DAL PICK –UP
ALL’ EMBRYO
TRANSFER
Lab. Biologia della Riproduzione - Potenza
Fisiologia del gamete maschile
Lo spermatozoo è costituito da tre parti principali:
a) La testa: sede del patrimonio genetico;
b) Il pezzo intermedio: sede delle attività metaboliche, è costituito da un
asse centrale formato da due cilindri concentrici, quello più interno
costituito da 18 fibrille e quello più esterno da 9 fibrille;
c) La coda: organo che permette la motilità, la parte finale della coda
contiene solo la parte fibrillare assiale
Fisiologia del gamete femminile
La fisiologia della cellula uovo si differisce nei suoi tre stadi
maturativi, che sono:
Vescicola Germinale (GV): la cellula è immatura
per la fecondazione ed è ben visibile il nucleo ;
GV
Ovocita primario (MI): la cellula è immatura per la
fecondazione, è iniziata la prima divisione meiotica;
MI
Ovocita secondario (MII): la cellula è ora matura
M II
per la fecondazione, è avvenuta la prima divisione
meiotica con conseguente segmentazione cellulare
asimmetrica che porta alla formazione dell’ovocita
secondario e del 1° globulo polare;
Cause di Infertilità
Fattore Endocrino
Fattore Tubarico
Infertilità femminile
Fattore
Immunologico
• Endometriosi
• Fattore cervicale
• Fibromi o Miomi
• Utero setto
• Polipi
• Sinechie uterine
Fattore Uterino
Alterazioni nella produzione
del plasma seminale
Infertilità maschile
Malformazioni dell’apparato
riproduttivo
Cause congenite
e/o
Cause acquisite
• Cause infiammatorie
• Fattori endocrini
• Fattori immunologici
Anomalie:
• Congenite o da difetti genetici
• Indotte da varicocele
• Indotte da terapie chemio terapiche e radioterapiche
•Cause infiammatorie
• Cause traumatiche
Epidemiologia dell’infertilità
Sulla base della definizione, mancato
raggiungimento di una gravidanza dopo
12 mesi di rapporti non protetti e
possibilmente
mirati,
l’
incidenza
dell’infertilità nella popolazione italiana è
stata valutata pari al 11.3% delle coppie
di età compresa tra 25 e 44 anni. Tale
incidenza
tende
ad
aumentare
progressivamente con l'età passando dal
5.6% nella fascia di età compresa tra i
25 ed i 29 anni, al 11.7% nella fascia tra i
30 ed i 34 anni, al 13.7 % nella fascia tra
i 35 ed i 39 fino al 14.7% nella fascia di
età tra i 40 ed i 44 anni.
Le cause di infertilità possono riguardare
il partner maschile, quello femminile od
entrambi ma in circa il 17% dei casi non
è possibile riconoscere alcuna causa
precisa alla base della condizione (forme
idiotipiche). Tra le possibili cause di
infertilità si indicano essenzialmente i
seguenti fattori:
• Fattore Maschile;
• Fattore Femminile: derivante da
endometriosi fattore tubar. e
ovulatorio;
• Forme Idiotipiche;
• Altre Cause;
In cosa consiste la Fecondazione
Assistita ?
Induzione di un’ovulazione
multipla
Prelievo degli ovociti sotto controllo ecografico
Preparazione del liquido
seminale
FIVET
Incubazione in vitro
di ovociti e spermatozoi
con fertilizzazione spontanea
ICSI
Microiniezione di un singolo
spermatozoo nell’ ovocita
selezionato
Trasferimento in utero degli
embrioni
Controllo neuroendocrino della
funzione riproduttiva
Ambiente
esterno
SNC
Ipotalamo
Feed-back
Feedultracorto
Ipofisi
Feed-back
Feedlungo
FSH
LH
FeedFeedback
corto
Ovaio
Estrogeni
Progesterone
Strutture dell’apparato riproduttivo
(Endometrio, Muco cervicale)
PRELIEVO OVOCITARIO (PICK-UP)
Viene effettuato circa 36 ore dopo l'induzione
dell'ovulazione
Tecnica chirurgica con cui vengono aspirati tutti i
follicoli presenti per via trans
trans--vaginale sotto controllo
ecografico
Il liquido aspirato è inserito in una serie di provette
Il contenuto viene esaminato allo stereomicroscopio
stereomicroscopio,,
e tutti gli ovociti recuperati vengono messi in coltura,
coltura,
accuratamente contrassegnati con i dati della paziente
Nella FIVET gli ovociti messi in coltura (max 3)
vengono inseminati dopo 3-4 ore con il liquido seminale
Nella ICSI a circa 2 ore dal pick up si esegue lo
screening ovocitario
Tutti gli ovociti MATURI sovrannumerari vengono
crioconservati
Classificazione e Selezione degli
ovociti
Vescicola
Germinale
GV
Sono cinque gli
stadi
maturativi
dell’ovocita:
GV
Ovocita
Immaturo
MI
Ovocita
Maturo
MII
MI
Post –
Maturazione
M II
Degenerazione
Parametri di valutazione funzionale
del liquido seminale ottimale
VALORI DI RIFERIMENTO PER I PARAMETRI DEL
LIQUIDO SEMINALE (WHO)
Volume
≥ 2,0 ml
pH
8,0 ≥ X ≥ 7,2
Concentrazione di spermatozoi
≥20 × 106 spermatozoi/ml
Numero totale di spermatozoi
≥40× 106 spermatozoi per
campione
Motilità
≥50% con motilità progressiva
Morfologia
≥30% di forme normali
Vitalità
≥75%
Leucociti
≤1 × 106/ ml
MAR test (Mixed Antiglobulin
Reaction test)
≤50% di sperm. mobili con
particelle adese
Indicazione per la scelta della giusta tecnica
di PMA da applicare secondo linee guida
FIVET
ICSI
• Patologia tubarica
acquisita o congenita;
• Infertilità maschile di
grado severo;
• Infertilità maschile di
grado moderato;
• Azoospermie di varia
natura;
• Endometriosi trattata;
• Infertilità idiopatica
trattata;
• Fallimento del I livello;
VS
• Mancata o ridotta
fecondazione con cicli
FIVET ;
• Ridotto numero di
ovociti
FIVET
•
•
•
•
•
Fertilizzazione
In
Vitro
Embryo
Transfer
La FIVET consiste nel far
entrare
in
contatto
in
laboratorio (in vitro) i gameti
femminili (ovociti) e i gameti
maschili
(spermatozoi)
eiaculati
ICSI
•
•
•
•
Ovocita
Singolo
spermatozoo
Intra
Cytoplasmatic
Sperm
Injection
La ICSI comporta l’iniezione diretta di un singolo
spermatozoo all’interno del citoplasma ovocitario
ICSI
Per eseguire l’ICSI è necessario rimuovere tutte le cellule (dette
cellule del complesso cumulo - corona) che circondano
l’ovocita, e valutare la maturità ovocitaria
ovocitaria..
La ICSI viene effettuata grazie all’utilizzo di un micromanipolatore
collegato ad un computer che permette di visualizzare al meglio le
cellule
Fasi eseguite al micromanipolatore
Cosa avviene dopo la fertilizzazione
(giorno successivo al prelievo ovocitario)
A 16 – 20 ore dall’inseminazione (FIVET o ICSI) si esegue il
controllo della fertilizzazione (formazione dello zigote)
Dopo altri 2 o 3 giorni gli embrioni che si sono sviluppati,
vengono trasferiti nella cavità uterina della paziente tramite
catetere specifico (embryo transfer).
GRADI DI QUALITA’ DEGLI EMBRIONI
RIEPILOGANDO
