Metodo - Radim

I valori qui riportati devono considerarsi indicativi, in quanto ogni laboratorio dovrebbe
stabilire l’intervallo di riferimento in relazione alla propria area geografica.
SEAC Srl
Via di Prato 74, 50041 – CALENZANO (FI) – ITALIA
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REATTIVI - CONCENTRAZIONE INIZIALE
COLESTEROLO
Reagente 1
Tampone di Good pH 6.8, 100 mmol/L
Fenolo 20 mmol/L
Colesterolo esterasi ≥ 240 U/L
Colesterolo ossidasi ≥ 240 U/L
Perossidasi ≥ 2000 U/L
4-amminoantipirina 5 mmol/L
Conservanti.
Metodo enzimatico colorimetrico CHOD-PAP.
(Colesterolo Ossidasi-Perossidasi).
Kit per la determinazione del colesterolo nel siero e nel plasma.
Reagente 2
90010290-D
1x50 mL
REATTIVI - CONSERVAZIONE E STABILITA’
PRINCIPIO ANALITICO
Kit:
Gli esteri del colesterolo presenti nel campione in esame vengono idrolizzati a colesterolo
libero ed acidi grassi per azione dell’enzima colesterolo esterasi (CHE).
La colesterolo ossidasi (CHOD) ossida quindi il colesterolo libero totale a colest-4-an-3one con formazione di perossido d’idrogeno che, in presenza di perossidasi (POD),
reagisce con 4-amminoantipirina ed un opportuno substato, formando un composto
colorato valutabile fotometricamente la cui estinzione è direttamente proporzionale alla
concentrazione di colesterolo totale presente nel campione.
CHE
Esteri del colesterolo + H2O → Colesterolo + Acidi grassi
Colesterolo + 1/2 O2 + H2O
Reagenti aperti:
Reagente di lavoro:
SOSTANZE INTERFERENTI
non interferisce fino alla concentrazione di:
Bilirubina
20
mg/dL
Emoglobina
600
mg/dL
Trigliceridi
1000
mg/dL
PRECISIONE INTRA-ASSAY
Controllo:
Low
High
n:
20
20
MEDIA:
177,50
194,25
mg/dL
D.S.:
1,53
1,76
C.V.(%):
0,86
0,90
PRECISIONE INTER-ASSAY
Controllo:
Low
High
n:
20
20
MEDIA:
176,77
196,68
mg/dL
D.S.:
3,51
4,39
C.V.(%):
1,99
2,22
CORRELAZIONE
Valutazioni effettuate sugli stessi campioni hanno fornito i seguenti parametri di correlazione con un
metodo equivalente preso a riferimento:
y = 0,9462x + 2,8499
2 = 0,9912
R
n
LINEARITA’:
SENSIBILITA’:
RANGE DI MISURA:
mg/dL
mg/dL
mg/dL
CAMPIONE
Siero o plasma anticoaglulato con eparina o EDTA.
Note:
Dopo la raccolta del campione, separare quanto prima possibile il siero o il plasma
dai globuli rossi.
Non utilizzare anticoagulanti come citrato, fluoruro e ossalato.
Il colesterolo nel siero e nel plasma è stabile 5-7 giorni a +2-8°C.
VALORI DI RIFERIMENTO
Cod.90010290-D Rev.01
< 200
200 – 239
≥ 240
-
La presente metodica descrive l’utilizzo del kit in manuale. Per l’utilizzo mediante
analizzatori automatici consultare le applicazioni specifiche.
Scartare il Reagente di lavoro se la sua estinzione dovesse essere > 0.300 a 520
nm.
Sono disponibili a richiesta le schede di controllo qualità dei reagenti, fare
riferimento al n° di lotto riportato in etichetta.
MATERIALI AUSILIARI NON CONTENUTI NEL KIT
Pipette automatiche
Fotometro
Cuvette monouso (cammino ottico = 1cm).
Termostato 37°C
PRECAUZIONI ED AVVERTENZE
Reagente 1
= 20
800
2
2-800
mg/dL
mg/dL
mg/dL
(< 5.2 mmol/L)
(5.2 – 6.2 mmol/L)
(≥ 6.2 mmol/L)
Portare i reattivi a +15-25°C prima del loro utilizzo.
BIANCO
STANDARD
CAMPIONE
REAGENTE
Reagente di lavoro
1000
1000
1000
Acqua distillata
10
Campione
10
Standard
10
Agitare bene e incubare per 5’ a 37°C.
Leggere l’estinzione del Campione e dello Standard contro bianco.
Il colore sviluppato è stabile circa 60’ a +15-25°C al riparo dalla luce diretta.
μL
μL
μL
μL
CALCOLO DEI RISULTATI ANALITICI
Colesterolo (mg/dL) (mmol/L) =
E Campione
∗ [Standard]
EStandard
REATTIVI - PREPARAZIONE DEL REAGENTE DI LAVORO
REATTIVI - PRECAUZIONI E AVVERTENZE
PRESTAZIONI DEL METODO
λ = 520(500-546) nm
1 cm
37°C
Contro bianco reagente
end point (incremento)
Lunghezza d’onda
Cammino ottico
Temperatura
Lettura
Reazione
Siero, plasma:
I reattivi R1, R2 sono liquidi pronti all’uso.
Per preparare il Reagente di lavoro, miscelare quattro volumi di Reagente1 con un volume
di Reagente2 (4R1+1R2) in funzione del numero di determinazioni da effettuare.
Alternativamente aggiungere 10 mL del Reagente 2 ad un flacone di Reagente 1.
CHOD
→ Colest-4-an-3-one + H2O2
POD
2H2O2+ 4-amminoantipirina + Fenolo → Chinonimmina + 4H2O
Auspicabile
Intervallo limite
Alto
Conservare a +2-8°C. Non congelare.
Stabile fino alla data di scadenza riportata sulla confezione.
Dopo l’apertura, i flaconi R1 e R2 sono stabili fino alla data di
scadenza indicata sul flacone se richiusi immediatamente dopo
il prelievo e protetti da contaminazione, evaporazione, luce
diretta e conservati alla temperatura riportata.
60 giorni a +2-8°C.
PROCEDIMENTO ANALITICO
Reagente 2
Irritante
Contiene:
- idrossido di sodio
- fenolo
Frasi di rischio
- Irritante per la pelle (R 38)
In riferimento al DLg. N.285 art.28 Legge n.128 del 1998 il prodotto non è
classificato come sostanza pericolosa. Il prodotto contiene componenti
non attivi (detergenti, conservanti ecc..) la cui concentrazione totale è
inferiore ai limiti riportati dalle Direttive 67/548/CEE e 88/379/CEE e succ.
mod. sulla classificazione, imballaggio ed etichettatura delle sostanze
pericolose.
Maneggiare tuttavia il prodotto con cautela secondo le norme di buona
pratica di laboratorio(*), evitando l’ingestione, il contatto con pelle, gli
occhi e le mucose.
gli occhi/la faccia (S 39)
* EU-Dir 1999/11 Commission Directive of March 1999 adapting to technical progress the
principles of good laboratory pratice as specified in Council Directive 87/18/EEC.
SMALTIMENTO RIFIUTI
Il prodotto deve essere smaltito secondo le locali normative in materia di gestione dei
rifiuti.
Fattore di conversione:
Colesterolo (mg/dl) x 0,02586 = Colesterolo (mmol/l)
CONTROLLO DI QUALITA’
E’ necessario eseguire i controlli ad ogni utilizzo del kit e verificare che i valori ottenuti
siano inclusi nell’intervallo di riferimento riportato nelle istruzioni d’uso.
BIBLIOGRAFIA
Kaplan, L.A., Pesce, A..J.: Clinical Chemistry, Mosby Ed. (1996)
Allain, C.C., Poon, L.S., Chan, C.S.G, Richmond, W., Fu, P.C., Enzymatic determination of
total serum cholesterol, Clin. Chem, 20:470-475 (1974)
nd
Tietz NW,: Clinical guide to laboratory tests, 2 ed, Saunders Co., (1991)
Trinder, P., J. Clin. Path. 22:158(1969)
Meiattini, F., Prencipe, L., Bardelli, F., Giannini, G., and Tarli, P., The 4hydroxybenzoate/4-amminophenazone chromogenic system used in the enzymatic
determination of serum cholesterol, Clin. Chem., 24:2161-2165 (1978)
SIMBOLI GRAFICI ADOTTATI
Consultare le istruzioni d’uso
Dimensione/Numero di
test
Marchio prodotto conforme Dir.
98/79/CE
Fabbricante
Dispositivo medico
diagnostico in vitro
Numero di catalogo
Conservare alla
temperatura +15-25°C
Numero di lotto
Conservare alla
temperatura +2-8°C
Contenuto del flacone