13-Coltura batteri - Sito dei docenti di Unife

Lo sviluppo della batteriologia ha avuto inizio quando si è trovata la
possibilità di coltivare i batteri in vitro nei terreni di coltura, contenenti
sostanze capaci di mantenere la vitalità e di permettere la riproduzione dei
batteri fuori dal loro ambiente naturale di vita.
TERRENI di COLTURA
LIQUIDI
SOLIDI (+ agar)
TERRENI
Sia i terreni solidi che quelli liquidi possono essere:
• Base …………………brodo, acqua peptonizzata
• Arricchiti……………agar-sangue
• Elettivi………………+ sostanze che favoriscono la crescita di alcuni batteri
• Selettivi………………+ sostanze che impediscono crescita altri batteri
• Di identificazione………rivelatori attività biochimiche
Non selettivi (LB broth)
consentono la crescita di tutte le
specie batteriche senza possibilità di distinguerle
Terreni
LIQUIDI
Selettivi (specifici)
consentono la crescita di batteri con
specifiche proprietà e non di altri
Terreni
SOLIDI
Non selettivi (LB agar, agar-sangue)
consentono la
crescita di tutte le specie, ma con la possibilità di isolare singole
colonie
Selettivi (Chapman, Mac Conkey, ecc.)
consentono la
crescita di batteri con specifiche proprietà, isolandone colonie
singole
TERRENI
I terreni solidi si usano per isolare le singole specie batteriche
(colonie isolate).
La semina in terreno solido inoltre consente di evidenziare
caratteristiche peculiari (es: emolisi).
I terreni liquidi si usano per sviluppare maggiori quantità di una
coltura di batteri che sono già stati isolati.
Per identificare un ceppo batterico è necessario isolarlo
in COLTURA PURA
TERRENI BASE
I terreni base consentono la crescita dei batteri ambientali e di molti batteri
non patogeni, con scarse esigenze nutrizionali.
Il più conosciuto è il Luria-broth (LB) o Luria-agar (LBA), a cui può essere
aggiunta una certa quantità di glucosio per la crescita di batteri un po’ più
esigenti.
Questo è un terreno universale in cui crescono quasi tutti i batteri.
Altri terreni di questo tipo sono ad esempio:
- Tryptic Soy Broth (TSB) o Tryptic Soy Agar (TSA)
- Muller Hinton broth (MHB) o MH agar (MHA)
TERRENI di ARRICCHIMENTO
Terreno base integrato con SANGUE, ESTRATTI di LIEVITO, INFUSI di
CUORE-CERVELLO. Usati per far crescere batteri “esigenti” (la maggior parte
dei patogeni). Mette in evidenza le capacità emolitiche.
TERRENI SELETTIVI
Terreni base addizionati di sostanze che
inibiscono la crescita di alcuni batteri.
MacConkey-Hektoen contengono sali biliari,
che consentono la crescita degli Enterobatteri
ma inibiscono degli altri;
Chapman contiene NaCl 7.5% che consente
la crescita degli Stafilococchi e inibisce gli altri
(inoltre presenza di lattosio);
Cetrimide (solo Pseudomonas);
Sabouraud-CAF (solo miceti); ecc…
TERRENI di IDENTIFICAZIONE
Terreni selettivi addizionati di sostanze che consentono l’identificazione di
alcuni batteri. Es: Chapman con lattosio e indicatore di pH (S. aureus).
Terreni arricchiti: AGAR-SANGUE
Contiene il 5-7% di eritrociti (solitamente di pecora).
Il sangue fornisce elementi nutritivi che consentono la crescita
di TUTTI i batteri, anche di quelli esigenti.
Consente di evidenziare le proprietà emolitiche dei batteri
isolati (capacità di lisare le membrane cellulari; esotossine
emolisine).
Terreni selettivi: CHAPMAN
Detto anche Mannitol-Salt agar, in quanto contiene il 7.5 % di
NaCl: selettivo per per Stafilococchi.
La presenza di mannosio consente di discriminare tra le specie
di stafilococchi che fermentano lo zucchero (S. aureus) e quelle
che non lo fermentano (tutte le altre specie).
Terreni selettivi: McCONKEY
Contiene 5g/L di sali biliari: selettivo per Enterobatteri.
La presenza di lattosio consente di discriminare tra le specie
lattosio-fermentanti (coliformi) e le altre.
Terreni selettivi: HEKTOEN
Contiene 9g/L di sali biliari: selettivo per Enterobatteri patogeni
(Salmonella, Shigella, Proteus).
La presenza di lattosio, saccarosio e salicina permette di distinguere
tra batteri che fermentano tali zuccheri o no; la presenza di sodio
tiosolfato e ferro consente di evidenziare i produttori di H2S (colonie
con centro nero).
La maggior parte degli
enterobatteri non patogeni
fermentano gli zuccheri;
Salmonella e Shigella non
fermentano (colonie
incolori) ma producono H2S
(centro nero).
Terreni selettivi: CETRIMIDE-AGAR
Contiene il disinfettante Cetrimide (composto dell’ammonio
quaternario) 0.3 gr/L: selettivo per Pseudomonas aeruginosa.
Contiene inoltre magnesio cloruro e potassio solfato che
aumentano la produzione di chelanti del ferro, utili per la
produzione di piocianina e pioverdina, che conferisono al
batterio la tipica colorazione verde brillante.
Terreni selettivi: SABOURAUD-AGAR
Contiene destrosio e CAF (antibiotico ad ampio spettro): selettivo
per i MICETI.
La crescita di tutte le specie batteriche è inibita dal CAF.
Alcuni terreni consentono di identificare con certezza la specie di
appartenenza.
Esempi:
Terreno di Chapman (mannitolo-NaCl): data l’alta concentrazione di NaCl
solo gli Stafilococchi sono in gradi di crescervi
Terreno cetrimide-agar: per la presenza di un disinfettante consente la
crescita soltanto di Pseudomonas
Altri non consentono di identificare la specie ma permettono di
identificare il gruppo di appartenenza e/o alcune attività biochimiche.
Esempi:
Terreno Mac Conkey: per la presenza dei sali biliari permette la crescita dei
soli enterobatteri
Terreno Hektoen: per la presenza dei Sali biliari e del ferro, consente
l’identificazione degli enterobatteri produttori di acido solfidrico.
Per la successiva identificazione certa è necessario utilizzare test che di
solito analizzano simultaneamente diverse proprietà biochimiche dei
batteri (gallerie biochimiche miniaturizzate).