SEAC Srl - Via di Prato 74, – 50041 – CALENZANO (FI) – ITALIA Tel: +39-(0) 55-8877469 Fax: +39-(0) 55-887771 - NUMERO DI DIBUCAINA Metodo con inibitore dibucaina Kit per la determinazione del numero di dibucaina nel siero o nel plasma. 90010330D La colinesterasi (CHE) catalizza la reazione di idrolisi della butirriltiocolina butirrato e tiocolina. Quest’ultima riduce il potassio esacianoferrato III (giallo) in esacianoferrato II (incolore). La diminuzione di assorbanza che viene misurata a 405nm è quindi proporzionale all’attività della colinesterasi. CHE Butirriltiocolina + H2O NORMALE ETEROZIGOTI OMOZIGOTI ATIPICI Numero di dibucaina > 75 35 – 75 > 35 I valori qui riportati devono considerarsi indicativi, in quanto ogni laboratorio dovrebbe stabilire l’intervallo di riferimento in relazione alla propria area geografica. La colinesterasi può essere presente nel siero nella forma normale o in forme varianti. La colinesterasi normale viene inibita per azione della dibucaina, lasciando libere di reagire le colinesterasi varianti, la cui attività può essere determinata come di seguito riportato. Kit: Ditiobis (colina) + H2O + 2[Fe(CN)6]4- (incolore) (giallo) Dibucaina idrocloruro Eccipienti REATTIVI - CONSERVAZIONE E STABILITA’ Reagenti aperti: Acido Butirrico + Tiocolina 2Tiocolina + 2OH- + 2[Fe(CN)6]3- REATTIVI - CONCENTRAZIONE INIZIALE Reagente 1 Reagente di lavoro: * EU-Dir 1999/11 Commission Directive of March 1999 adapting to technical progress the principles of good laboratory pratice as specified in Council Directive 87/18/EEC. SMALTIMENTO RIFIUTI Il prodotto deve essere smaltito secondo le locali normative in materia di gestione dei rifiuti. VALORI DI RIFERIMENTO 1x3 mL PRINCIPIO ANALITICO Dopo la raccolta separare al più presto il siero o il plasma dagli eritrociti. L’attività dell’enzima aumenta di circa il 25-30% al giorno se il siero viene lasciato a contatto con i globuli rossi.. L’attività della colinesterasi è stabile nel campione in esame una settimana se conservato a +2-8°C. Conservare a +15-25°C. Stabile fino alla data di scadenza riportata sulla confezione. Dopo l’apertura, i flaconi sono stabili fino alla data di scadenza indicata sul flacone se richiusi immediatamente dopo il prelievo e protetti da contaminazione, evaporazione, luce diretta e conservati alla temperatura riportata. 3 giorni a +2-8°C. PROCEDIMENTO ANALITICO Determinare l’attività della Colinesterasi (ATTIVITA’ SENZA INIBITORE) nel campione in esame utilizzando il kit COD.CCD022 “COLINESTERASI 8x20mL” . = 405(400-440) nm 1 cm 37°C Contro acqua distillata cinetica (in decremento) Lunghezza d’onda Cammino ottico Temperatura Lettura Reazione Portare i reattivi a +15-25°C prima del loro utilizzo. BIANCO CAMPIONE Reagente di lavoro 1000 µL Acqua distillata 1000 µL Campione 15 µL Agitare bene e incubare a 37°C per 60 secondi. Leggere il decremento di D.O. a 405 nm contro bianco al tempo 0 e dopo 1, 2, 3 minuti. Calcolare il E/min per determinare l’attività enzimatica (ATTIVITA’ CON INIBITORE). ATTIVITA' CON INIBITORE (U/L) = E/min x 62000 CALCOLO DEI RISULTATI ANALITICI Siero, plasma: PRESTAZIONI DEL METODO (COD. CCD022 – COLINESTERASI 8x20 mL) REATTIVI - PREPARAZIONE DEL REAGENTE DI LAVORO SOSTANZE INTERFERENTI non interferisce fino alla concentrazione di: Emoglobina 180 mg/dL Trigliceridi 1000 mg/dL PRECISIONE INTRA-ASSAY Controllo: Low High n: 20 20 MEDIA: 3707 5197 U/L D.S.: 14,18 60,75 C.V.(%): 0,38 1,17 PRECISIONE INTER-ASSAY Controllo: Low High n: 20 20 MEDIA: 3708 5212 U/L D.S.: 31,77 72,01 C.V.(%): 0,86 1,38 CORRELAZIONE Valutazioni effettuate sugli stessi campioni hanno fornito i seguenti parametri di correlazione con un metodo equivalente preso a riferimento: y = 1,0107x - 79,747 R2 = 0,9995 Ricostituire un flacone di Reagente per la determinazione del numero di dibucaina con 3 mL del reagente di lavoro del kit COD.CCD022 “COLINESTERASI 8x20mL”. n LINEARITA’: SENSIBILITA’: RANGE DI MISURA: = 20 12000 12 12 - 12000 U/L U/L U/L CAMPIONE Siero o plasma anticoagulatocon eparina o EDTA. Note: Non utilizzare fluoruro di sodio come anticoagulante poiché inibisce l’attività dell’enzima. Non utilizzare campioni emolizzati. Cod.90010330 Rev.00 Il fattore di 62000 è riferito alla temperatura di 37°C. Per il calcolo del Numero di dibucaina applicare la seguente formula: Numero di dibucaina = 100 REATTIVI - PRECAUZIONI E AVVERTENZE - La presente metodica descrive l’utilizzo del kit in manuale. Per l’utilizzo mediante analizzatori automatici consultare le applicazioni specifiche. - Non utilizzare il reagente di lavoro se l’estinzione del reattivo dovesse essere < di 1,000 a 405 nm. - Sono disponibili a richiesta le schede di controllo qualità dei reagenti, fare riferimento al n° di lotto riportato in etichetta. MATERIALI AUSILIARI NON CONTENUTI NEL KIT Pipette automatiche Fotometro Cuvette monouso (cammino ottico = 1cm). Termostato 37°C PRECAUZIONI ED AVVERTENZE In riferimento al DLg. N.285 art.28 Legge n.128 del 1998 il prodotto non è classificato come sostanza pericolosa. Il prodotto contiene componenti non attivi (detergenti, conservanti ecc..) la cui concentrazione totale è inferiore ai limiti riportati dalle Direttive 67/548/CEE e 88/379/CEE e succ. mod. sulla classificazione, imballaggio ed etichettatura delle sostanze pericolose. Maneggiare tuttavia il prodotto con cautela secondo le norme di buona pratica di laboratorio(*), evitando l’ingestione, il contatto con pelle, gli occhi e le mucose. ATTIVITA' CON INIBITORE • 100 ATTIVITA' SENZA INIBITORE CONTROLLO DI QUALITA’ E’ necessario eseguire i controlli ad ogni utilizzo del kit e verificare che i valori ottenuti siano inclusi nell’intervallo di riferimento riportato nelle istruzioni d’uso. BIBLIOGRAFIA Knedel, M., and Al., Klin. Wschr., 45, 325 (1967). Kaplan, L.A., Pesce, A..J.: Clinical Chemistry, Mosby Ed. (1996) Deutchen Gesellschaft für Klinische Chemie, Eur. J. Clin. Chem. Clin. Biochem., 30, 163 (1992) Tietz NW,: Clinical guide to laboratory tests, 2nd ed, Saunders Co., (1991) SIMBOLI GRAFICI ADOTTATI Consultare le istruzioni d’uso Dimensione/Numero di test Marchio prodotto conforme Dir. 98/79/CE Fabbricante Dispositivo medico diagnostico in vitro Numero di catalogo Conservare alla temperatura +15-25°C Numero di lotto Conservare alla temperatura +2-8°C Contenuto del flacone