Metodo - Radim

SEAC Srl
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NUMERO DI DIBUCAINA
Metodo con inibitore dibucaina
Kit per la determinazione del numero di dibucaina nel siero o nel plasma.
90010330D
La colinesterasi (CHE) catalizza la reazione di idrolisi della butirriltiocolina butirrato
e tiocolina. Quest’ultima riduce il potassio esacianoferrato III
(giallo)
in
esacianoferrato II (incolore). La diminuzione di assorbanza che viene misurata a
405nm è quindi proporzionale all’attività della colinesterasi.
CHE
Butirriltiocolina + H2O
NORMALE
ETEROZIGOTI
OMOZIGOTI ATIPICI
Numero di dibucaina
> 75
35 – 75
> 35
I valori qui riportati devono considerarsi indicativi, in quanto ogni laboratorio
dovrebbe stabilire l’intervallo di riferimento in relazione alla propria area geografica.
La colinesterasi può essere presente nel siero nella forma normale o in forme
varianti.
La colinesterasi normale viene inibita per azione della dibucaina, lasciando libere di
reagire le colinesterasi varianti, la cui attività può essere determinata come di
seguito riportato.
Kit:
Ditiobis (colina) + H2O + 2[Fe(CN)6]4-
(incolore)
(giallo)
Dibucaina idrocloruro
Eccipienti
REATTIVI - CONSERVAZIONE E STABILITA’
Reagenti aperti:
Acido Butirrico + Tiocolina
2Tiocolina + 2OH- + 2[Fe(CN)6]3-
REATTIVI - CONCENTRAZIONE INIZIALE
Reagente 1
Reagente di lavoro:
* EU-Dir 1999/11 Commission Directive of March 1999 adapting to technical
progress the principles of good laboratory pratice as specified in Council Directive
87/18/EEC.
SMALTIMENTO RIFIUTI
Il prodotto deve essere smaltito secondo le locali normative in materia di gestione
dei rifiuti.
VALORI DI RIFERIMENTO
1x3 mL
PRINCIPIO ANALITICO
Dopo la raccolta separare al più presto il siero o il plasma dagli eritrociti.
L’attività dell’enzima aumenta di circa il 25-30% al giorno se il siero viene
lasciato a contatto con i globuli rossi..
L’attività della colinesterasi è stabile nel campione in esame una settimana se
conservato a +2-8°C.
Conservare a +15-25°C.
Stabile fino alla data di scadenza riportata sulla
confezione.
Dopo l’apertura, i flaconi sono stabili fino alla data di
scadenza indicata sul flacone se richiusi immediatamente
dopo il prelievo e protetti da contaminazione,
evaporazione, luce diretta e conservati alla temperatura
riportata.
3 giorni a +2-8°C.
PROCEDIMENTO ANALITICO
Determinare l’attività della Colinesterasi (ATTIVITA’ SENZA INIBITORE) nel
campione in esame utilizzando il kit COD.CCD022 “COLINESTERASI 8x20mL” .
= 405(400-440) nm
1 cm
37°C
Contro acqua distillata
cinetica (in decremento)
Lunghezza d’onda
Cammino ottico
Temperatura
Lettura
Reazione
Portare i reattivi a +15-25°C prima del loro utilizzo.
BIANCO
CAMPIONE
Reagente di lavoro
1000
µL
Acqua distillata
1000
µL
Campione
15
µL
Agitare bene e incubare a 37°C per 60 secondi.
Leggere il decremento di D.O. a 405 nm contro bianco al tempo 0 e dopo 1, 2, 3
minuti. Calcolare il E/min per determinare l’attività enzimatica (ATTIVITA’ CON
INIBITORE).
ATTIVITA' CON INIBITORE (U/L) = E/min x 62000
CALCOLO DEI RISULTATI ANALITICI
Siero, plasma:
PRESTAZIONI DEL METODO (COD. CCD022 – COLINESTERASI 8x20 mL)
REATTIVI - PREPARAZIONE DEL REAGENTE DI LAVORO
SOSTANZE INTERFERENTI
non interferisce fino alla concentrazione di:
Emoglobina
180
mg/dL
Trigliceridi
1000
mg/dL
PRECISIONE INTRA-ASSAY
Controllo:
Low
High
n:
20
20
MEDIA:
3707
5197
U/L
D.S.:
14,18
60,75
C.V.(%):
0,38
1,17
PRECISIONE INTER-ASSAY
Controllo:
Low
High
n:
20
20
MEDIA:
3708
5212
U/L
D.S.:
31,77
72,01
C.V.(%):
0,86
1,38
CORRELAZIONE
Valutazioni effettuate sugli stessi campioni hanno fornito i seguenti parametri di correlazione
con un metodo equivalente preso a riferimento:
y = 1,0107x - 79,747
R2 = 0,9995
Ricostituire un flacone di Reagente per la determinazione del numero di dibucaina
con 3 mL del reagente di lavoro del kit COD.CCD022 “COLINESTERASI 8x20mL”.
n
LINEARITA’:
SENSIBILITA’:
RANGE DI MISURA:
= 20
12000
12
12 - 12000
U/L
U/L
U/L
CAMPIONE
Siero o plasma anticoagulatocon eparina o EDTA.
Note:
Non utilizzare fluoruro di sodio come anticoagulante poiché inibisce l’attività
dell’enzima.
Non utilizzare campioni emolizzati.
Cod.90010330 Rev.00
Il fattore di 62000 è riferito alla temperatura di 37°C.
Per il calcolo del Numero di dibucaina applicare la seguente formula:
Numero di dibucaina = 100
REATTIVI - PRECAUZIONI E AVVERTENZE
- La presente metodica descrive l’utilizzo del kit in manuale. Per l’utilizzo mediante
analizzatori automatici consultare le applicazioni specifiche.
- Non utilizzare il reagente di lavoro se l’estinzione del reattivo dovesse essere < di
1,000 a 405 nm.
- Sono disponibili a richiesta le schede di controllo qualità dei reagenti, fare
riferimento al n° di lotto riportato in etichetta.
MATERIALI AUSILIARI NON CONTENUTI NEL KIT
Pipette automatiche
Fotometro
Cuvette monouso (cammino ottico = 1cm).
Termostato 37°C
PRECAUZIONI ED AVVERTENZE
In riferimento al DLg. N.285 art.28 Legge n.128 del 1998 il prodotto non è
classificato come sostanza pericolosa. Il prodotto contiene componenti non attivi
(detergenti, conservanti ecc..) la cui concentrazione totale è inferiore ai limiti
riportati dalle Direttive 67/548/CEE e 88/379/CEE e succ. mod. sulla classificazione,
imballaggio ed etichettatura delle sostanze pericolose.
Maneggiare tuttavia il prodotto con cautela secondo le norme di buona pratica di
laboratorio(*), evitando l’ingestione, il contatto con pelle, gli occhi e le mucose.
ATTIVITA' CON INIBITORE
• 100
ATTIVITA' SENZA INIBITORE
CONTROLLO DI QUALITA’
E’ necessario eseguire i controlli ad ogni utilizzo del kit e verificare che i valori
ottenuti siano inclusi nell’intervallo di riferimento riportato nelle istruzioni d’uso.
BIBLIOGRAFIA
Knedel, M., and Al., Klin. Wschr., 45, 325 (1967).
Kaplan, L.A., Pesce, A..J.: Clinical Chemistry, Mosby Ed. (1996)
Deutchen Gesellschaft für Klinische Chemie, Eur. J. Clin. Chem. Clin. Biochem., 30, 163
(1992)
Tietz NW,: Clinical guide to laboratory tests, 2nd ed, Saunders Co., (1991)
SIMBOLI GRAFICI ADOTTATI
Consultare le istruzioni d’uso
Dimensione/Numero di
test
Marchio prodotto conforme Dir.
98/79/CE
Fabbricante
Dispositivo medico
diagnostico in vitro
Numero di catalogo
Conservare alla
temperatura +15-25°C
Numero di lotto
Conservare alla
temperatura +2-8°C
Contenuto del flacone