Sistema a componenti in fase solida T3 Uptake

Diagnostics Division
13 Mountain View Avenue
Orangeburg, NY 10962
http://www.diagnostics.com
Sistema a componenti
in fase solida T3 Uptake
Catalog No.: 06B-237116 (100 Tube Kit)
06B-237124 (200 Tube Kit)
RIA HOT LINE U.S. ONLY: 1-800-437-1705
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SISTEMA A COMPONENTI IN FASE SOLIDA T3 UPTAKE
Per la determinazione quantitativa della % di T3 Uptake nel siero
Catalogo nE 06B237416, provette sensibilizzate con anticorpo anti-T3 (coated tubes)
Catalogo nE 06B237728, soluzione tracciante
Catalogo nE 06B237418, siero di riferimento
Generalita' e Metodologia di Dosaggio
Gli ormoni tiroidei esercitano potenti influenze sulla crescita, la differenziazione, il metabolismo
cellulare ed il bilancio ormonale generale. La tiroxina (T4) e la 3,5,3'triiodotiroinina (T3) circolano principalmente legate alla globulina legante la tiroxina (TBG).1
Comunque una piccolissima porzione di ogni ormone è presente allo stato libero.2 La T4 libera e
la T3 libera penetrano le membrane cellulari ed interagiscono con le strutture della cellula.3 T4 libera
e T3 libera agiscono anche come inibitori della sintesi e del rilascio dell'ormone tireotropo (TSH) da
parte della ghiandola ipofisaria.4
Ogni variazione nella capacità della TBG a legare T3 e T4 ingenera una variazione proporzionale nella
concentrazione di ormoni liberi. Nell'ipertiroidismo, la TBG risulta più saturata consentendo alti
livelli di T3 e T4 libera; nell'ipotiroidismo la TBG risulta meno saturata inibendo adeguati livelli di
ormoni liberi. La determinazione della capacità di legame della TBG coadiuva pertanto nella
diagnosi della funzione tiroidea.
Principio di Dosaggio
In un dosaggio per assorbimento (uptake assay), l'aumento dei conteggi di T3 [I125] assorbiti su di
una fase solida rappresenta la quantità di tracciante non legato alla TBG implicando una
diminuzione della capacità di legame della stessa. Nel kit ICN Pharmaceuticals T3 Uptake,
l'antisiero anti-T3 adeso su provette in plastica agisce come agente separante e lega la T3 non
legata alla TBG.
Reagenti
Per uso diagnostico in vitro
1.
Provette sensibilizzate con anticorpo anti-T3 (coated tubes). Catalogo nE 06B237416,
provette in polipropilene ricoperte con antisiero anti-T3 (coniglio); 100 provette per
confezione. Conservazione: mantenere a temperatura ambiente (18-25EC), ben chiuse nella
confezione originale. Stabilità: vedi la data di scadenza sulla confezione. Stabilità dopo
l'apertura: due mesi.
2.
Siero di riferimento T3,: Catalogo nE 06B237418, contenente siero umano* con sodio azide
allo 0,1%** e altri conservanti; 2 ml/flacone. Conservazione: refrigerare a 2-8EC. Stabilità:
vedi la data di scadenza sulla confezione. Stabilità dopo l'apertura: due mesi.
3.
Soluzione tracciante T3-[I125], Catalogo nE 06B237728, contenente meno di 10 FCi (370
kBq) per flacone di Triiodotironina [I125] in tampone barbital, con siero albumina bovina,
adiuvante della decantazione e sodio azide allo 0,1%** come conservante. Un flacone
contiene 110 ml ed è sufficiente per l'allestimento di 100 provette. Conservazione:
refrigerare a 2-8EC o a temperatura ambiente. Stabilità: vedi la data di scadenza sul
flacone.
*
ATTENZIONE: il materiale usato per la preparazione di questo prodotto è risultato negativo
per la ricerca degli anticorpi anti-HIV e per la ricerca di HBsAg con metodologie brevettate.
Nessun metodo comunque offre la certezza dell'assenza di agenti infettivi. Maneggiare
come materiale infetto.
**
ATTENZIONE: i reagenti contengono sodio-azide. Il sodio-azide può reagire con il piombo
e il rame delle tubature idrauliche formando composti metallici altamente esplosivi. All'atto
dello scarico, far fluire grandi volumi d'acqua così da prevenire l'accumulo. Altamente
tossico per ingestione. A contatto con acidi libera gas altamente tossico. In caso di
contatto con la pelle lavarsi immediatemente ed abbondantemente con d'acqua.
IMPIEGO DI MATERIALE RADIOATTIVO: AVVERTENZE
L'acquisto, la ricezione, la detenzione, l'uso, il trasferimento e lo smaltimento di materiale
radioattivo, sono soggetti ai regolamenti ed ai permessi previsti dalle autorità legislative. Nella
manipolazione di sostanze radioattive devono essere osservate le seguenti precauzioni:
Ë Il materiale radioattivo deve essere conservato e manipolato in un'area del laboratorio
specificatamente designata a tale uso. Ë L'ambiente di lavoro deve essere ben illuminato e
arieggiato. Ë Le superfici di lavoro devono essere non porose in modo da ridurre al minimo la
contaminazione duvuta allo spargimento di liquidi radioattivi. Ë Considerata la piccola radioattività
contenuta nel flacone del tracciante (circa 10 FCi), l'uso del kit non pone alcun problema di
pericolo di radiazioni. Ë Tuttavia per evitare inalazione o ingestione di materiale radioattivo è
necessario rispettare le buone norme generali di laboratorio. Ë In particolare si raccomanda di:
non pipettare con la bocca soluzioni radioattive; non mangiare, bere, fumare o usare cosmetici
nell'area di lavoro designata; pulire immediatamente le superfici di lavoro dei materiali radioattivi
eventualmente versati; raccogliere il materiale contaminato solido e liquido in appositi contenitori
ed effettuarne lo smaltimento secondo le procedure previste; lavarsi accuratamente le mani dopo
l'uso di materiale radioattivo.
Attrezzature richieste ma non fornite
1.
Provette ematologiche da 5 ml.
2.
Aspiratore.
3.
Pipette in grado di dispensare 25 Fl e 1,0 ml, oppure un sistema di pipettamento automatico.
4.
Contatore a scintillazione adatto alla rilevazione delle radiazioni dello iodio-125.
Raccolta dei Campioni
Non è necessario alcun particolare pretrattamento del paziente. Si raccomanda l'impiego di siero.
Preparazione del campione per l'analisi: prelevare il sangue con siringa da 5 ml. Attendere la
coagulazione. Centrifugare e raccogliere il siero.
Spedizione dei campioni: il siero dovrebbe essere spedito a 2-8EC. Qualora il tempo di spedizione
dovesse superare le 48 ore, si raccomanda il congelamento.
Conservazione: se i campioni non sono dosati entro 6 ore, refrigerare a 2-8EC. Congelare qualora
il tempo di conser-vazione superi le 48 ore. Non sgelare e ricongelare ripetutamente.
Procedimento di Dosaggio
Portare i reagenti e i campioni a temperatura ambiente prima dell'uso. Al fine comunque di ridurre
il deterioramento, evitare di mantenerli non refrigerati se non per il tempo necessario al loro uso.
Non scambiare reagenti provenienti da lotti diversi. Qualora sia impiegato un pipettatore
automatico, si raccomanda di seguire le istruzioni per l'uso al fine di evitare contaminazioni fra un
campione e l'altro. L'allestimento delle provette dei campioni e del siero di riferimento, così come
dei controlli, deve essere effettuato simul-taneamente.
1.
Numerare una quantità appropriata provette per il siero di riferimento e per I campione.
2.
Aggiungere il siero di riferimento ed i campioni come segue:
Provetta nE
1,2
25 Fl siero di
3,4
25 Fl campione
riferimento
3.
Aggiungere 1,0 ml di soluzione tracciante ad ogni provetta.
4.
Incubare a temperatura ambiente per 60 ± 5 minuti dal momento dell'ultima aggiunta al
passaggio precedente.
5.
Aspirare tutto il contenuto di ciascuna provetta, oppure decantare, lasciando le provette
capovolte per almeno un minuto. Asciugare il bordo delle provette.
6.
Determinare la radioattività delle provette per un minuto in un contatore a scintillazione
gamma. Può essere necessario un tempo maggiore disponendo di un contatore a bassa
efficienza.
Schema di Dosaggio Radioimmunologico del Sistema a Componenti
in fase solida del T3 Uptake
Provetta
Siero
di
riferimento
Campione
1,2
25Fl
---
Campione
---
25 Fl
Soluzione
tracciante
Aggiungere
1 mL a
tutte
le provette
Incubazione
Incubare
tutte le
provette
a temp.
amb.
per 60 ± 5
minuti
Aspirazione
o
decantazione
Aspirare o
decantare
tutte le
provette
- Contare la radioattività di tutte le provette
- Procedere al calcolo e determinare i valori dei campioni
Calcolo dei Risultati
Nota: i dati di conteggio non necessariamente devono essere espressi come colpi per minuto
(cpm). L'unità di tempo comunque deve essere costante per tutte le provette contate. Il valore
"% Uptake" per ogni campione è calcolato sulla base della seguente equazione:
% uptake = conteggio campione (campione) media contaggi siero di riferimento)
x % uptake riferimento (vedi etichetta sul flacone)
Esempio:
27860 x 37,5 (come indicato sull'etichetta)
26491
= 39,4% uptake (campione)
In Tabella 1 (Pagina 24) è riportata una tabella di dati tipici.
Considerazioni Procedurali
1.
I valori di T3 Uptake sono influenzati dai livelli di TBG.
2.
Steroidi, fentoina, salicilati, eparina ed alcuni altri farmaci influenzano il valore di T3 Uptake.
3.
Campioni contenenti radioattività residua da trattamenti antecedenti possono condurre a
risultati errati.
Valori Attesi
L'analisi di 106 campioni provenienti da soggetti eutiroidei ha indicato un intervallo di normalità
compreso fra 30 e 40%. Ogni laboratorio dovrebbe comunque stabilire il proprio intervallo di
normalità, impiegando l'intervallo suggerito unicamente a titolo di guida.
Caratteristiche Tecnologiche
Accuratezza:
Non esistono standard di riferimento per il T3 Uptake. Questo test è calibrato in unità arbitrarie al
fine di produrre un intervallo di normalità compreso fra 30 e 40%.
Precisione:
I risultati della valutazione della variabilità nel saggio sono i seguenti:
Controlli commerciali
1
NE di determinazioni
Media % T3 Uptake
D.S.
C.V. %
20
58,45
2,2
3,83
2
20
39,14
0,82
2,09
3
19
34,25
0,88
2,56
I risultati della valutazione della variabilità fra i saggi sono i seguenti:
Controlli commerciali
1
NE di determinazioni
Media % T3 Uptake
D.S.
C.V. %
54
56,4
2,33
4,13
2
54
38,8
1,28
3,30
3
54
32,9
1,30
3,96
TABLE 1
T3 Solid Phase Radioimmunoassay [125I]:
Typical Data
Counts
Average Counts
% T3 Uptake
26491
37.5 (from label)
Reference
Serum
1
2
26201
26780
Serum 1
3
4
27860
27592
39.4
39.1
Serum 2
5
6
22332
22438
31.6
31.8
Bibliografia:
1.
2.
3.
4.
Larsen, P.R., L-Triiodothyronine: Review of Recent Studies of its Physiology in Man.
Metabolism, 21, 1073, 1972.
Utiger, R.R., Serum Triiodothyronine in Man. Ann. Rev. Med.,25, 289, 1974.
Ekins, R.P., et al., The Sensitive and Precise Measurement of Serum Thyroxine by
Saturation Analysis. Clin. Biochem, 2, 253, 1969.
Selenkow, H.A., The Normal and Abnormal Thyroid. MEDCOM. Med. Update Series.
New York, 1973.
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