dal pick –up all` embryo transfer
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DAL PICK –UP ALL’ EMBRYO TRANSFER Lab. Biologia della Riproduzione - Potenza Fisiologia del gamete maschile Lo spermatozoo è costituito da tre parti principali: a) La testa: sede del patrimonio genetico; b) Il pezzo intermedio: sede delle attività metaboliche, è costituito da un asse centrale formato da due cilindri concentrici, quello più interno costituito da 18 fibrille e quello più esterno da 9 fibrille; c) La coda: organo che permette la motilità, la parte finale della coda contiene solo la parte fibrillare assiale Fisiologia del gamete femminile La fisiologia della cellula uovo si differisce nei suoi tre stadi maturativi, che sono: Vescicola Germinale (GV): la cellula è immatura per la fecondazione ed è ben visibile il nucleo ; GV Ovocita primario (MI): la cellula è immatura per la fecondazione, è iniziata la prima divisione meiotica; MI Ovocita secondario (MII): la cellula è ora matura M II per la fecondazione, è avvenuta la prima divisione meiotica con conseguente segmentazione cellulare asimmetrica che porta alla formazione dell’ovocita secondario e del 1° globulo polare; Cause di Infertilità Fattore Endocrino Fattore Tubarico Infertilità femminile Fattore Immunologico • Endometriosi • Fattore cervicale • Fibromi o Miomi • Utero setto • Polipi • Sinechie uterine Fattore Uterino Alterazioni nella produzione del plasma seminale Infertilità maschile Malformazioni dell’apparato riproduttivo Cause congenite e/o Cause acquisite • Cause infiammatorie • Fattori endocrini • Fattori immunologici Anomalie: • Congenite o da difetti genetici • Indotte da varicocele • Indotte da terapie chemio terapiche e radioterapiche •Cause infiammatorie • Cause traumatiche Epidemiologia dell’infertilità Sulla base della definizione, mancato raggiungimento di una gravidanza dopo 12 mesi di rapporti non protetti e possibilmente mirati, l’ incidenza dell’infertilità nella popolazione italiana è stata valutata pari al 11.3% delle coppie di età compresa tra 25 e 44 anni. Tale incidenza tende ad aumentare progressivamente con l'età passando dal 5.6% nella fascia di età compresa tra i 25 ed i 29 anni, al 11.7% nella fascia tra i 30 ed i 34 anni, al 13.7 % nella fascia tra i 35 ed i 39 fino al 14.7% nella fascia di età tra i 40 ed i 44 anni. Le cause di infertilità possono riguardare il partner maschile, quello femminile od entrambi ma in circa il 17% dei casi non è possibile riconoscere alcuna causa precisa alla base della condizione (forme idiotipiche). Tra le possibili cause di infertilità si indicano essenzialmente i seguenti fattori: • Fattore Maschile; • Fattore Femminile: derivante da endometriosi fattore tubar. e ovulatorio; • Forme Idiotipiche; • Altre Cause; In cosa consiste la Fecondazione Assistita ? Induzione di un’ovulazione multipla Prelievo degli ovociti sotto controllo ecografico Preparazione del liquido seminale FIVET Incubazione in vitro di ovociti e spermatozoi con fertilizzazione spontanea ICSI Microiniezione di un singolo spermatozoo nell’ ovocita selezionato Trasferimento in utero degli embrioni Controllo neuroendocrino della funzione riproduttiva Ambiente esterno SNC Ipotalamo Feed-back Feedultracorto Ipofisi Feed-back Feedlungo FSH LH FeedFeedback corto Ovaio Estrogeni Progesterone Strutture dell’apparato riproduttivo (Endometrio, Muco cervicale) PRELIEVO OVOCITARIO (PICK-UP) Viene effettuato circa 36 ore dopo l'induzione dell'ovulazione Tecnica chirurgica con cui vengono aspirati tutti i follicoli presenti per via trans trans--vaginale sotto controllo ecografico Il liquido aspirato è inserito in una serie di provette Il contenuto viene esaminato allo stereomicroscopio stereomicroscopio,, e tutti gli ovociti recuperati vengono messi in coltura, coltura, accuratamente contrassegnati con i dati della paziente Nella FIVET gli ovociti messi in coltura (max 3) vengono inseminati dopo 3-4 ore con il liquido seminale Nella ICSI a circa 2 ore dal pick up si esegue lo screening ovocitario Tutti gli ovociti MATURI sovrannumerari vengono crioconservati Classificazione e Selezione degli ovociti Vescicola Germinale GV Sono cinque gli stadi maturativi dell’ovocita: GV Ovocita Immaturo MI Ovocita Maturo MII MI Post – Maturazione M II Degenerazione Parametri di valutazione funzionale del liquido seminale ottimale VALORI DI RIFERIMENTO PER I PARAMETRI DEL LIQUIDO SEMINALE (WHO) Volume ≥ 2,0 ml pH 8,0 ≥ X ≥ 7,2 Concentrazione di spermatozoi ≥20 × 106 spermatozoi/ml Numero totale di spermatozoi ≥40× 106 spermatozoi per campione Motilità ≥50% con motilità progressiva Morfologia ≥30% di forme normali Vitalità ≥75% Leucociti ≤1 × 106/ ml MAR test (Mixed Antiglobulin Reaction test) ≤50% di sperm. mobili con particelle adese Indicazione per la scelta della giusta tecnica di PMA da applicare secondo linee guida FIVET ICSI • Patologia tubarica acquisita o congenita; • Infertilità maschile di grado severo; • Infertilità maschile di grado moderato; • Azoospermie di varia natura; • Endometriosi trattata; • Infertilità idiopatica trattata; • Fallimento del I livello; VS • Mancata o ridotta fecondazione con cicli FIVET ; • Ridotto numero di ovociti FIVET • • • • • Fertilizzazione In Vitro Embryo Transfer La FIVET consiste nel far entrare in contatto in laboratorio (in vitro) i gameti femminili (ovociti) e i gameti maschili (spermatozoi) eiaculati ICSI • • • • Ovocita Singolo spermatozoo Intra Cytoplasmatic Sperm Injection La ICSI comporta l’iniezione diretta di un singolo spermatozoo all’interno del citoplasma ovocitario ICSI Per eseguire l’ICSI è necessario rimuovere tutte le cellule (dette cellule del complesso cumulo - corona) che circondano l’ovocita, e valutare la maturità ovocitaria ovocitaria.. La ICSI viene effettuata grazie all’utilizzo di un micromanipolatore collegato ad un computer che permette di visualizzare al meglio le cellule Fasi eseguite al micromanipolatore Cosa avviene dopo la fertilizzazione (giorno successivo al prelievo ovocitario) A 16 – 20 ore dall’inseminazione (FIVET o ICSI) si esegue il controllo della fertilizzazione (formazione dello zigote) Dopo altri 2 o 3 giorni gli embrioni che si sono sviluppati, vengono trasferiti nella cavità uterina della paziente tramite catetere specifico (embryo transfer). GRADI DI QUALITA’ DEGLI EMBRIONI RIEPILOGANDO
