GENEQUALITY
GENEQUALITY HLA-B*57:01
cod. 04-76
Kit per la determinazione dell’allele HLA B*57:01
0123
INTRODUZIONE
L’attenzione e la sensibilizzazione nei confronti di aspetti
legati alla farmacogenetica, assieme alla ricerca di elementi
che possano aiutare ad identificare i meccanismi molecolari
alla base di reazioni avverse ai farmaci, sono in costante
crescita. Per alcuni farmaci è già noto il legame tra tollerabilità
e/o funzionalità ed alcune caratteristiche genetiche individuali.
Fra questi un esempio è dato da Abacavir, una guanosina
inibitore nucleosidico della trascrittasi inversa approvato per il
trattamento dell’HIV in combinazione con altri antiretrovirali.
Abacavir è il primo farmaco su cui è stato effettuato un
percorso di studi che ha portato all’individuazione di un test
farmacogenetico che le Autorità Regolatorie hanno indicato
come obbligatorio prima della somministrazione.
E’ stato infatti dimostrato che l’allele HLA-B*57:01 in
pazienti HIV+ ha un significato altamente predittivo per
l’individuazione dei soggetti ipersensibili.
Il locus di suscettibilità risiede specificamente nell’aplotipo
ancestrale 57.1 identificato, oltre che da B*57:01, da
DRB1*0701 e DQB1*0303. Proprio in virtù di questo ormai
ben accertato valore predittivo, nell’iter terapeutico di tutti i
pazienti diagnosticati come HIV+ è preliminarmente
raccomandata la ricerca dell’allele HLA B*57:01. La reazione
di ipersensibilità ad Abacavir è caratterizzata da febbre, rash
e una combinazione di altri sintomi come mal di testa e
sintomi gastrointestinali, che tipicamente insorgono nelle
prime 6 settimane dall’inizio della terapia. Oggi grazie
all’introduzione del test farmacogenetico sono stati
drasticamente ridotti i casi di ipersensibilità e reazioni avverse
al farmaco. Ciò è ben documentato anche dai risultati dello
studio prospettico randomizzato, PREDICT 1, che ha
coinvolto 265 centri ospedalieri (di cui 38 in Italia) per un
totale di 1956 pazienti. I partecipanti sono stati
randomizzati in cieco in due gruppi di confronto: il
gruppo di “Screening HLA-B*57:01” in cui i pazienti
eseguivano il test di tipizzazione HLA-B*57:01 ed
assumevano il farmaco solo se quest’ultimo era
negativo, ed il gruppo di controllo “Gestione clinica
standard” in cui i pazienti assumevano il farmaco
come parte della loro terapia senza essere stati
preventivamente sottoposti al test.
I risultati dello studio hanno dimostrato che lo
scrrening HLA-B*57:01 annulla le reazioni di
ipersensibilità diagnosticate clinicamente e confermate
con patch test e riduce a meno del 50% le reazioni di ipersensibilità diagnosticate con solo criterio clinico
(Mallal S. et al. 2008). Il kit di tipizzazione GENEQUALITY HLA-B*57:01 è caratterizzato da rapidità di
esecuzione e semplicità nell’interpretazione dei risultati. Il kit prevede quattro PCR-SSP, di cui tre
finalizzate a rilevare la presenza dell’allele B*57:01 ed una rivolta all’identificazione di uno SNP,
presente sul gene della proteina HCP 5, in forte linkage disequilibrium con esso.
ST_B5701_ AR_R100610
AB ANALITICA srl
Via Svizzera 16 – 35127 PADOVA – ITALIA Tel. 049 761698 - Fax 049 8709510
e-mail: [email protected]
www. abanalitica.it
GENEQUALITY
CARATTERISTICHE TECNICHE
PRINCIPIO DEL TEST:
Il kit prevede quattro PCR-SSP, di cui tre
finalizzate a rilevare la presenza dell’allele
B*57:01 ed una rivolta all’identificazione di uno
SNP, presente sul gene della proteina HCP 5, in
forte linkage disequilibrium con esso. La presenza
di quest’ultimo marcatore aumenta ulteriormente il
potere discriminante del test.
ACCURATEZZA:
Viene calcolata come numero di amplificazioni
corrette sul totale di amplificazioni eseguite. Il
dispositivo GENEQUALITY HLA B*57:01
ha
dimostrato un’accuratezza del 100%.
PROCEDURA
DNA
ESTRATTO
CAMPIONE
NUMERO DI TEST: 25 o 50 test
STABILITA’: 6 mesi
150 min
MATERIALE DI PARTENZA: DNA estratto
AMPLIFICAZIONE
MULTIPLEX
REGIONI AMPLIFICATE: allele HLA B*57:01
AMPLIFICAZIONE: PCR MULTIPLEX premixed
(provette monodose pronte all’uso)
MX 1
MW 1
DNA DI RIFERIMENTO: incluso
VISUALIZZAZIONE
SU GEL DI AGAROSIO
2
MX 2
3
4
5
6
7
8 9
Multiplex 1
CONTROLLO INTERNO: Amplificazione del gene
Betaglobina
Multiplex 2
DIMENSIONE DEGLI AMPLIFICATI:
Multiplex 1
Ampl. Betaglobina
Ampl. SNP HCP 5
Ampl. 1 HLA-B*57:01
bp
268
173
94
Multiplex 2
Ampl. Betaglobina
Ampl. 2 HLA-B*57:01
Ampl. 3 HLA-B*57:01
bp
268
212
175
INFORMAZIONI PER GLI ORDINI
Cod
Prodotto
Confez.
04-76A
GENEQUALITY HLA-B*57:01
04-76R
GENEQUALITY HLA-B*57:01
amplification reagents
25/50
tests
25/50
tests
RIVELAZIONE: elettroforesi su gel di agarosio
REFERENZE
SENSIBILITA’ E SPECIFICITA’:
Sensibilità e specificità diagnostiche sono state
calcolate su un numero significativo di campioni
HLA B*57:01 positivi e negativi, il cui genotipo era
stato precedentemente attribuito con altri CE-IVD.
Il dispositivo GENEQUALITY HLA B*57:01 è stato
in grado di assegnare correttamente la positività o
negatività all’allele HLA B*57:01 per tutti i
campioni analizzati (sensibilità e specificità
diagnostiche del 100%).
Mallal S, Phillips E, Carosi G, et al. HLA-B*57:01
screening for hypersensitivity to abacavir. N. Engl
J Med. 2008; 358:568-578
Pirazzoli A, Recchia G. La farmacogenetica può
cambiare l’Approccio alla terapia HAART?
Quaderni di Malattie Infettive e Tropicali 2008, 1,
32-44
RK, S Scharf, F Faloona, KB Mullis, GT Horn, HA
Erlich and N Arnheim, Science 230, 1350-1354,
1985.
ST_B5701_ AR_R100610
AB ANALITICA srl
Via Svizzera 16 – 35127 PADOVA – ITALIA Tel. 049 761698 - Fax 049 8709510
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