Gli Enzimi – Cinetica

CINETICA ENZIMATICA
STUDIA LA VELOCITÁ
DELLE REAZIONI
ENZIMATICHE.
VELOCITÁ
E' DEFINITA DAL NUMERO DI
MOLI DI PRODOTTO CHE SI
FORMANO IN UN SECONDO.
VELOCITÁ INIZIALE (V0)
LA VELOCITÁ DEVE ESSERE
MISURATA A TEMPI BREVI,
QUANDO CIOÈ SI È CONSUMATA
SOLO UNA PICCOLA PARTE DEL
SUBSTRATO.
LA VELOCITA’ MASSIMA, Vmax,
VIENE RAGGIUNTA QUANDO
TUTTI I SITI SONO
SATURATI DAL SUBSTRATO
EFFETTO DI
SATURAZIONE
LA RELAZIONE TRA LA VELOCITA’
INIZIALE E LA CONCENTRAZIONE DEL
SUBSTRATO È ESPRESSA DALLA
EQUAZIONE DI MICHAELIS-MENTEN
LA Km PUO’ ESSERE DEFINITA
COME QUEL VALORE DI
CONCENTRAZIONE DEL
SUBSTRATO A CUI:
LA REAZIONE PROCEDE AD UNA
VELOCITÁ PARI A METÁ DELLA
Vmax
LA Vmax VIENE RAGGIUNTA
QUANDO TUTTI I SITI SONO
SATURATI CON IL
SUBSTRATO, CIOÈ QUANDO
[S] È MOLTO PIU' GRANDE
DELLA Km
LINEWEAVER E BURK HANNO ELABORATO
UN METODO PIÚ ACCURATO DI
DETERMINAZIONE DEI PARAMETRI
CINETICI, CHE CONSISTE NEL
RIPORTARE IN GRAFICO, NON V ED [S],
MA I LORO RECIPROCI 1/V e 1/[S].
GRAFICO DI LINEWEAVER-BURK
O DEI DOPPI RECIPROCI
COSÍ FACENDO SI TRASFORMA
L'EQUAZIONE DI UNA IPERBOLE
NELL'EQUAZIONE DI UNA RETTA
REAZIONI A DUE SUBSTRATI
E DUE PRODOTTI
L'INIBIZIONE ENZIMATICA È
CLASSIFICATA IN DUE TIPI:
- IRREVERSIBILE
- REVERSIBILE
ESEMPIO TIPICO DI INIBITORE
IRREVERSIBILE È IL
DIISOPROPILFLUOROFOSFATO CHE SI
LEGA COVALENTEMENTE CON UN
RESIDUO DI Ser DELLE PROTEASI
SERINICHE
L'ASPIRINA, ACETILANDO IL
GRUPPO OSSIDRILICO DI UN
RESIDUO DI SERINA, BLOCCA
L'ATTIVITÁ DELLA
CICLOOSSIGENASI ED INIBISCE
COSÌ LA SINTESI DELLE
PROSTAGLANDINE.
INIBIZIONE REVERSIBILE
VIENE FONDAMENTALMENTE
DISTINTA IN DUE TIPI:
- COMPETITIVA
- NON COMPETITIVA
INIBIZIONE COMPETITIVA
L'INIBITORE PRESENTA ANALOGIA
STRUTTURALE CON IL SUBSTRATO
E QUINDI COMPETE CON QUESTO
PER IL SITO ATTIVO
GLI ANALOGHI DEL
DIIDROFOLATO, COME IL
METOTREXATO, SONO DEI
POTENTI INIBITORI COMPETITIVI
DELLA DIIDROFOLATO
REDUTTASI. TALI MOLECOLE
VENGONO UTILIZZATE NEL
TRATTAMENTO CHEMIOTERAPICO
DEI TUMORI.
ESSENDO ANALOGHI DELL'ACIDO
PARA-AMINOBENZOICO (PABA), I
SULFAMIDICI INIBISCONO
COMPETITIVAMENTE LA SINTESI
DEL FOLATO, ESERCITANDO
UN'AZIONE BATTERIOSTATICA.
INIBIZIONE NON COMPETITIVA
L'INIBITORE ED IL SUBSTRATO SI
POSSONO LEGARE
SIMULTANEAMENTE ALL'ENZIMA.
CIÒ SIGNIFICA CHE I SITI DI
LEGAME SONO DISTINTI.
INIBIZIONE SUICIDA
UN ENZIMA CONVERTE UN
SUBSTRATO IN UN INIBITORE
REATTIVO CHE IMMEDIATAMENTE
BLOCCA LA SUA ATTIVITÁ
CATALITICA.
L'ALLOPURINOLO, ANALOGO DELLA
IPOXANTINA, AGISCE PRIMA
COME SUBSTRATO E POI COME
INIBITORE DELLA XANTINA
OSSIDASI (INIBIZIONE SUICIDA).
VIENE IMPIEGATO NEL
TRATTAMENTO DELLA GOTTA.
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