DNA ricombinante - Liceo Foscarini

Lezioni preparatorie per gli studenti
2
Stage presso il Life Learning Center
di Bologna.
A.S. 2004-05
la cellula batterica
tecnica DNA ricombinante
Il DNA delle procellule
Nei batteri il programma viene
parete
registrato su di una lunga
cellulare
molecola di DNA, chiusa ad
anello  cromosoma batterico
Nella cellula batterica possono
essere presenti altri piccoli anelli
di DNA che portano poche
informazioni -geni-  i plasmidi
I plasmidi possono passare da una
cellula batterica a un’altra 
trasformazione batterica
plasmide
cromosoma
batterico
Coniugazione batterica
I batteri possono “connettersi” mediante un tubicino pilo- attraverso il quale uno dei due batteri, quello in
grado di costruire il pilo, invia all’altro una copia di
un tratto del suo DNA, in modo che il secondo
acquisisca le informazioni registrate in esso
Inserzione di un gene in un plasmide
DNA -gene- da inserire nel plasmide
plasmide
Gene inserito in plasmide
Gli enzimi di restrizione
riconoscono una sequenza
nucleotidica e tagliano il
DNA “di sbieco”, in modo
che il tratto estraneo di
DNA, tagliato nello stesso
modo, si possa inserire a
baionetta.
Un capo di una delle molecole
di DNA (a catena singola) si
complementa con un capo
dell’altra molecola, sempre a
catena singola
tecnica DNA
ricombinante
Inserzione di un gene
in un batterio
3- enzima ecoRI riconosce
e taglia(restrizione) il DNA
nelle sequenze ecoRI
estremità adesive
“a baionetta”
1- plasmide con gene per la
resistenza a un antibiotico
2- Gene da inserire
compreso tra specifiche DNA estraneo
sequenze nucleotidiche
gene
ecoRI
da inserire
4- il gene estraneo viene
inserito nel plasmide
 DNA ricombinante
5- il plasmide viene inserito
in cellule batteriche che si
riproducono e danno un clone
Cellula
batterica
Cromosoma
batterico
riproduzione
6- la coltura batterica viene trattata con
l’antibiotico: solo i batteri che ospitano
il DNA ricombinante sopravvivono
clone
Inserimento del gene per l’
insulina in un batterio
Con la tecnica del DNA ricombinante
si ottengono:
Ormoni
Insulina
GH e antiGH
enzima restrizione
Gene umano inserzione gene
Plasmide
Anticorpi
monoclonali
enzimi
vaccini
DNA ricombinante
inserzione plasmide
in batterio
Insulina umana Clonazione
insulina umana
Organizzazione
del DNA
Il DNA degli eucarioti è discontinuo
In ogni gene si alternano
tratti codificantiesoni
Gene –DNA-
e tratti non codificanti  introni
esoni
Tutto il tratto DNA che corrisponde
al gene viene ricopiato in RNA
mRNA
primitivo
Nel citoplasma l’mRNA primitivo viene
tagliato dagli enzimi di restrizione
e i tratti corrispondenti agli esoni
vengono uniti da enzimi ligasi
Si ottiene mRNA da inviare ai ribosomi
introni
Sintesi RNA nel nucleo
- enzimi di restrizione
(“taglia”)
- ligasi (“cuci”)
mRNA maturo