HBV_.La_Frazia

EPATITI VIRALI
Virus
Famiglia
Genoma
Trasmissione
HAV
Picornaviridae
RNAss +
orofecale
HBV
Hepadnaviridae
DNA ds
parenterale
HCV
Flaviviridae
RNA ss +
parenterale
HDV
Flaviviridae
RNA ss +
parenterale
HEV
Caliciviridae
RNA ss +
orofecale
HGV
Flaviviridae
RNA ss +
parenterale
VIRUS DELL’EPATITE B
(Scoperte scientifiche)
1) 1963
Blumberg
Antigene Australia
(HBsAg)
2) 1973
Dane
particelle virali
3)
Kaplan
polimerasi virale
2) 1979
Rutter et al. clonaggio e sequenziamento del
genoma virale
HEPADNAVIRIDAE
Caratteristiche comuni
1- DNA a doppio filamento circolare incompleto
2- Genoma “compatto” con regioni di overlapping
3- Proteina virale P con attività di Polimerasi/Trascrittasi
inversa legata covalentemente al filamento negativo di DNA
4- Produzione di un RNA pregenomico intermedio nella
replicazione del genoma virale
5- Produzione eccedente di particelle subvirali non infettanti
6- Ristretto spettro d’ospite
7- Pronunciato tropismo per gli epatociti
8- Infezioni persistenti
FAMIGLIA HEPADNAVIRIDAE
Avihepadnavirus
HEPADNAVIRIDAE
Virus
Ospite
DHBV
Anatra
HHBV
Airone
GHBV
Oca
CHBV
Gru
WHV
Marmotta
GSHV
Scoiattolo
gigante
AHV
Scimmia
antropomorfa
HBV
Uomo
Orthohepadnavirus
HBV
FAMIGLIA
Hepadnaviridae (epatite dello scoiattolo, dell’anatra e del woodchuck)
IDENTIFICAZIONE
Blumberg
OSPITE
Uomo – scimmia (tropismo = fegato – pancreas) non nel babbuino
STRUTTURA
Sferica (42nm = particella di Dane)
INVOLUCRO PERICAPSIDICO
GENOMA
+
DNA, parzialmente ds circolare, 3,200 Kbp (+strand = 50-80% -strand)*
COLTIVAZIONE IN VITRO
STABILITA’ A:
Congelamento: +
Calore = +
Etere = +
pH acido = +
limitata
Caratteristiche chimico-fisiche dei virioni
1- Resistenza agli acidi: pH 2,4 per 6 ore
2- Resistenza al calore: 30°C per 6 mesi
60°C per 10 ore
98°C per 1 minuto
3- Inattivazione parziale quando la carica virale è alta
Caratteristiche biologiche dei virioni
1- HBV cresce su colture primarie e fetali di epatocita
2- Coltivazione in vitro è difficoltosa perché questo virus
non cresce su colture continue
Genotipi
1- Genotipo A e D
Europa
2- Genotipo D ed E
Africa
3- Genotipo B, C, D
Asia
4- Genotipo C
Australia
5- Genotipo B
Alaska
6- Genotipo F, G, H
America Centrale e Sud
Serotipi
Epitopo 1: a (determinanti di gruppo tipo-specifici)
HBsAg
Epitopo 2: d ; y
Epitopo 3: w ; r
Serotipi: adw adr ayw ayr
Sottotipi (ayw 1, ayw2, ayw3, ayw4, ayr,adw 2, adw4, adr1)
Organizzazione delle ORFs
0
precore
1000
2000
core
preS1 preS2
3000
3220 Kbp
S
Polymerase
X
X start
Esperimento di Summers & Mason (1982)
HBV si comporta come un retrovirus al contrario
La sintesi del filamento negativo è resistente all’actinomicina D
La sintesi del filamento positivo è sensibile all’actinomicina D
Identificazione di ibridi DNA/RNA
Trascritti virali
mRNA subgenomici
mRNA 2.1 Kb
ORF S/ pre S2
mRNA 2.4 Kb
ORF pre S1
mRNA 0.7 Kb
ORF X
mRNA genomici
mRNA 3.5 Kb
ORF pre C/ C
ORF C/P
mRNA 3.2 Kb
mRNA pg
Proteine dell’envelope
ORFs: Pre-S1/Pre-S2/S
Pre-S1 RNA (2.4kb)
Pre-S2/S RNA (2.1kb)
LHBs
PreS1
MHBs
PreS2
S
PreS2
SS
SHBs
S
Proteine del capside e polimerasi
ORFs: Pre-C/C/C-P/ ORF
PreCore mRNA
Pregenomic RNA
Monocistronic
C
P25
Pre C
Cytosol
Arg
Golgi
protease
Bicistronic
1 or 2 copies
Core
P21 HBcAg
180 copies
P16, P18, P20 Secreted
as HBeAg
(3.5kb)
Polymerase
90kD
POLIMERASI VIRALE
Terminal
Protein
1
Spacer
183
POL/RT
349
RNaseH
692
845 a.a.
Funzione della polimerasi :
1) Terminal Protein: dominio NH2 terminale che lega 5’ filamento –
2) Spacer
3) Pol/RT: Polimerasi e Retrotrascrittasi
4) RNAase H: degradazione RNA nell’ibrido DNA/RNA
Incapsidamento RNA pregenomico
Sequenza
e
PATOGENESI
Infezione primaria
Infezione acuta
Risoluzione
della malattia
(90%)
Infezione
Cronica
(9%)
Epatite fulminante
(1%)
Risoluzione Persistente Riattivazione
della malattia
(50%)
Asintomatica
AZIONE DI FARMACI ANTIVIRALI A LIVELLO DELLA POLIMERASI
HBV
1.
VACCINO INATTIVATO
Plasma umano
Ultracentrifugazione
cromatografia
Isolamento particelle incomplete sferiche 22nm
Inattivazione chimica e al calore
2. VACCINO SINTETICO
Plasmide con gene HBsAg in Saccharomyces cerensiae
lisato
cromatografia
HBsAg
Sterilizzazione per filtrazione
inattivazione
IMMUNOGLOBULINE ANTI HBV (H BIG)
PROTEINA HBV X
Domino Regolatorio
Dominio di Transattivazione
X
NH2
CO2H