Diapositiva 1

TRASCRIZIONE
e
TRADUZIONE
Trascrizione e traduzione
Dogma centrale della
biologia molecolare:
processo con cui
l’informazione
contenuta nel DNA
dirige la sintesi delle
proteine.
Trascrizione
Maturazione
Traduzione
Trascrizione e traduzione
1
2
2
3
RNA
 Polimero di nucleotidi a singolo
filamento
 Lo Zucchero è il ribosio
 La base URACILE sostituisce la
Timina:
pirimidina
che
forma
legami idrogeno con l’ADENINA
 La sintesi dell’mRNA si basa sulla
complementarietà
filamento
stampo
della
di
basi
DNA
funge da copia per l’RNA
sul
che
TRASCRIZIONE
TRASCRIZIONE
TRASCRIZIONE
La reazione di allungamento della catena catalizzata da una RNA polimerasi
filamento di DNA stampo
catena di RNA in crescita
U
In ogni gene, solo uno dei
due filamenti di DNA- elica
senso- viene trascritto,
l’altro complementare e detto
filamento non senso è il
filamento stampo
A
G
legame
fosfodiesterico
ribonucleotidi trifosfati
ATP(adenosina trifosfato)
GTP(guanosina trifosfato)
CTP(citosina trifosfato)
UTP (uridina trifosfato)
direzione di
crescita 5’-3’
C
TRASCRIZIONE
filamento SENSO
5’
3’
RNA POLIMERASI
5’
3’
3’
5’
VELOCITA’
ca. 40 nucleotidi al
secondo
filamento STAMPO - ANTI
SENSO
Complementarietà delle basi
mRNA
Trascrizione suddivisa in tre fasi:
INIZIO, ALLUNGAMENTO E TERMINE
INIZIO: da il via alla trascrizione e richiede la presenza di un promotore,
una specifica sequenza di DNA a cui l’RNA polimerasi si lega molto
saldamente. Esiste almeno un promotore per ogni gene. I promotori sono
importanti sequenze di controllo che “dicono” all’RNA polimerasi tre cose:
• dove iniziare la trascrizione
• quale «filamento di DNA leggere» e conseguentemente la direzione da
prendere dal sito di inizio
ALLUNGAMENTO: dopo avere interagito con il DNA promotore per legarvisi
saldamente, la RNA polimerasi procede aprendo la doppia elica del DNA,
cosicché vengono esposti i nucleotidi di entrambi i filamenti per un breve
tratto. Uno dei due filamenti fa da stampo per l’appaiamento complementare
delle basi presenti nei nucleotidi in arrivo, due dei quali vengono uniti dalla
polimerasi per cominciare la catena di RNA. Quindi l’allungamento della catena
prosegue finchè l’enzima non incontra un’altra sequenza detta segnale di
terminazione.
TERMINAZIONE: quando la RNA polimerasi raggiunge la sequenza detta
segnale di terminazione, si ferma lasciando libero sia lo stampo che il polimero
di RNA appena sintetizzato
TRASCRIZIONE
INIZIO, ALLUNGAMENTO E TERMINE
Modificazioni post- trascrizionali dell’mRNA
+5’ cap:
cappuccio
Guanosina
Metilata, in 5’
+poliadenilazione=
Coda poliA in 3’
splicing
SPLICING
Fattore di trascrizione
Fattore di trascrizione
Metilazione del DNA:
Repressione della
trascrizione
TRADUZIONE
Il codice genetico
Il codice genetico è un codice a triplette,
ovvero un gruppo di tre nucleotidi (codone) dell’mRNA che
codifica per un aminoacido della catena polipeptidica.
Sequenza di DNA
3’
Sequenza di mRNA
5’
H2N
(STOP)
C=O
Sequenza aminoacidica
O-
tRNA o RNA transfert
•
•
•
•
•
a una specifica molecola di
RNA (tripletta di basi)
corrisponde una molecola di
amminoacido
che
viene
legata nel citoplasma dal
tRNA
Il tRNA ha una corta catena
di nucleotidi (anticodone) ed
1 amminoaicido .
Il tRNA ha la forma di
trifoglio
la “foglia” centrale è formata
da 3 nucleotidi →anticodone
c’è una esatta corrispondenza
tra
l’amminoacido
e
l’anticodone del tRNA cui
viene legato
AMMINOACIDO
amminoacido
Transfer RNA
anticodone
ANTICODONE
tRNA
TRADUZIONE
LA TRADUZIONE DELL’ mRNA
I ribosomi
subunità piccola subunità grande
ribosoma
Il processo della traduzione
La traduzione viene divisa in genere in tre fasi: inizio,
allungamento e termine.
Inizio
Allungamento
Termine
Direzione del movimento del ribosoma
Il ribosoma si lega
all’mRNA nel codone
di inizio
La catena polipeptidica si allunga per
aggiunta successiva di aminoacidi
Quando si incontra
un codone di stop, il
polipeptide viene
rilasciato e il
ribosoma si dissocia
Frazionamento dei ribosomi
S = Svedberg coefficiente di sedimentazione
Gradiente di saccarosio (%)
Si stratifica una sospensione globale di ribosomi
(ottenuta tramite centrifugazione frazionata) su di un
gradiente di saccarosio continuo, che aumenta di
concentrazione verso il fondo.
Attraverso la centrifugazione i vari tipi di rRNA si
separano in bande distinte a seconda del loro peso, e
possono essere poi recuperati separatamente mediante il
frazionamento.
frazionamento
I tre siti principali che legano RNA su di un ribosoma
exit
peptidilico amminoacilico
Catena polipeptidica
in crescita
Aminoacil-tRNA
in arrivo
Subunità
ribosomale
maggiore
Subunità
ribosomale
minore
sito
di legame
dell’mRNA
SITO
P
SITO A
mRNA
mRNA
Modello di ribosoma
funzionante
molecola di RNAt
in arrivo
proteina
nascente
La molecola di mRNA viene tradotta in un
processo ciclico a tre stadi.
Una molecola di amminoacil-tRNA si lega al sito A
libero.
Riconoscimento codone-anticodone
Formazione di un nuovo legame peptidico (3-4)
grazie all’attività catalitica dell’enzima peptidil
transferasi.
mRNA slitta di un tratto lungo 3 nucleotidi all’interno
della subunità minore, espellendo la molecola di tRNA
utilizzata e riposizionando il ribosoma per consentire il
legame della molecola successiva di tRNA
L’mRNA viene tradotto in direzione 5’-3’, l’estremità
amminoterminale della proteina è quella sintetizzata per prima,
mentre ogni ciclo aggiunge un amminoacido all’estremità
carbossiterminale della catena polipeptidica. La catena
polpeptidica rimane sempre legata al tRNA collocato al sito P
della subunità ribosomica maggiore.
La macchina della traduzione
Durante la traduzione l’mRNA viene letto
come una sequenza di triplette di basi,
dette codoni. Ogni codone specifica
l’amminoacido che deve essere aggiunto
alla catena polipeptidica in via di
accrescimento.
CONTROLLI SULLA TRASCRIZIONE e TRADUZIONE
microRNA :Repressione della TRADUZIONE




Sono molecole di RNA a singolo filamento lunghe circa 20-25 nucleotidi.
Inibiscono la traduzione delle proteine legando l’mRNA.
Sono trascritti da geni, nel genoma sono stati identificati circa 200 geni
Si ipotizza che Alterazioni di microRNA portani a patologie cardiache,
Parkinson, tumori
ES. Controllo della TRADUZIONE
Modificazioni post-traduzionali DELLE PROTEINE
Alcuni aa possono essere modificati chimicamente mediante il
- legame di zuccheri
- gruppi fosfato
- Una catena polipeptidica può essere tagliata enzimaticamente in due
o più frammenti (es: insulina)
- Due o più polipeptidi sintetizzati separatamente possono unirsi per
costituire le subunità di una proteina che possiede struttura
quaternaria
-Degradazione ad opera del proteosoma
Proteosoma e Ubiquitina
L’apparato finale di distruzione delle proteine negli eucarioti è il proteasoma. Presente in
molte copie disperse nel citosol e nel nucleo, il proteasoma ha come bersaglio anche molte
proteine del reticolo endoplasmatico rugoso: quelle proteine che non riescono a ripiegarsi o
ad assemblarsi in modo appropriato dopo essere entrate nell’ER sono scoperte da una sistema
di sorveglianza che le retrasloca nel citosol per la degradazione.
Con poche eccezioni, i proteasomi agiscono su proteine che sono state marcate in modo
specifico per la distruzione dall’attacco covalente di copie multiple di una piccola proteina
chiamata ubiquitina. L’ubiquitina si trova nella cellula libera o unita covalentemente ad
un’enorme varietà di proteine intracellulari. Per la maggior parte di queste proteine, questa
marcatura porta alla loro distruzione da parte del proteasoma.