Domande esame Biotec. Micr.
DOMANDA 1
Vi viene richiesto di produrre NF-xyz, un neurotrasmettitore umano costitutito da 78 amino acidi, per il
suo utilizzo in industria farmaceutica. La forma attiva di NF-xyz contiene due ponti disolfuro.
Suggerite uno o più programmi di lavoro per l’espressione di NF-xyz in Escherichia coli, indicando le
possibili difficoltà.
DOMANDA 2
La figura sotto riportata mostra la sequenza a valle del promotore inducibile pCold (non riportato).
Questo plasmide viene utilizzato per l’espressione di geni eterologhi in Escherichia coli.
Le sequenze contrassegnate con “F Primer” e “R Primer” sono utilizzate per sequenziare frammenti di
DNA inseriti per l’espressione di proteine di interesse.
La sequenza contrassegnata con TEE è un “translation enhancing factor”.
La sequenza nucleotidica contrassegnata con “Factor Xa” codifica per una sequenza amminoacidica
riconosciuta dalla proteasi Fattore Xa.
Suggerire una funzione per:
la sequenza sottolineata con SD;
la sequenza indicata con His-Tag;
il ruolo della sequenza “Factor Xa”;
la presenza di numerosi siti di restrizione consecutivi;
la presenza di un terminatore di trascrizione.
Vi si chiede di clonare nel plasmide pCold il gene carO, responsabile di resistenza ad antibiotici nel
batterio A. baumannii, in modo da poter esprimere la proteina con un “histidine-tag”. La sequenza del
gene è riportata qui sotto. Proponete una strategia dettagliata per il clonaggio.
carO
ATGGCTGATGAAGCTGTTGTTCATGACAGTTATGCATTCGATAAAAACCAATTAATTCCA
GTAGGCGCTCGTGCTGAAGTAGGTACTACAGGTTACGGTG GTGCTTTGTTATGGCAAGCA
AACCCATATGTAGGTTTAGCATTGGGTTATAACGGTGGTGACATTTCTTGGCGAGATGAC
TTATCAATTAATGGTACTAAATATGACGTTGATATGGATAATAACAACGTATATTTAAAT
GCTGAGATTCGCCCATGGGGTGCAAGTACTAACCGTTGGGCTCAAGGCTTATATGTAGCT
GCAGGTGCGGCGTATTTAGATAACGATTATGACCTAACTAAACGTTCATCAGATGGTACT
ATCAAAATTAACGGAACAAATTATTCTTATAATGGTTCTGTAAATGGTCAGTTAAGTTAC
AAAAATGATATCGCTCCGTACTTAGGTTTTGGTTTCGCACCTAAAATCAATAAAAACTGG
GGTGTATTTGGTGAAGTAGGCGCTTACTACACTGGTAACCCAACTGTAGAGTTAGATAAA
CAAGGTACTTTTGTTAATGCTGCAGGTGGTAATGCGGATGCTGACTTACGTGCTGAAGAA
AACAAAATCCGTAATGATGATAAATACAAATGGTTCCCAGTGGGTAAAGTTGGTGTAAAC
TTCTACTGGTAA
DOMANDA 3
Vi viene richiesto di mettere a punto un sistema di monitoraggio per il rilascio nell’ambiente di cadmio
(Cd2+). Suggerite una strategia e descrivete un semplice protocollo per i test di monitoraggio.
