punto e standardizzazione del saggio in Droplet Digital PCR su materiale di
riferimento.
•
WP4: Analisi campioni di campo in Droplet Digital PCR.
•
WP5: Elaborazione dati ottenuti e confronto delle metodiche.
Pagina 10 di 26
•
WP6: Presentazione dei risultati ottenuti a convegni nazionali e/o internazionali e redazione
di pubblicazioni su riveste scientifiche nazionali e/o internazionali.
WP1
Sarà effettuata la raccolta bibliografica di materiale scientifico aggiornato sugli argomenti di
interesse, mediante la consultazione di banche dati elettroniche, testi e riviste scientifiche.
WP2
Le UU.OO. 1IMS e 2EMS procederanno al campionamento di mitili della costa Pugliese. I
campioni saranno successivamente analizzati mediante applicazione della procedura standardizzata
UNI CEN ISO/TS 15216-2 per la ricerca di HAV e Norovirus.
WP3
Per la messa a punto del saggio in Droplet Digital PCR per la ricerca e la quantizzazione di HAV e
Norovirus si partirà da materiale di riferimento e target analitici (RNA o cDNA), fornito dall’U.O.
1EMS, quantizzati mediante metodica di riferimento RT-qPCR (ISO/TS 15216-1:2013). Su tale
materiale lavorerà l’U.O. 1IMS al fine di ottenere una procedura in ddPCR applicabile all’analisi
dei campioni di campo e valutazione delle sue caratteristiche prestazionali.
WP4
Al fine di ottenere dati sul confronto delle metodiche Real-Time RT-qPCR e ddPCR, il protocollo
operativo messo a punto precedentemente in ddPCR verrà utilizzato nella ricerca dei virus target
negli estratti dei campioni di campo, già analizzati in Real-Time RT-PCR.
WP5
I risultati delle analisi effettuate in Real-Time RT-PCR e Droplet Digital PCR saranno elaborati
confrontandoli al fine di ottenere dati relativi alle performance delle due metodiche.
WP6
Tutti i dati relativi all’indagine verranno raccolti in una relazione che sarà successivamente diffusa.
A conclusione del progetto verrà organizzato un convegno per comunicare e divulgare i risultati
raggiunti fornendo spunti per futuri lavori ed approfondimenti scientifici, nonché indicazioni
metodologiche utili per i futuri piani di controllo ufficiale.
7.
Output del programma (es. documenti; metodologie; corsi di formazione, attivazione di
servizi, etc.) con indicazione dei tempi previsti per la presentazione
Report sulla problematica con riferimento alle norme europee adottate e ai risultati
scientifici diffusi nel breve periodo da gruppi di ricerca nazionali e internazionali.
Predisposizione dei campioni e primi dati sulle analisi molecolari (entro il 18° mese) R1.
Report finale sui risultati ottenuti (entro il 36° mese) R2.
Giornate di formazione sulla metodica e i protocolli messi a punto per l’analisi con
riferimento in particolare all’utilizzo della Droplet Digital PCR agli operatori del settore
alimentare che si occupano di controllo di qualità e agli organi ufficiali per il controllo delle
contaminazioni virali. Workshop rivolto agli operatori del settore per il trasferimento sul
territorio dei risultati ottenuti. WS (36° mese).
8.
Obiettivi e indicatori per la verifica dei risultati raggiunti
L’obiettivo del progetto è la messa a punto di un protocollo di rilevazione di virus enterici, quali
HAV e Norovirus, mediante la tecnica della Droplet Digital PCR, e la valutazione delle sue
caratteristiche prestazionali ai fini della possibile applicazione come alternativa al metodo
standardizzato, basato sull’utilizzo della Real Time RT-PCR. Allo stesso tempo si procederà al
Pagina 11 di 26
confronto del nuovo metodo con quelli già standardizzati, in particolare fornendo dati di
performance analizzando campioni reali di molluschi bivalvi prelevati in diverse aree della costa
pugliese.
Il metodo basato sull’utilizzo della ddPCR potrà essere così utilizzato per la ricerca di virus enterici,
HAV e Norovirus, anche in altri alimenti al fine di fornire uno strumento maggiormente
performante e in grado di rilevare anche minime quantità di questi patogeni alimentari.
Gli indicatori utilizzati per la verifica del raggiungimento degli obiettivi generali del progetto sono
rappresentati dalla diffusione della metodologia applicata al controllo delle contaminazioni degli
alimenti da virus enterici e anche da giornate di divulgazione e formazione degli operatori del
S.S.N. impegnati nel settore della sicurezza alimentare.
Pagina 12 di 26
Cronogramma del progetto
L’innovazione della Droplet Digital PCR (ddPCR) per la rilevazione e quantificazione del virus dell’epatite A e di Norovirus in alimenti
WP0: Gestione amministrativa e coordinamento scientifico del progetto – mesi 1 – 36.
WP1: Ricerca bibliografica.
WP2: Campionamento e analisi molecolare dei campioni di mitili mediante Real Time RT-PCR
WP3: Messa a punto e standardizzazione del saggio in Droplet Digital PCR su materiale di riferimento.
WP4: Analisi campioni di campo in Droplet Digital PCR.
WP5: Elaborazione dati ottenuti e confronto delle metodiche.
WP6: Presentazione dei risultati ottenuti a convegni nazionali e/o internazionali e redazione di pubblicazioni su riveste scientifiche nazionali e/o internazionali.
UO
1
1
1, 3
1, 2
1
1, 2, 3
1, 2, 3
WP 1
0
1
2
2
3
4
5
6
7
8
9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36
3
4
5
6
R1
WS
R2
R1-2: Rapporti
WS: Workshop
1 = U.O. 1IMS, IZS della Puglia e della Basilicata - S.S. “Biologia molecolare e batteriologia speciale”
2 = U.O. 1EMS, Istituto Superiore di Sanità – Laboratorio Nazionale di Riferimento per il controllo della contaminazioni virali dei molluschi
3 = U.O. 2EMS, Università degli Studi di Bari – Dipartimento di Medicina Veterinaria
Pagina 13 di 26
Modulo 1bis - Progetto dell’Unità Operativa di ricerca
1. Unità Operativa 1 IMS
N. identificativo progetto: IZS PB 07/15 RC
Numero identificativo dell’Unità Operativa e tipo: 1 IMS
Ente di appartenenza dell’Unità Operativa: Istituto Zooprofilattico Sperimentale della Puglia e della
Basilicata
Responsabile scientifico dell’Unità Operativa:
Cognome: La Salandra
Nome: Giovanna
Qualifica: Dirigente Sanitario
Telefono: 0881/786396
Fax: 0881/786366
E-mail: [email protected]
Pagina 14 di 26
Descrizione del contributo specifico fornito al progetto dall’U.O.
con indicazione delle attività, metodologia e obiettivi perseguiti
Il contributo fornito al progetto “L’innovazione della Droplet Digital PCR (ddPCR) per la
rilevazione e quantificazione del virus dell’epatite A e di Norovirus in alimenti” dall' U.O. 1 IMS
riguarderà le seguenti attività:
1. Gestione del progetto;
2. Raccolta di campioni di mitili e analisi per la ricerca di virus enterici, quali HAV e
Norovirus, mediante l’applicazione della procedura tecnica UNI CEN ISO ISO/TS 152162:2013 utilizzando la metodica Real Time RT-PCR;
3. Messa a punto e ottimizzazione della metodica di rilevazione e quantificazione mediante la
tecnica della Droplet Digital PCR a partire da materiale di riferimento e stesura finale del
protocollo;
4. Analisi molecolare degli estratti dei campioni di campo, precedentemente analizzati in Real
Time RT-PCR, con il protocollo messo a punto in Droplet Digital PCR;
5. Analisi statistica e confronto dei dati delle due metodiche Real Time RT-PCR e Droplet
Digital PCR;
6. Divulgazione dei risultati mediante presentazione in congressi/conferenze e mediante
pubblicazione dei dati su riviste scientifiche.
L’obiettivo del progetto e delle attività della U.O. 1 IMS all’interno di esso è la messa a punto di un
protocollo di rilevazione di virus enterici, quali HAV e Norovirus, mediante la tecnica della Droplet
Digital PCR, e la valutazione delle sue caratteristiche prestazionali ai fini della sua possibile
applicazione come alternativa al metodo standardizzato basato sull’utilizzo della Real Time RTPCR.
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Modulo 1bis - Progetto dell’Unità Operativa di ricerca
1. Unità Operativa 1 EMS
N. identificativo progetto: IZS PB 07/15 RC
Numero identificativo dell’Unità Operativa e tipo: 1 EMS
Ente di appartenenza dell’Unità Operativa: Istituto Superiore di Sanità
Responsabile scientifico dell’Unità Operativa:
Cognome: Suffredini
Nome: Elisabetta
Qualifica: Ricercatore; Responsabile del Laboratorio Nazionale di Riferimento per il controllo delle
contaminazioni Virali dei Molluschi Bivalvi
Telefono: 06/49902477
Fax: 06/49902045
E-mail: [email protected]
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Descrizione del contributo specifico fornito al progetto dall’U.O.
con indicazione delle attività, metodologia e obiettivi perseguiti
Il contributo dell’unità operativa 1 EMS al progetto “L’innovazione della Droplet Digital PCR
(ddPCR) per la rilevazione e quantificazione del virus dell’epatite A e di Norovirus in alimenti”
consisterà nelle seguenti attività:
1. Collaborazione nella messa a punto e nell’ottimizzazione della metodica di rilevazione e
quantificazione mediante la tecnica della Droplet Digital PCR;
2. Fornitura di materiali di riferimento e target analitici (acidi nucleici di HAV e NoV)
quantizzati mediante metodica di riferimento RT-qPCR (ISO/TS 15216-1:2013);
3. Collaborare all’elaborazione dei risultati delle prove;
4. Supporto nella stesura finale del protocollo in Droplet Digital PCR;
5. Supporto nelle attività di divulgazione dei risultati stessi mediante presentazione in
congressi/conferenze e mediante pubblicazione dei dati su riviste scientifiche.
A tale scopo l’unità operativa 1 EMS provvederà a preparare adeguati standard (RNA virale o di
sintesi e cDNA quantizzato) per la valutazione del limite di rilevazione della ddPCR in reazione
semplice e in presenza di inibenti derivanti da matrice alimentare. Tali standard saranno quantizzati
mediante metodica validata e accreditata ISO/TS 15216-1:2013.
L’obiettivo del progetto e delle attività della U.O. 1 EMS all’interno di esso è la messa a punto di
un protocollo di rilevazione di virus enterici, quali HAV e Norovirus, mediante la tecnica della
Droplet Digital PCR, e la valutazione delle sue caratteristiche prestazionali ai fini della sua
possibile applicazione come alternativa al metodo standardizzato basato sull’utilizzo della Real
Time RT-PCR.
Pagina 17 di 26
Modulo 1bis - Progetto dell’Unità Operativa di ricerca
1. Unità Operativa 2 EMS
N. identificativo progetto: IZS PB 07/15 RC
Numero identificativo dell’Unità Operativa e tipo: 2 EMS
Ente di appartenenza dell’Unità Operativa: Università degli Studi di Bari “Aldo Moro” –
Dipartimento di Medicina Veterinaria
Responsabile scientifico dell’Unità Operativa:
Cognome: Martella
Nome: Vito
Qualifica: Professore Associato
Telefono 080/467982015
Fax: 080/4679843
E-mail: [email protected]
Pagina 18 di 26
Descrizione del contributo specifico fornito al progetto dall’U.O.
con indicazione delle attività, metodologia e obiettivi perseguiti
Il contributo dell’unità operativa 2 EMS al progetto “L’innovazione della Droplet Digital PCR
(ddPCR) per la rilevazione e quantificazione del virus dell’epatite A e di norovirus in alimenti”
consisterà nelle seguenti attività:
1. Raccolta di campioni di mitili da impianti di allevamento della Regione Puglia;
2. Analisi dei campioni con metodiche ISO
3. Collaborazione nella messa a punto e nell’ottimizzazione della metodica di rilevazione e
quantificazione mediante la tecnica della Droplet Digital PCR;
4. Supporto nella validazione della Droplet Digital PCR su campioni di campo;
5. Supporto nelle attività di divulgazione dei risultati stessi mediante presentazione in
congressi/conferenze e mediante pubblicazione dei dati su riviste scientifiche.
A tale scopo l’unità operativa 2 EMS provvederà alla raccolta dei campioni di mitili prelevati dagli
impianti di allevamento della Regione Puglia e all’analisi molecolare mediante metodiche ISO.
L’obiettivo del progetto e delle attività della U.O. 2 EMS all’interno di esso è la messa a punto di
un protocollo di rilevazione di virus enterici, quali HAV e Norovirus, mediante la tecnica della
Droplet Digital PCR, e la valutazione delle sue caratteristiche prestazionali ai fini della sua
possibile applicazione come alternativa al metodo standardizzato basato sull’utilizzo della Real
Time RT-PCR.
Pagina 19 di 26
Tabella n. 1 – Risorse umane impegnate nel progetto per singola U.O.
N. identificativo progetto: IZS PB 07/15 RC
Titolo del progetto L’innovazione della Droplet Digital PCR (ddPCR) per la rilevazione e quantificazione del virus dell’epatite A e di Norovirus in alimenti
Durata del progetto (espressa in mesi): 36 mesi
Unità Operativa n. 1 IMS
Ente di appartenenza della Unità Operativa: Istituto Zooprofilattico Sperimentale della Puglia e della Basilicata
Responsabile scientifico dell’U.O.: Cognome La Salandra
NOME
Giovanna La Salandra
Nome Giovanna
Laboratorio/Sezione di
QUALIFICA
IZSPB – Laboratorio di Biologia Dirigente sanitario
Rapporto di lavoro
MESI UOMO
Dipendente - TI
4/1
Dipendente - TI
4/1
Molecolare e Batteriologia Speciale
Rosa Coppola
IZSPB – Laboratorio di Biologia Tecnico di laboratorio
Molecolare e Batteriologia Speciale
IZSPB – Laboratorio di Biologia Biologo/biotecnologo
Contratto a tempo determinato/borsa di 22/1
Molecolare e Batteriologia Speciale
studio/altra tipologia di contratto
TOTALE: 30/3
Firma del Responsabile scientifico dell’Unità Operativa
DR.SSA GIOVANNA LA SALANDRA
Firma del Responsabile Scientifico del progetto
Firma del Direttore dell’IZS capofila
(per ciascuna U.O.)
(solo per U.O. proponente)
DR.SSA GIOVANNA LA SALANDRA
PROF. CANIO BUONAVOGLIA
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Tabella n. 1 – Risorse umane impegnate nel progetto per singola U.O.
N. identificativo progetto: IZS PB 07/15 RC
Titolo del progetto L’innovazione della Droplet Digital PCR (ddPCR) per la rilevazione e quantificazione del virus dell’epatite A e di Norovirus in alimenti
Durata del progetto (espressa in mesi): 36 mesi
Unità Operativa n. 1 EMS
Ente di appartenenza della Unità Operativa: Istituto Superiore di Sanità
Responsabile scientifico dell’U.O.: Cognome Suffredini
NOME
Elisabetta Suffredini
Nome Elisabetta
Laboratorio/Sezione di
Dipartimento
di
Sanità
QUALIFICA
Pubblica Ricercatore
Rapporto di lavoro
MESI UOMO
Dipendente - TI
3/1
Dipendente - TI
3/1
Veterinaria e Sicurezza Alimentare –
Reparto
Pericoli
Microbiologici
connessi agli Alimenti
Simona Di Pasquale
Dipartimento
di
Sanità
Pubblica Ricercatore
Veterinaria e Sicurezza Alimentare –
Reparto
Pericoli
Microbiologici
connessi agli Alimenti
TOTALE: 6/2
Firma del Responsabile scientifico dell’Unità Operativa
..................................................………..........................
Firma del Responsabile Scientifico del progetto
Firma del Direttore dell’IZS capofila
(per ciascuna U.O.)
(solo per U.O. proponente)
DR.SSA GIOVANNA LA SALANDRA
PROF. CANIO BUONAVOGLIA
Pagina 21 di 26
Tabella n. 1 – Risorse umane impegnate nel progetto per singola U.O.
N. identificativo progetto: IZS PB 07/15 RC
Titolo del progetto L’innovazione della Droplet Digital PCR (ddPCR) per la rilevazione e quantificazione del virus dell’epatite A e di Norovirus in alimenti
Durata del progetto (espressa in mesi): 36 mesi
Unità Operativa n. 2 EMS
Ente di appartenenza della Unità Operativa: Università degli Studi di Bari “Aldo Moro” – Dipartimento di Medicina Veterinaria
Responsabile scientifico dell’U.O.: Cognome Martella
NOME
Vito Martella
Nome Vito
Laboratorio/Sezione di
QUALIFICA
Dipartimento di Medicina Veterinaria Professore Associato
Sezione
“Malattie
infettive”
Rapporto di lavoro
MESI UOMO
TI
6/1
TI
6/1
–
Università degli Studi di Bari “Aldo
Moro”
Valentina Terio
Dipartimento di Medicina Veterinaria Ricercatore confermato
Sezione
“Malattie
infettive”
–
Università degli Studi di Bari “Aldo
Moro”
TOTALE: 12/2
Firma del Responsabile scientifico dell’Unità Operativa
..................................................………..........................
Firma del Responsabile Scientifico del progetto
Firma del Direttore dell’IZS capofila
(per ciascuna U.O.)
(solo per U.O. proponente)
DR.SSA GIOVANNA LA SALANDRA
PROF. CANIO BUONAVOGLIA
Pagina 22 di 26
Tabella n. 2 - Spese complessive intero progetto
N. identificativo progetto: IZS PB 07/15 RC
Titolo del progetto: L’innovazione della Droplet Digital PCR (ddPCR) per la rilevazione e quantificazione del virus dell’epatite A e di Norovirus in alimenti
Durata del progetto (espressa in mesi): 36 mesi
Responsabile scientifico del progetto: Cognome La Salandra
Nome Giovanna
UNITA’ IMS
VOCI DI SPESA
UNITA’ 1
TOTALE
- attrezzature
- materiale di consumo
10.000,00
10.000,00
- personale non dipendente
36.000,00
36.000,00
3.000,00
3.000,00
500,00
500,00
49.500,00
49.500,00
- missioni
- spese generali (max. 10%)
(1) TOTALE PARZIALE IMS
UNITA’ EMS
VOCI DI SPESA
UNITA’ 1
- materiale di consumo
UNITA’ 2
TOTALE
3.500,00
3.500,00
1.000,00
1.910,00
- personale non dipendente
- missioni
- spese generali (max. 10%)
910,00
90,00
90,00
(2) TOTALE PARZIALE EMS
1.000,00
4.500,00
5.500,00
(1+2) TOT. GENERALE
49.500,00
5.500,00
55.000,00
Firma del Responsabile scientifico
DR.SSA GIOVANNA LA SALANDRA
Firma del Direttore dell’IZS
PROF. CANIO BUONAVOGLIA
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Tabella n. 3 - Spese per U.O. IMS
N. identificativo progetto: IZS PB 07 /15 RC
Titolo del progetto: L’innovazione della Droplet Digital PCR (ddPCR) per la rilevazione e quantificazione del virus dell’epatite A e di Norovirus in alimenti
Numero identificativo Unità Operativa: 1 IMS
Ente di appartenenza dell’Unità Operativa: Istituto Zooprofilattico Sperimentale della Puglia e della Basilicata
Responsabile scientifico dell’U.O.: Cognome La Salandra
VOCI DI SPESA
Nome Giovanna
IMPORTI
DESCRIZIONE
- attrezzature
- materiale di consumo
10.000,00 Reagenti e consumabili di laboratorio
- personale a contratto
36.000,00 Biologo/Biotecnologo per due anni con esperienza nella ricerca sulla sicurezza degli alimenti e conoscenza
certificata di piattaforme innovative di analisi come Real Time PCR e ddPCR
- missioni
3.000,00 Riunioni del progetto; attività di divulgazione dei risultati
- spese generali (max. 10%)
(1) TOTALE
500,00 Produzione di materiale divulgativo, consulenza tecnica, acquisto software
49.500,00
Firma del Responsabile scientifico dell’Unità Operativa
Firma del Responsabile Scientifico del progetto
DR.SSA GIOVANNA LA SALANDRA
DR.SSA GIOVANNA LA SALANDRA
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Tabella n. 4 - Spese per U.O. EMS
N. identificativo progetto: IZS PB 07/15 RC
Titolo del progetto: L’innovazione della Droplet Digital PCR (ddPCR) per la rilevazione e quantificazione del virus dell’epatite A e di Norovirus in alimenti
Numero identificativo Unità Operativa: 1 EMS
Ente di appartenenza dell’Unità Operativa: Istituto Superiore di Sanità
Responsabile scientifico dell’U.O.: Cognome Suffredini
VOCI DI SPESA
IMPORTI
Nome Elisabetta
DESCRIZIONE
- materiale di consumo
- personale a contratto
- missioni
910,00 Riunioni del progetto; attività di divulgazione dei risultati.
- spese generali (max. 10%)
(1) TOTALE
90,00
1.000,00
Firma del Responsabile scientifico dell’Unità Operativa
Firma del Responsabile Scientifico del progetto
..................................... .............………..........................
DR.SSA GIOVANNA LA SALANDRA
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Tabella n. 4 - Spese per U.O. EMS
N. identificativo progetto: IZS PB 07/15 RC
Titolo del progetto: L’innovazione della Droplet Digital PCR (ddPCR) per la rilevazione e quantificazione del virus dell’epatite A e di Norovirus in alimenti
Numero identificativo Unità Operativa: 2 EMS
Ente di appartenenza dell’Unità Operativa: Università degli Studi di Bari “Aldo Moro” – Dipartimento di Medicina Veterinaria
Responsabile scientifico dell’U.O.: Cognome Martella
VOCI DI SPESA
- materiale di consumo
Nome Vito
IMPORTI
DESCRIZIONE
3.500,00 Reagenti e consumabili di laboratorio
- personale a contratto
- missioni
1.000,00 Riunioni del progetto; attività di divulgazione dei risultati
- spese generali (max. 10%)
(1) TOTALE
4.500,00
Firma del Responsabile scientifico dell’Unità Operativa
Firma del Responsabile Scientifico del progetto
..................................................………..........................
DR.SSA GIOVANNA LA SALANDRA
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