LABORATORIO DI FISIOLOGIA VEGETALE
METODI DI DOSAGGIO BIOLOGICO
DEGLI ORMONI
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TEST BIOLOGICI
Gli ormoni vegetali sono rappresentati da 6 classi di
composti:
AUXINE
CITOCHININE
GIBERELLINE
ACIDO
ABSCISSICO
ETILENE
BRASSINOSTEROIDI
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TEST BIOLOGICI
Principio:
Un test biologico utilizza porzioni di
piante o tessuti vivi per determinare
l’attività ormonale di un estratto.
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TEST BIOLOGICI
Caratteristiche
Un test biologico deve avere delle caratteristiche:
Specificità:
la risposta deve essere specifica rispetto all’ormone,
cioè diversi ormoni non devono dare la stessa risposta
Sensibilità:
la
risposta
deve
avvenire
già
a
bassissime
concentrazioni, nell’ordine nM
Riproducibilità:
ripetendo il test su materiale differente la risposta
deve essere comparabile
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AUXINA
L’auxina naturale è l’acido indolacetico
(IAA)
prodotto
per
deaminazione
e
successiva decarbossilazione e ossidazione
del triptofano
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AUXINA
Effetti fisiologici principali:
Processi
di distensione cellulare
Crescita
radicale
Dominanza
apicale
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AUXINA
Test biologici:
Curvatura
Test
del fusto di pisello sezionato
di diminuzione del pH del mezzo di incubazione
Crescita
frumento
per allungamento del coleottile di avena o
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Curvatura del fusto di pisello sezionato
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TEST BIOLOGICO DEL
COLEOTTILE D’AVENA
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TEST BIOLOGICO DEL COLEOTTILE
D’AVENA
Il
coleottile
d’avena
è
sensibile
all’incremento
della
concentrazione auxinica, rispondendo con un allungamento
proporzionale alla concentrazione auxinica nel mezzo
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TEST BIOLOGICO DEL COLEOTTILE D’AVENA
Metodo
Per ottenere risultati statisticamente significativi bisogna
usare un numero congruo di sezioni di coleottile, ossia
almeno 20 per ogni concentrazione provata poi in doppio (40
sezioni per concentrazione testata).
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TEST BIOLOGICO DEL COLEOTTILE D’AVENA
Materiali necessari:
Coleottili
eziolati d’avena ottenuti germinando al buio per 5 giorni i
semi in Vermiculite;
Capsule
Petri;
Soluzione
Soluzioni
Lame
di saccarosio al 3%;
a concentrazioni note e scalari di Auxina da 10-8 a 10-4 M;
accoppiate a 1 cm di distanza
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TEST BIOLOGICO DEL COLEOTTILE D’AVENA
Metodologia
Porre in un Baker 200 ml della soluzione al 3% di saccarosio
e 240 coleottili recisi a 1 cm; dopo 20’ in agitazione per
allontanare l’auxina endogena, porre in 12 differenti capsule,
contenenti soluzioni zuccherine a concentrazioni crescenti di
auxina (da 0 a 10-4 M) 20 coleottili. Dopo 24 ore misurare
con un righello le lunghezze.
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TEST BIOLOGICO DEL COLEOTTILE D’AVENA
Soluzioni 10-3 e 10-5 M di
auxina
Soluzione al 3%
di saccarosio
Beker
Capsule Petri con
10 ml di soluzioni
crescenti di
Auxina
Lame accoppiate ad 1 cm
di distanza
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TEST BIOLOGICO DEL COLEOTTILE D’AVENA
Metodo
Sul bancone è presente una soluzione al 3% di saccarosio, una
soluzione 10-3 ed un’altra 10-5 M di auxina di cui vanno utilizzate le
quantità indicate:
Controllo 10‐4 M 10‐5 M 10‐6 M 10‐7 M 10‐8 M Auxina 0 ml 1 ml 0,1 ml 1* ml 0,1* ml 0,01* ml Saccarosio 3% 10 ml 9 ml 9,9 ml 9 ml 9,9 ml 9,99 ml * Prelevare dalla soluzione di auxina 10-5 M
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Risultati tipo ottenuti con 20 coleottili
Campione n.
Controllo
Auxina
10-8 M
Auxina
10-7 M
Auxina
10-6 M
Auxina
10-5 M
Auxina
10-4 M
1
1,1
1,15
1,3
1,41
1,43
1,45
2
1,2
1,25
1,42
1,54
1,56
1,58
3
1,4
1,46
1,65
1,79
1,82
1,85
4
1,3
1,36
1,53
1,66
1,69
1,72
5
1,4
1,46
1,65
1,79
1,82
1,85
6
1,1
1,15
1,3
1,41
1,43
1,45
7
1,3
1,36
1,53
1,66
1,69
1,72
8
1,2
1,25
1,42
1,54
1,56
1,58
9
1,1
1,15
1,3
1,41
1,43
1,45
10
1,1
1,15
1,3
1,41
1,43
1,45
11
1,2
1,25
1,42
1,54
1,56
1,58
12
1,1
1,15
1,3
1,41
1,43
1,45
13
1,1
1,15
1,3
1,41
1,43
1,45
14
1,3
1,36
1,53
1,66
1,69
1,72
15
1,3
1,36
1,53
1,66
1,69
1,72
16
1,2
1,25
1,42
1,54
1,56
1,58
17
1,1
1,15
1,3
1,41
1,43
1,45
18
1,3
1,36
1,53
1,66
1,69
1,72
19
1,2
1,25
1,42
1,54
1,56
1,58
20
1,1
1,15
1,3
1,41
1,43
1,45
Media
1,21
1,26
1,42
1,54
1,57
1,59
Dev.st.
0,11
0,11
0,12
0,13
0,14
0,14
0
5
21
33
36
38
Differenza %
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