AB Pfu Polimerasi
cod. 06-33
Descrizione e caratteristiche tecniche:
AB Pfu Polimerasi, isolata dall’archebatterio ipertermofilo Pyrococcus furiosus, è
una Polimerasi termostabile di circa 92 kDa.
L’enzima catalizza a 75°C la reazione di polimerizzazione dei nucleotidi in DNA a
doppio filamento in direzione 5’3’ in presenza di ioni magnesio,
preferibilmente MgSO4. Diversamente dalla Taq DNA polimerasi, AB Pfu
Polimerasi presenta un’attività esonucleasica 3’5’ che le consente di correggere
l’errata incorporazione di nucleotidi (proofreading activity). Questo significa che
gli amplificati ottenuti con AB Pfu Polimerasi sono 12 volte più fedeli allo stampo
di quelli prodotti dalla Taq DNA polimerasi.
Gli amplificati ottenuti con questo enzima presentano estremità piatte (blunt).
AB Pfu Polimerasi possiede una velocità di estensione inferiore a quella della Taq
DNA polimerasi (0.5kb/min), quindi si raccomanda di utilizzare un tempo di
estensione di 2 min per ogni 1 Kb di DNA da polimerizzare.
Applicazioni:
si raccomanda l’utilizzo di AB Pfu Polimerasi per quelle reazioni di amplificazione
in cui è richiesta una sintesi ad alta fedeltà.
Error rate: 0.2 x10-5
Allestimento della reazione:
Per reazioni condotte in 50 uL di volume finale, utilizzare 0,16 - 0,6
unità/reazione per amplificazione di DNA genomico (10 ng); 1,25 - 2,5
unità/reazione per amplificazione di DNA plasmidico (1-2 ng).
La concentrazione di AB Pfu Polimerasi influenza l’efficienza della reazione.
Allestire la reazione di amplificazione in ghiaccio; evitare di mantenere a
temperatura ambiente, per tempi prolungati, la reazione in cui sia già stato
aggiunto l’enzima; porre la reazione nel termociclatore preriscaldato a 95°C. Al
termine dei cicli termici, la reazione deve essere stoppata mediante l’aggiunta di
EDTA o rapido congelamento.
Si raccomanda inoltre di utilizzare per la reazione dei dNTPs estremamente puri
in quanto tale enzima si è rivelato essere particolarmente sensibile alle impurità
presenti in alcune soluzioni di dNTPs.
Concentrazione: 5 U/µl
Buffer di conservazione:
Tris-HCl (pH 8.2), 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0.1% Nonidet P40, 0.1% Tween 20,
50% glicerolo.
Soluzioni fornite:
Buffer 10x: 200 mM Tris-HCl (pH 8.8), 100 mM KCl, 100 mM (NH4)2SO4, 20 mM
MgSO4, 1.0 % Triton X-100, 1 mg/ml nuclease-free BSA.
MgSO4: soluzione 100 mM.
Condizioni di conservazione:
La temperatura di conservazione raccomandata è di – 20° C.
CODICE
06-33-050
06-33-100
DESCRIZIONE
AB Pfu Polimerasi (5U/µl)
AB PFU
CONFEZIONE
500 U
1.000 U
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06-33_Datasheet_AB Pfu Polimerasi_120912
