I valori qui riportati devono considerarsi indicativi, in quanto ogni laboratorio dovrebbe stabilire l’intervallo di riferimento in relazione alla propria area geografica. SEAC Srl Via di Prato 74, 50041 – CALENZANO (FI) – ITALIA Tel: +39-(0) 55-8877469 Fax: +39-(0) 55-8877771 REATTIVI - CONCENTRAZIONE INIZIALE COLESTEROLO Reagente 1 Tampone di Good pH 6.8, 100 mmol/L Fenolo 20 mmol/L Colesterolo esterasi ≥ 240 U/L Colesterolo ossidasi ≥ 240 U/L Perossidasi ≥ 2000 U/L 4-amminoantipirina 5 mmol/L Conservanti. Metodo enzimatico colorimetrico CHOD-PAP. (Colesterolo Ossidasi-Perossidasi). Kit per la determinazione del colesterolo nel siero e nel plasma. Reagente 2 90010290-D 1x50 mL REATTIVI - CONSERVAZIONE E STABILITA’ PRINCIPIO ANALITICO Kit: Gli esteri del colesterolo presenti nel campione in esame vengono idrolizzati a colesterolo libero ed acidi grassi per azione dell’enzima colesterolo esterasi (CHE). La colesterolo ossidasi (CHOD) ossida quindi il colesterolo libero totale a colest-4-an-3one con formazione di perossido d’idrogeno che, in presenza di perossidasi (POD), reagisce con 4-amminoantipirina ed un opportuno substato, formando un composto colorato valutabile fotometricamente la cui estinzione è direttamente proporzionale alla concentrazione di colesterolo totale presente nel campione. CHE Esteri del colesterolo + H2O → Colesterolo + Acidi grassi Colesterolo + 1/2 O2 + H2O Reagenti aperti: Reagente di lavoro: SOSTANZE INTERFERENTI non interferisce fino alla concentrazione di: Bilirubina 20 mg/dL Emoglobina 600 mg/dL Trigliceridi 1000 mg/dL PRECISIONE INTRA-ASSAY Controllo: Low High n: 20 20 MEDIA: 177,50 194,25 mg/dL D.S.: 1,53 1,76 C.V.(%): 0,86 0,90 PRECISIONE INTER-ASSAY Controllo: Low High n: 20 20 MEDIA: 176,77 196,68 mg/dL D.S.: 3,51 4,39 C.V.(%): 1,99 2,22 CORRELAZIONE Valutazioni effettuate sugli stessi campioni hanno fornito i seguenti parametri di correlazione con un metodo equivalente preso a riferimento: y = 0,9462x + 2,8499 2 = 0,9912 R n LINEARITA’: SENSIBILITA’: RANGE DI MISURA: mg/dL mg/dL mg/dL CAMPIONE Siero o plasma anticoaglulato con eparina o EDTA. Note: Dopo la raccolta del campione, separare quanto prima possibile il siero o il plasma dai globuli rossi. Non utilizzare anticoagulanti come citrato, fluoruro e ossalato. Il colesterolo nel siero e nel plasma è stabile 5-7 giorni a +2-8°C. VALORI DI RIFERIMENTO Cod.90010290-D Rev.01 < 200 200 – 239 ≥ 240 - La presente metodica descrive l’utilizzo del kit in manuale. Per l’utilizzo mediante analizzatori automatici consultare le applicazioni specifiche. Scartare il Reagente di lavoro se la sua estinzione dovesse essere > 0.300 a 520 nm. Sono disponibili a richiesta le schede di controllo qualità dei reagenti, fare riferimento al n° di lotto riportato in etichetta. MATERIALI AUSILIARI NON CONTENUTI NEL KIT Pipette automatiche Fotometro Cuvette monouso (cammino ottico = 1cm). Termostato 37°C PRECAUZIONI ED AVVERTENZE Reagente 1 = 20 800 2 2-800 mg/dL mg/dL mg/dL (< 5.2 mmol/L) (5.2 – 6.2 mmol/L) (≥ 6.2 mmol/L) Portare i reattivi a +15-25°C prima del loro utilizzo. BIANCO STANDARD CAMPIONE REAGENTE Reagente di lavoro 1000 1000 1000 Acqua distillata 10 Campione 10 Standard 10 Agitare bene e incubare per 5’ a 37°C. Leggere l’estinzione del Campione e dello Standard contro bianco. Il colore sviluppato è stabile circa 60’ a +15-25°C al riparo dalla luce diretta. μL μL μL μL CALCOLO DEI RISULTATI ANALITICI Colesterolo (mg/dL) (mmol/L) = E Campione ∗ [Standard] EStandard REATTIVI - PREPARAZIONE DEL REAGENTE DI LAVORO REATTIVI - PRECAUZIONI E AVVERTENZE PRESTAZIONI DEL METODO λ = 520(500-546) nm 1 cm 37°C Contro bianco reagente end point (incremento) Lunghezza d’onda Cammino ottico Temperatura Lettura Reazione Siero, plasma: I reattivi R1, R2 sono liquidi pronti all’uso. Per preparare il Reagente di lavoro, miscelare quattro volumi di Reagente1 con un volume di Reagente2 (4R1+1R2) in funzione del numero di determinazioni da effettuare. Alternativamente aggiungere 10 mL del Reagente 2 ad un flacone di Reagente 1. CHOD → Colest-4-an-3-one + H2O2 POD 2H2O2+ 4-amminoantipirina + Fenolo → Chinonimmina + 4H2O Auspicabile Intervallo limite Alto Conservare a +2-8°C. Non congelare. Stabile fino alla data di scadenza riportata sulla confezione. Dopo l’apertura, i flaconi R1 e R2 sono stabili fino alla data di scadenza indicata sul flacone se richiusi immediatamente dopo il prelievo e protetti da contaminazione, evaporazione, luce diretta e conservati alla temperatura riportata. 60 giorni a +2-8°C. PROCEDIMENTO ANALITICO Reagente 2 Irritante Contiene: - idrossido di sodio - fenolo Frasi di rischio - Irritante per la pelle (R 38) In riferimento al DLg. N.285 art.28 Legge n.128 del 1998 il prodotto non è classificato come sostanza pericolosa. Il prodotto contiene componenti non attivi (detergenti, conservanti ecc..) la cui concentrazione totale è inferiore ai limiti riportati dalle Direttive 67/548/CEE e 88/379/CEE e succ. mod. sulla classificazione, imballaggio ed etichettatura delle sostanze pericolose. Maneggiare tuttavia il prodotto con cautela secondo le norme di buona pratica di laboratorio(*), evitando l’ingestione, il contatto con pelle, gli occhi e le mucose. gli occhi/la faccia (S 39) * EU-Dir 1999/11 Commission Directive of March 1999 adapting to technical progress the principles of good laboratory pratice as specified in Council Directive 87/18/EEC. SMALTIMENTO RIFIUTI Il prodotto deve essere smaltito secondo le locali normative in materia di gestione dei rifiuti. Fattore di conversione: Colesterolo (mg/dl) x 0,02586 = Colesterolo (mmol/l) CONTROLLO DI QUALITA’ E’ necessario eseguire i controlli ad ogni utilizzo del kit e verificare che i valori ottenuti siano inclusi nell’intervallo di riferimento riportato nelle istruzioni d’uso. BIBLIOGRAFIA Kaplan, L.A., Pesce, A..J.: Clinical Chemistry, Mosby Ed. (1996) Allain, C.C., Poon, L.S., Chan, C.S.G, Richmond, W., Fu, P.C., Enzymatic determination of total serum cholesterol, Clin. Chem, 20:470-475 (1974) nd Tietz NW,: Clinical guide to laboratory tests, 2 ed, Saunders Co., (1991) Trinder, P., J. Clin. Path. 22:158(1969) Meiattini, F., Prencipe, L., Bardelli, F., Giannini, G., and Tarli, P., The 4hydroxybenzoate/4-amminophenazone chromogenic system used in the enzymatic determination of serum cholesterol, Clin. Chem., 24:2161-2165 (1978) SIMBOLI GRAFICI ADOTTATI Consultare le istruzioni d’uso Dimensione/Numero di test Marchio prodotto conforme Dir. 98/79/CE Fabbricante Dispositivo medico diagnostico in vitro Numero di catalogo Conservare alla temperatura +15-25°C Numero di lotto Conservare alla temperatura +2-8°C Contenuto del flacone