ABX Pentra
LDL Direct CP
LDL Direct CP
Reagente diagnostico per la determinazione
quantitativa in-vitro del colesterolo legato alle
lipoproteine a bassa densità (LDL-C) in siero o
plasma mediante colorimetria.
2004/12/14
A93A00165 E
A11A01638
26 ml
10 ml
Aspetti di interesse clinico
Le lipoproteine del plasma sono particelle sferiche che contengono
diverse quantità di colesterolo, trigliceridi, fosfolipidi e proteine. Il
fosfolipide, il colesterolo libero e la proteina costituiscono la
superficie esterna della particella lipoproteica, mentre il nucleo
interno contiene soprattutto il colesterolo esterificato e i trigliceridi.
Queste particelle servono a solubilizzare e trasportare il colesterolo e i
trigliceridi nel sangue.
Le proporzioni relative di proteine e lipidi determinano la densità di
queste lipoproteine e forniscono la base su cui avviare la loro
classificazione (1). Sono presenti le seguenti classi: chilomicroni, VLDL
(very low density lipoproteins) o lipoproteine a bassissima densità,
LDL (low density lipoproteins) o lipoproteine a bassa densità e HDL
(high density lipoproteins) o lipoproteine ad alta densità. Vari studi
clinici hanno dimostrato che le diversi classi di lipoproteine
presentano tratti distintivi molto marcati e influiscono diversamente
sul rischio di patologia cardiaca coronarica (2-4). Tutti gli studi
individuano il colesterolo LDL quale fattore principale nella patogenesi
dell'arteriosclerosi e dell'arteriopatia coronarica (CAD, coronary artery
disease) (2-8), mentre è emerso l'effetto protettivo del colesterolo
HDL. Anche entro i limiti di normalità delle concentrazioni di
colesterolo totale, un aumento del colesterolo LDL può verificarsi in
concomitanza con un aumento del rischio di CAD (4).
Reagente 2 Tampone MES (pH 6,3)
Detergente 2
N,N-bis(4-sulfobutil)-toluidina, disodio
(DsBmT)
Conservante
< 1.0 %
< 1,0 mM
Utilizzare ABX Pentra LDL Direct CP secondo le indicazioni specifiche
del reagente. ABX Diagnostics non garantisce le prestazioni qualora il
reagente venga utilizzato in modo non conforme.
Manipolazione
Metodo
L'analisi dell'ABX Pentra LDL Direct CP è un metodo omogeneo di
misurazione diretta dei livelli di LDL-C nel siero e nel plasma che evita
di ricorrere a procedure di pretrattamento o centrifugazione off-line.
Il metodo prevede l'uso di due reagenti e dipende dalle proprietà di un
unico detergente. Il detergente (reagente 1) consente di solubilizzare
soltanto le particelle delle proteine diverse dalle LDL. Il colesterolo
rilasciato viene consumato dalla colesterolo esterasi e dalla colesterolo
ossidasi in una reazione che non genera colori. Un secondo detergente
(reagente 2) solubilizza le particelle di LDL restanti, mentre un
accoppiatore cromogenico consente la formazione di colori. La
reazione dell'enzima con il colesterolo LDL in presenza
dell'accoppiatore produce un colore proporzionale alla quantità di LDLC presente nel campione.
Reagenti
ABX Pentra LDL Direct CP è pronto per l'uso.
Reagente 1 Tampone MES (pH 6,3)
Detergente 1
Colesterolo esterasi
Colesterolo ossidasi
Perossidasi
4-aminoantipirina
Acido ascorbico Ossidasi
Conservante
ABX Diagnostics
BP 7290 - 34184 Montpellier
cedex 4 - France
< 1.0 %
< 1500 U/l
< 1500 U/l
< 1300 ppg U/l
< 0.1 %
< 3000 U/l
Rimuovere entrambi i coperchi della cassetta e inserire il comparto
frigorifero dei reagenti ABX Pentra 400.
Eliminare l'eventuale schiuma utilizzando una pipetta di plastica.
Calibratore
Ai fini della calibrazione, utilizzare gli elementi descritti di seguito.
ABX Pentra LDL Cal, rif. A11A01678 (non incluso)
2 x 1 ml (prodotto liofilizzato)
Controllo
Ai fini del controllo qualità interno, utilizzare gli elementi descritti di
seguito.
ABX Pentra N Control, rif. A11A01653 (non incluso)
10 x 5 ml (prodotto liofilizzato)
ABX Pentra P Control, rif. A11A01654 (non incluso)
10 x 5 ml (prodotto liofilizzato)
Analizzare ogni controllo quotidianamente oppure dopo ogni
calibrazione.
La frequenza dei controlli e gli intervalli di fiducia devono essere
conformi alle istruzioni di laboratorio e alle direttive specifiche del
singolo paese. I risultati devono essere compresi nella gamma dei
limiti di fiducia definiti. Ciascun laboratorio è tenuto a fissare una
procedura da seguire nel caso in cui i risultati oltrepassino detti limiti
di fiducia.
Materiali necessari non in dotazione
• Analizzatore automatico di chimica-clinica
• Attrezzature standard per laboratorio
S.A. au capital de 44.000.000 € - RCS Montpellier 328 031 042 - SIRET 328 031 042 000 42 - APE 332 B
ABX Pentra
LDL Direct CP
Campione
Prestazioni con ABX Pentra 400
Per il prelievo del sangue non è necessario che i pazienti si presentino
a digiuno.
I campioni consigliati sono il siero, il plasma trattato con EDTA e il
plasma sodio-eparinizzato.
I dati sulle prestazioni elencati di seguito sono stati ottenuti
sull'analizzatore ABX Pentra 400.
• Siero: prelevare il sangue mediante venipuntura e farlo coagulare.
Centrifugare e rimuovere il siero quanto prima dopo il prelievo (entro
3 ore) (9).
• Plasma: raccogliere i campioni in EDTA o sodio eparina. Centrifugare
e rimuovere il plasma quanto prima dopo il prelievo (entro 3 ore)(9).
Stabilità del reagente caricato
Una volta aperta, la cassetta dei reagenti collocata in un comparto ABX
Pentra 400 è stabile per 97 giorni.
Se l'analisi non viene eseguita immediatamente, è possibile conservare
i campioni fino a 5 giorni a una temperatura compresa tra 2 e 8 °C.
Se è necessario conservare i campioni per più di 5 giorni, mantenerli a
una temperatura di -80 °C. I campioni possono essere congelati una
sola volta.
Per ulteriori istruzioni sulla raccolta, la manipolazione e la
conservazione dei campioni, consultare il documento H18-A della
NCCLS (10).
Limite di rilevabilità
Il limite di rilevabilità viene determinato in base al protocollo Valtec
(11) ed equivale a 0,04 mmol/l.
Numero di test: 100 test
Volume del campione: 2.4 ml/test
Accuratezza e precisione
• Ripetibilità (precisione intra-serie)
3 campioni di concentrazione bassa, media ed elevata e 2 controlli
vengono analizzati per 20 volte in conformità alle indicazioni fornite
nel protocollo Valtec (11).
Nota: non utilizzare gli anticoagulanti che contengono citrato.
Intervallo di riferimento
Per la prevenzione e la gestione delle patologie cardiache coronariche
viene utilizzata la classificazione dei pazienti del National Cholesterol
Education Program (NCEP) (9).
Colesterolo LDL
< 130 mg/dl (< 3,36 mmol/l)
130-159 mg/dl (3,36-4,11 mmol/l)
160 mg/dl (4,14 mmol/l)
Classificazione
Auspicabile
Limite rischio elevato
Rischio elevato
Controllo normale
Controllo patologico
Campione 1
Campione 2
Campione 3
Se conservati in cassette chiuse a una temperatura compresa tra 2 e 8
°C al riparo dalla luce solare diretta, i reagenti rimangono stabili fino
alla data di scadenza.
Stabilità dopo l'apertura: consultare il paragrafo "Prestazioni con ABX
Pentra 400".
Non congelare i reagenti.
Procedura di analisi
È possibile richiedere istruzioni per test condotti con sistemi
automatizzati diversi da ABX Pentra 400.
Gestione dei rifiuti
Attenersi alle disposizioni locali.
Precauzioni di carattere generale
1. Il reagente può essere utilizzato esclusivamente da esperti a fini
diagnostici in-vitro.
2. Non pipettare mai usando la bocca.
3. Le cassette di reagenti sono usa e getta e devono essere eliminate
in conformità alle disposizioni locali.
4. Consultare la scheda di sicurezza specifica del reagente.
S.A. au capital de 44.000.000 € - RCS Montpellier 328 031 042 - SIRET 328 031 000 42 - APE 332 B
CV %
1,01
2,82
0,91
1,00
0,63
• Riproducibilità (precisione da serie a serie)
2 campioni di livelli basso ed elevato e 2 controlli vengono analizzati
in duplice test per 20 giorni (2 serie al giorno) in conformità alle
indicazioni fornite nel protocollo NCCLS EP5-A (12).
Si consiglia a ciascun laboratorio di fissare un proprio intervallo di
riferimento.
Conservazione e stabilità
Valore medio mmol/l
1,58
1,94
2,88
3,66
4,94
Controllo normale
Controllo patologico
Campione 1
Campione 2
Valore medio mmol/l
1,57
1,92
4,05
4,95
CV %
5,59
6,39
3,94
4,04
Linearità e gamma di misurazione
La linearità del reagente viene determinata in base alle indicazioni
fornite nel protocollo NCCLS EP6-P (13).
Bassa linearità: 0,04 mmol/l
Elevata linearità: 10 mmol/l, con post-diluizione automatica:
20 mmol/l.
Correlazione
È stata effettuata la correlazione di 100 campioni dei pazienti
prendendo come riferimento un reagente disponibile in commercio in
conformità alle indicazioni fornite nel protocollo NCCLS EP9-A2 (19).
Di seguito è riportata l'equazione per la linea allometrica ottenuta.
Y = 0,9 x + 0,02 con coefficiente di correlazione r2 = 0,9883.
Interferenze
Emoglobina:
nessuna influenza significativa fino a 195 mmol/l
Trigliceridi:
nessuna influenza significativa fino a 7 mmol/l
Bilirubina totale: nessuna influenza significativa fino a 500 mmol/l
Bilirubina diretta: nessuna influenza significativa fino a 185 mmol/l
ABX Pentra
LDL Direct CP
Stabilità della calibrazione
Il reagente viene calibrato il giorno 0. Per controllare la stabilità della
calibrazione, vengono analizzati 2 campioni di controllo.
La durata della stabilità della calibrazione è di almeno 8 giorni.
Nota: si consiglia di effettuare nuovamente la calibrazione quando si
cambiano i lotti di reagente e quando i risultati dei controlli della qualità
non rientrano nell'intervallo stabilito.
Fattore di conversione
mmol/l x 0,387 = g/l
mmol/l x 38,7 = mg/dl
Versione dell'applicazionea: 3.01
Avvertenza
L'utente è tenuto a verificare che il presente documento faccia
riferimento al reagente utilizzato.
Bibliografia
1. Centers for Disease Control/National Institutes of Health Manual,
’’Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories’’, 1988.
I have also seen this as: Richardson J.H./ and Barkley W.E. eds.
Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, U.S.
Dept. of Health and Human Services, Public Health Service, HHS
Publication No. (CDC) 84-8395, Washington, DC,1984.
2. National Comittee for Clinical Laboratory Standards, Preparation
and Testing of Reagent Water in the Clinical Laboratory - Third
Edition; Approved Guideline NCCLS Document C3-A3, 1997.
3. Gotto A.M., Lipoprotein Metabolism and the Etiology of
Hyperlipidemia, Hospital Practice, 23: Suppl. 1, 4 (1988).
4. Crouse J.R. et al., Studies of low density lipoprotein molecular
weight in human beings with coronary artery disease, J. Lipid Res.,
26:566 (1985).
5. Badimon, J.J. et al., Regression of Atherosclerotic lesions by High
Density Lipoprotein Plasma Fraction in the cholesterol-Fed Rabbit,
Journal of Clinical Investigation, 85:1234 (1990).
6. Castelli W.P. et al., HDL Cholesterol anf Other Lipids in Coronary
Heart Disease, Circulation, 55:767 (1977).
7. Barr D.P. et al., Protein-lipid Relationships in Human Plasma, Am.
J. Med., 11:480 (1951).
8. Gordon T., et al., High Density Lipoprotein As a Protective Factor
Against Coronary Heart Disease, Am. J. Med., 62:707 (1977).
9. Bachorik P.S. et al., National Cholesterol Education Program
Recommendations for Measurement of Low-Density Lipoprotein
Cholesterol: Executive Summary, Clinical Chemistry, Vol.41, No.
10:1414 (1995).
10. National Comittee for Clinical Laboratory Standards, Procedures for
the Handling and Processing of Blood Specimens, Approved
Guideline NCCLS Document H18-A, Number 12, Vol. 10, 1990.
11. Vassault A., Grafmeyer D. Naudin C. et al., Protocole de validation
de techniques (document B), Ann. Biol. Clin., 1986, 44, 686-745.
a. Modifica dall’indice D all’indice E: nuova versione.
S.A. au capital de 44.000.000 € - RCS Montpellier 328 031 042 - SIRET 328 031 042 000 42 - APE 332 B
12. Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices,
Approved Guideline, NCCLS document EP5-A, Vol. 19, No. 2,
february 1999.
13. Evaluation of the Linearity of Quantitative Analytical Methods,
Proposed Guideline, NCCLS document EP6-P, Vol. 6, No. 18,
september 1986.
14. Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples,
Approved Guideline, 2nd ed., NCCLS document EP9-A2, Vol. 22, No.
19, 2002.
ABX Pentra
LDL Direct CP
S.A. au capital de 44.000.000 € - RCS Montpellier 328 031 042 - SIRET 328 031 000 42 - APE 332 B
