Xpect Flu A and B - Thermo Fisher Scientific

ENGLISH
antibody. A visible line will always appear in the control region
indicating that the test is working properly. The presence of a control
line combined with the absence of a visible test line is interpreted as
a negative test result.
Flu A&B
INTENDED USE
Remel Xpect Flu A&B is a rapid in vitro immunochromatographic test
for the direct, qualitative detection of influenza A and influenza B viral
antigens (nucleoprotein) from nasal wash, nasal swab, and throat
swab specimens from symptomatic patients. The test is intended as
an aid in the rapid diagnosis of influenza A and influenza B viral
infections. A negative test is presumptive and it is recommended
these results be confirmed by virus culture or an FDA-cleared
influenza A and B molecular assay.
SUMMARY AND EXPLANATION
Influenza is a highly contagious, acute respiratory illness
characterized by the abrupt onset of fever, myalgia, headache,
malaise, nonproductive cough, sore throat, and rhinitis. Worldwide,
the occurrence of influenza follows seasonal patterns unique to the
geographical area, but with international travel the disease may
become more of a year-round phenomenon. Influenza type A and B
viruses are responsible for the epidemics of disease that occur
almost every winter.1 In the United States, these winter influenza
epidemics can cause illness in 10-20% of the population and are
associated with an average of 36,000 deaths and 114,000
hospitalizations per year.2 Influenza type C is usually associated with
only mild or asymptomatic disease.3
Influenza typically resolves in one or two weeks, but some people will
suffer life-threatening complications.
Influenza can exacerbate
underlying medical conditions (e.g., cardiopulmonary conditions),
lead to secondary bacterial pneumonia or primary influenza viral
pneumonia, or occur as part of a co-infection with other viral or
bacterial pathogens. Pneumonia and influenza together are the
seventh most common cause of death in the United States and the
fifth leading cause of death among all Americans over the age of 65.4
The appropriate treatment of patients with influenza-like illness
depends on accurate and timely diagnosis, which can help reduce the
inappropriate use of antibiotics and provide the option of using
antiviral therapy. Diagnosis of influenza based on symptoms alone is
difficult because the initial symptoms can be similar to those caused
by other infectious agents. A variety of laboratory methods are
available for the detection of influenza virus, including conventional
cell culture, shell vial culture, immunofluorescent staining, serologic
tests, amplified nucleic acid detection assays, and rapid
immunoassays.5-7 If diagnosed within 48 hours of the onset of
symptoms, several antiviral medications are available which may
shorten the duration and lessen the severity of symptoms associated
with uncomplicated influenza illness. These medications can also be
used as prophylaxis to help prevent disease in patient contacts.
Amantadine and rimantadine are available for preventing or treating
influenza A only. The neuraminidase inhibitor class of antiviral drugs
for influenza (zanamivir and osteltamivir) is effective in preventing
and treating both types A and B. Because the drugs differ in their
route of administration, dosage regimen, side effects, indications for
use (patient age), and cost, it is useful to distinguish between
influenza A and influenza B infections to make the most appropriate
therapeutic decision.
Xpect Flu A&B can be used to provide information to aid in the
diagnosis of influenza in symptomatic patients. Physicians can
quickly identify those patients who will benefit from treatment and
establish the proper treatment regimen, which is essential in
effectively controlling and preventing influenza.
PRINCIPLE
Xpect Flu A&B is a chromatographic immunoassay for qualitative
detection of influenza A and influenza B viral antigens. The test
device incorporates separate membrane strips for influenza A and
influenza B. To perform the test, the patient specimen is diluted and
added to the sample wells of the device. The mixture moves along
the membranes by capillary action. If present, influenza A or B viral
antigens in the patient sample bind anti-influenza A or B conjugated
antibodies. A visible line forms as a complex of antibody-antigenantibody coated colored particles is captured in the test region (T).
Antibody coated colored particles not bound at the test line are later
captured in the control region (C) containing goat anti-mouse
STORAGE
Store product at room temperature or refrigerated (2-25°C) until the
expiration date printed on the box. Do not freeze or overheat. If
stored refrigerated, allow components to equilibrate to room
temperature before use.
PRECAUTIONS
• For In Vitro Diagnostic Use Only.
• Directions should be read and followed carefully.
• Do not use components beyond the printed expiration dates.
• Do not reuse kit components or test devices.
• Follow established laboratory safety procedures when working
with patient specimens. If infection with a novel influenza A or B
virus is suspected based on current clinical and epidemiological
screening criteria recommended by public health authorities,
specimens should be collected with appropriate infection control
precautions for novel virulent influenza viruses and sent to state
or local health departments for confirmatory testing. Viral cultures
should not be attempted in these cases unless a BSL 3+ facility is
available to receive and culture specimens.
• Standard precautions should be taken against the dangers of
biological hazards by properly sterilizing specimens, containers,
and test devices after use.
SPECIMEN COLLECTION, STORAGE, AND TRANSPORT
•
Acceptable specimens for evaluation with Xpect Flu A&B include
nasal washes, nasal swabs, and throat swabs.
•
Specimens should be obtained early in the course of the illness
and tested as soon as possible. Inappropriate specimen
collection, storage, and transport are likely to yield false
negative test results. Training in specimen collection is highly
recommended because of the importance of specimen quality.
•
Swab specimens should be collected using flocked swabs or
swabs with a synthetic tip (e.g., polyester) and an aluminum or
plastic shaft. Swabs with cotton tips and wooden shafts are not
recommended. Specimens collected with swabs made of
calcium alginate are not acceptable.
•
Freshly collected specimens may be run immediately without the
use of transport medium.
•
Alternatively, samples can be placed into a suitable transport
medium, maintained at 2-8°C, and tested within 72 hours after
collection.
•
Frozen specimens in a suitable liquid viral transport medium stored
at -20°C or below in a non-defrosting freezer can be tested up to
six months after collection. Avoid multiple freeze-thaw cycles.
Transport Media:
The following transport media have been evaluated and found to be
compatible with Xpect Flu A&B test.
Amies Medium
Bartels Viral Transport Medium
BD™ Universal Viral Transport System
Cary Blair Medium
Copan Universal Transport Medium
Earle’s Minimum Essential Medium (EMEM)
EMEM with 1% Bovine Serum Albumin
EMEM with 1% Lactalbumin Hydrolysate
Hank’s Balanced Salt Solution
Liquid Stuarts Medium
M4®
M4RT®
M5®
M6™
Phosphate Buffered Saline (PBS)
PBS with 0.5% Bovine Serum Albumin
PBS with 0.5% Gelatin
Saline (normal)
Sucrose Phosphate
Tryptic Soy Broth with 0.5% Bovine Serum Albumin
Tryptic Soy Broth with 0.5% Gelatin
Veal Infusion Broth
Veal Infusion Broth with 0.5% Bovine Serum Albumin
ENGLISH
REAGENTS AND MATERIALS SUPPLIED
1. Test devices (20): Each foil pouch contains one single-use test
device with two membrane strips. The strips in the device
contain antibodies to influenza A or B.
2. Specimen Diluent (20 ml): One dropper bottle containing a
buffered saline solution with detergent, a mucolytic agent, and
preservative
3. Dilution tubes (20): Flexible plastic tubes for specimen
preparation
4. Disposable transfer pipettes (20): Pipettes with marked
graduations at approximately 0.1 ml increments
5. Flu A+/B- control swabs (1):
A dry swab containing
inactivated influenza A antigen
6. Flu A-/B+ control swabs (1):
A dry swab containing
inactivated influenza B antigen
7. Instructions for Use (IFU)
Positive Test (antigen present):
A positive test is indicated by two blue-colored bands, one in the test
region (T) and one in the control region (C). A complete, blue, clearly
visible test band of any intensity should be interpreted as positive.
Flu A
Positive
MATERIALS REQUIRED BUT NOT SUPPLIED
1. Timer
2. Specimen Collection Containers and Transport Media
Negative Test (antigen not detected):
A negative test is indicated by only one complete, blue-colored band in
the control (C) region.
PROCEDURE
1. Remove the test device from the foil pouch when ready to perform
the test and place it on a flat surface. (Allow kit components to
equilibrate to room temperature if stored refrigerated.)
2.
Label the device with patient or control identification.
3.
Sample preparation:
a. For swab specimens without dilution* in transport media
(including the Quality Control Swabs provided with the kit):
i.
Dispense 25 drops (approximately 0.6 ml)
of Specimen Diluent into a dilution tube.
ii.
Place the swab specimen in the tube.
iii. Mix thoroughly or vortex to release bound
antigenic material from the swab.
iv. Rotate the swab firmly against the tube
walls then squeeze the sides of the tube (as
depicted) while removing the swab.
Flu A and B
Negative
Invalid Test:
An invalid test occurs when the test band is partial or incomplete, or
the control band is absent or incomplete. Invalid results due to
excessively mucoid specimens may be repeated using twice the
normal volume of Specimen Diluent during the dilution step.
*Swab not submerged in a sufficient volume of transport media to allow
processing of 0.1 ml.
b.
For nasal washes and swab specimens transported in
> 0.3 ml of liquid media:
i.
Dispense 5 drops (approximately 0.1 ml) of Specimen
Diluent into the dilution tube provided.
ii.
Mix specimen well and use the transfer pipette
provided in the kit to transfer 0.1 ml (first molded
graduated mark from the tip) of liquid specimen (nasal
wash or specimens in transport medium) into the
dilution tube provided.
4.
Use a transfer pipette to dispense 0.1 ml (first molded graduated
mark from tip of pipette) of specimen into the Flu A sample well
and 0.1 ml into the Flu B sample well of the appropriately
labeled Xpect test device.
5.
Read and record the test results visually at 15 minutes
according to the Interpretation section. (Strong positive results
may be apparent sooner than 15 minutes.)
Flu B
Positive
Uninterpretable
Reporting Results:
It is recommended that results be reported as follows:
INTERPRETATION
The test device has two separate read windows; the one on the left is
for Flu A and the one on the right is for Flu B as depicted.
2
Positive -
Positive for influenza A and/or influenza B antigen.
This result does not rule out co-infections with other
pathogens or identify any specific influenza A virus
subtype.
Negative -
Negative for influenza A and/or influenza B antigen.
Negative results do not preclude influenza virus
infection and should not be used as the sole basis for
treatment or other management decisions, since the
antigen present in the specimen may be below the
detection limit of the test. A negative test is
presumptive and it is recommended these results be
confirmed by virus culture or an FDA-cleared influenza
A and B molecular assay.
ENGLISH
QUALITY CONTROL
Internal: A procedural control is included in the test. A colored band
appearing in the control (C) region is considered an internal positive
procedural control, indicating proper performance and reactive
reagents. A clear background in the results area is considered an
internal negative control. If the test has been performed correctly and
reagents are working properly, the background will clear to give a
discernible result
Test performance by individual site:
Flu A
Site
1
2
3
Flu B
Site
1
2
3
External: It is recommended that Positive and Negative controls be
run with each new test kit lot number. Each laboratory should follow
their state and local requirements.
Quality Control swabs that are Flu A+/B- and Flu A-/B+ are provided
with the kit. Process swabs in accordance with Procedure Step 3 (a)
for swab specimens without transport media. If controls do not
perform as expected, do not report patient results.
Flu B
Site
1
2
3
PERFORMANCE CHARACTERISTICS
Clinical Accuracy:
The performance of Xpect Flu A&B was evaluated at three sites
located in the north, south, and east regions of the United States
during the 2002-2003 influenza season. The clinical trial sites
included a children’s hospital (pediatric population), a university
hospital (primarily adult population), and a reference laboratory (adult
and pediatric (60/40) population). For all specimens evaluated, the
overall sensitivity of Xpect Flu A&B when compared to culture was
92.2% (71/77) for influenza A and 97.8% (45/46) for influenza B. The
overall specificity was 100% for both influenza A (314/314) and
influenza B (345/345). For influenza A, there were 6 samples that
were culture positive and Xpect Flu A&B-negative. For influenza B,
there was 1 sample that was culture positive and Xpect Flu A&Bnegative. Four of five discrepant samples available for analysis were
positive by RT-PCR.
37
0
3*
0/0
0/0
36/36
NA
NA
100
NA
NA
90.3-100
100
100
100
NA
94.8-100
97.2-100
Specificity
%
95% CI
#
1/1
74/74
128/128
100
100
100
NA
95.1-100
97.2-100
Sensitivity
%
95% CI
#
4/4
0/0
NA
100
NA
NA
39.8-100
NA
NA
#
18/18
2/2
NA
#
24/24
2/2
NA
Specificity
%
95% CI
100
100
NA
81.5-100
15.8-100
NA
Specificity
%
95% CI
100
100
NA
85.8-100
15.8-100
NA
*RT-PCR was performed on two of the four discrepant specimens that were available
(one influenza A and one influenza B). Both specimens were positive by PCR.
Test performance by individual site:
Flu A
Sensitivity
Site
#
%
95% CI
24/27
88.9
70.8-97.7
1
2
0/0
NA
NA
NA
NA
NA
3
Flu B
Site
1
2
3
Culture Results
A- / B+
A- / B0
36
0
Sensitivity
%
95% CI
#
1/1
69/69
129/129
Influenza B
83.3% Sensitivity (5/6); 95% CI = 35.9-99.6%
100% Specificity (116/116); 95% CI = 96.9-100%
Culture Results
OVERALL
A+ / BA- / B+
A- / B24
0
0
A+ / BXpect Flu
A- / B+
0
5
0
A&B Results
A- / B3*
1*
89
Influenza B
100% Sensitivity (36/36); 95% CI = 90.3-100%
100% Specificity (203/203); 95% CI = 98.2-100%
A+ / BA- / B+
A- / B-
NA
14.7-94.7
85.1-99.9
Nasal Swab (n=122)
Influenza A
88.9% Sensitivity (24/27); 95% CI = 70.8-97.7%
100% Specificity (95/95); 95% CI = 96.2-100%
Nasal Wash (n=239)
Influenza A
92.5% Sensitivity (37/40); 95% CI = 79.6-98.4%
100% Specificity (199/199); 95% CI = 98.2-100%
Xpect Flu
A&B Results
NA
60.0
97.1
Test performance by individual site:
Flu A
Sensitivity
Site
#
%
95% CI
10/10
100
69.2-100
1
2
0/0
NA
NA
NA
NA
NA
3
EXPECTED VALUES
In the United States, influenza is most prevalent during the winter
months. During peak periods, up to 30% of specimens tested may be
culture positive for influenza. The proportion of influenza A positive
specimens compared to influenza B can vary dramatically from year
to year, ranging from about 50% to 99%.
A+ / B-
0/0
3/5
34/35
Specificity
%
95% CI
#
Throat Swab (n=30)
Influenza A
100% Sensitivity (10/10); 95% CI = 69.2-100%
100% Specificity (20/20); 95% CI = 83.2-100%
Influenza B
100% Sensitivity (4/4); 95% CI = 39.8-100%
100% Specificity (26/26); 95% CI = 86.8-100%
Culture Results
OVERALL
A+ / BA- / B+
A- / BA+ / B10
0
0
Xpect Flu
0
4
0
A- / B+
A&B Results
A- / B0
0
16
LIMITATIONS
1. Both viable and non-viable influenza A and B viruses are
detectable with Xpect Flu A&B.
2. Due to low levels of virus shedding, inadequate specimen
collection or improper handling or transport, a negative test
result does not rule out the presence of influenza virus.
Consequently, the results from the Xpect Flu A&B test should be
used in conjunction with other clinical findings to establish a
diagnosis.
3. A positive test does not rule out the possibility of co-infection
with another pathogen.
4. The performance characteristics of Xpect Flu A&B have not
been established for use in monitoring antiviral treatment or for
cell culture confirmation/identification methods.
5. Additional testing is required to differentiate any specific
influenza A subtypes or strains, in consultation with state or local
public health departments.
OVERALL
Sensitivity
%
95% CI
#
0
0
163
*RT-PCR was performed on the three discrepant specimens. One of the three
samples was negative by PCR; two were positive.
3
#
5/6
0/0
NA
Sensitivity
%
95% CI
83.3
NA
NA
35.9-99.6
NA
NA
#
91/91
4/4
NA
#
112/112
4/4
NA
Specificity
%
95% CI
100
100
NA
96.0-100
39.8-100
NA
Specificity
%
95% CI
100
100
NA
96.8-100
39.8-100
NA
ENGLISH
Analytical Sensitivity:
The analytical sensitivity was evaluated using 17 influenza strains: 11
influenza A and 6 influenza B. Each viral strain was quantitated and
titrated until a positive endpoint was reached using Xpect Flu A&B.
The amount of virus at the endpoint dilution was calculated as a
measure of analytical sensitivity.
Interfering Substances:
The following substances were tested with Xpect Flu A&B. No
interference was observed in the assay for any substance tested at
the indicated levels: whole blood (2%), 3 mouthwashes (25%), 3 throat
drops (25%), 3 nasal sprays (25%), 4-acetamidophenol
(acetaminophen) (10 mg/ml), acetylsalicylic acid (20 mg/ml),
chlorpheniramine (5 mg/ml), dextromethorphan (10 mg/ml),
diphenhydramine (5 mg/ml), guaiacol glyceryl ether (guaifenesin) (20
mg/ml), oxymetazoline (10 mg/ml), phenylephrine (25 mg/ml),
phenylpropanolamine (20 mg/ml).
Type
Detection Limit
TCID50/ml
A/Anhui/1/2013
A (H7N9)
1.26 x 105
A/California/04/2009
4.41 x 103
A/New Caledonia/20/1999
A (H1N1)
A (H1N1)
A/Puerto Rico/8/34
A (H1N1)
8.9 x 104
A/Fort Monmouth/1/47
A (H1N1)
7.9 x 102
A/New Jersey/8/76
A (H1N1)
8.9 x 102
A/Hong Kong/8/68
2.8 x 102
A/Victoria/3/75
A (H3N2)
A (H3N2)
A/Port Chalmers/1/73
A (H3N2)
4.0 x 102
A/BhGoose/QH/1/05
A (H5N1)
5
2.0 x 10
A/Chicken/WD/98
A (H9N2)
3.16 x 104
3.
B
7.9 x 104
4.
Influenza Strain
1.63 x 103
CEID50/ml
B/Lee/40
3
BIBLIOGRAPHY
1.
8.9 x 10
1
B/Allen/45
B
4 x 10
B/Maryland/1/59
B
6 x 101
B/GL/1739/54
B
8.9 x 102
B/Taiwan/2/62
B
3 x 101
B/Hong Kong/5/72
B
1.58 x 103
TCID50 – 50% tissue culture infectious dose
CEID50 – 50% chicken embryo infectious dose
Although this test has been shown to detect the influenza
A/California/04/2009 (H1N1) and A/Anhui/1/2013 (H7N9) viruses
cultured from positive human specimens, the performance
characteristics of this device with human specimens infected with
these influenza viruses have not been established. Xpect Flu A&B
can distinguish between influenza A and B viruses, but it does not
differentiate influenza subtypes.
Cross-Reactivity:
Thirty-six microorganisms were evaluated with Xpect Flu A&B. No
cross-reactivity was observed for influenza A or influenza B. Bacteria
and yeast isolates were tested at 108 colony-forming units per ml
concentration. Viral isolates were tested at concentrations of 104 to
105 TCID50 (tissue culture infectious dose) per ml concentration. The
following organisms were tested in Xpect Flu A&B:
Acinetobacter baumanni
Bordetella pertussis
Candida albicans
Enterococcus faecalis
Escherichia coli
Gardnerella vaginalis
Haemophilus influenzae
Klebsiella pneumoniae
Lactobacillus casei
Legionella pneumophila
Listeria monocytogenes
Moraxella catarrhalis
Neisseria gonorrhoeae
Neisseria meningitidis
Neisseria sicca
Neisseria subflava
Proteus vulgaris
Pseudomonas aeruginosa
Reproducibility:
Reproducibility testing was conducted at four sites, including one inhouse site, on four separate days with six blinded samples. The liquid
samples consisted of diluted influenza A and influenza B antigens
intended to read weakly-positive or negative with Xpect Flu A&B.
Ninety-nine percent of the 96 samples tested produced the expected
results.
Serratia marcescens
Staphylococcus aureus (Cowan)
Staphylococcus epidermidis
Streptococcus mutans
Streptococcus pneumoniae
Streptococcus pyogenes Group A
Streptococcus, Group B
Streptococcus, Group C
Streptococcus, Group F
Adenovirus, Type 5
Coronavirus
Coxsackievirus B5
Cytomegalovirus
Parainfluenza (Sendai), Type 1
Parainfluenza, Type 2
Parainfluenza, Type 3
Respiratory Syncytial Virus, A
Rhinovirus, Type 14
2.
5.
6.
7.
Shaw, M.W., N.H. Arden, and H.F. Maassab. 1992. Clin. Microbiol. Rev.
5:74-92.
Centers for Disease Control and Prevention. 2003. Prevention and
Control of Influenza: Recommendations of the Advisory Committee on
Immunization Practices. Morbid. Mortal. Weekly Rep. 52, No. RR-8.
Murray, P.R., E.J. Baron, J.H. Jorgensen, M.A. Pfaller, and R.H. Yolken.
2003. Manual of Clinical Microbiology. 8th ed. ASM, Washington, D.C.
Anderson, R.N. 2002. National Vital Statistics Reports. Vol. 50, No. 16.
National Center for Health Statistics, Hyattsville, MD.
Herrmann, B., C. Larsson, and B.W. Zweygberg. 2001. J. Clin. Microbiol.
39:134-138.
Mills, R.D., K.J. Cain, and G.L. Woods. 1989. J. Clin. Microbiol. 27:25052508.
Reina, J., E. Padilla, F. Alonso, E. Ruiz de Gopegui, M. Munar, and M.
Mari. 2002. J. Clin. Microbiol. 40:3515-3517.
PACKAGING
REF R24600, Xpect Flu A&B ............................................ 20 Tests/Kit
Symbol Legend
REF
Catalog Number
IVD
In Vitro Diagnostic Medical Device
LAB
For Laboratory Use
Consult Instructions for Use (IFU)
Temperature Limitation (Storage Temp.)
LOT
Batch Code (Lot Number)
Use By (Expiration Date)
EC REP
European Authorized Representative
Xpect® is a registered trademark of Thermo Fisher Scientific and its subsidiaries.
®
ATCC is a registered trademark of American Type Culture Collection.
IFU 24600, Revised July 9, 2013
12076 Santa Fe Drive, Lenexa, KS 66215, USA
General Information: (800) 255-6730 Website: www.remel.com Email: [email protected]
Local/International Phone: (913) 888-0939 International Fax: (913) 895-4128
Printed in U.S.A.
GERMAN
Testlinie gebundene Antikörper-beschichtete Farbpartikel werden zu
einem späteren Zeitpunkt im Kontrollbereich (C) mit einem Ziege-AntiMaus-Antikörper erfasst. Die sichtbare Linie im Kontrollbereich ist immer
ein Hinweis darauf, dass der Test ordnungemäß funktioniert. Das
Vorhandensein einer Kontrolllinie kombiniert mit dem Fehlen einer
sichtbaren Testlinie wird als negatives Testergebnis interpretiert.
Flu A&B
LAGERUNG
INDIKATIONEN
Speichern Sie Produkt bei der Zimmertemperatur oder gekühlt (2-25°C)
bis das Verfallsdatum auf dem Kasten druckte. Nicht einfrieren oder
überhitzen. Falls das Produkt gekühlt gelagert wird, vor der Verwendung
auf Zimmertemperatur erwärmen.
Xpect Flu A&B von Remel ist ein schneller in-vitro immunchromatografischer Test für den direkten, qualitativen Nachweis des viralen
Influenza A- und Influenza B-Antigens (Nucleoprotein) von nasalen
Ausspülungen, Abstrichen und Abstrichproben aus dem Rachen
symptomatischer Patienten. Der Test ist als Hilfe bei der schnellen
Diagnose von viralen Influenza A- und Influenza B-Infektionen
vorgesehen. Ein negatives Testergebnis ist vermutliche und es wird
empfohlen diese Ergebnisse durch Virus Kultur oder mit FDA-Zulassung
Influenza-A-und B molekularen Assays bestatigt werden.
ACHTUNG
•
•
•
•
•
ZUSAMMENFASSUNG UND ERKLÄRUNG
Influenza ist eine hoch ansteckende, akute Erkrankung des Atemapparats,
die durch abruptes Einsetzen von Fieber, Myalgie, Kopfschmerzen,
Unwohlsein, unproduktivem Husten, Halsschmerzen und Rhinitis
gekennzeichnet ist. Das Auftreten von Influenza folgt weltweit saisonalen
Mustern, die spezifisch für die jeweilige geografische Lage sind. Mit
zunehmenden internationalen Reisen kann die Erkrankung jedoch immer
mehr zu einem ganzjährigen Phänomen werden. Viren des Typs
Influenza A und B sind verantwortlich für Epidemien dieser Erkrankung,
die nahezu jeden Winter auftreten.1 In den USA können diese InfluenzaWinterepidemien eine Erkrankung bei 10-20 % der Bevölkerung
verursachen und stehen mit durchschnittlich 36,000 Todesfällen und
114,000 Krankenhaus-aufenthalten pro Jahr im Zusammenhang.2 Mit
Influenza C wird in der Regel nur eine milde oder asymptomatische Form
der Krankheit assoziiert.3
•
Nur für die Verwendung in der In-Vitro-Diagnostik.
Die Gebrauchsanweisung muss sorgfältig gelesen und befolgt werden.
Keine Komponenten nach dem aufgedruckten Verfallsdatum verwenden.
Kit-Komponenten oder Testgeräte nicht wieder verwenden.
Befolgen Sie bei der Arbeit mit Gewebeproben von Patienten die im
Labor geltenden Sicherheitsvorkehrungen. Liegt aufgrund der Untersuchung mit den gegenwärtigen, von den Gesundheitsbehörden
vorgeschriebenen klinischen und epidemiologischen Methoden der
Verdacht auf Infektion mit einem neuartigen Influenza A-Virus vor,
müssen bei der Entnahme von Proben angemessene Vorsichtsmaßnahmen zur Verhinderung einer Infektion mit neuartigen InfluenzaViren eingehalten werden. Die entnommenen Proben müssen zu Testzwecken an das örtliche Gesundheitsamt geschickt werden. In diesem
Fall sollten, sofern keine BSL 3+-Testanlage zur Lagerung und Untersuchung von Proben vorhanden ist, keine Virenkulturen angelegt werden.
Es sind Vorsichtmaßnahmen gegen die von biologischen Materialien
ausgehenden Verfahren zu ergreifen, indem Proben, Container und
Testgeräte nach Gebrauch ordnungsgemäß sterilisiert werden.
ENTNAHME VON PROBEN
•
Influenza geht in der Regel nach ein bis zwei Wochen zurück, aber bei
einigen Menschen können lebensbedrohende Komplikationen auftreten.
Influenza kann zu Grunde liegende medizinische Bedingungen
verschlimmern (z. B. kardiopulmonare Bedingungen), eine sekundäre
bakterielle Pneumonie oder eine primäre virale Influenzapneumonie
auslösen, oder als Teil einer Nebeninfektion mit anderen viralen oder
bakteriellen Pathogenen auftreten. Pneumonie und Influenza bilden
zusammen die siebthäufigste Todesursache in den USA und die
fünfthäufigste Todesursache bei allen Amerikanern über 65.4
•
•
Die geeignete Behandlung von Patienten mit Influenza-ähnlichen
Erkrankungen hängt von einer genauen und rechtzeitigen Diagnose ab,
die eine unangebrachte Verwendung von Antibiotika reduzieren und kann
und eine antivirale Therapie ermöglichen kann. Influenza ausschließlich
auf Symptomen zu diagnostizieren ist problematisch, da die anfänglichen
Symptome denen ähnlich sein können, die durch andere infektiöse
Agenzien verursacht werden. Für den Nachweis des Influenzavirus steht
eine Vielzahl von Laborroutinen zur Verfügung, einschließlich der
konventionellen Zellkultur, der Schalenkultur, der Immunfärbung,
serologische Tests, erweiterte Assays zum Nucleinsäure-Nachweis und
schnelle Immunoassays.5-7 Bei einer Diagnose innerhalb von 48 Stunden
nach dem Einsetzen der Symptome stehen mehrere antivirale
Medikationen zur Verfügung, die die Dauer kürzen und den Schweregrad
der mit einer unkomplizierten Influenzaerkrankung mindern können. Diese
Medikationen können zudem als Prophylaxe bei Patientenkontakten
verwendet werden. Amantadin und Rimantadin stehen nur für die
Vorbeugung oder Behandlung von Influenza A zur Verfügung. Die
Neuraminidasehemmer-Klasse der antiviralen Medikamente für Influenza
(Zanamivir und Osteltamivir) ist wirksam bei der Vorbeugung und
Behandlung der Typen A und B. Da die Medikamente hinsichtlich ihrer
Verabreichung, ihrem Dosierungsschema, ihren Nebenwirkungen, ihren
Anwendungsindikationen (Patientenalter) und der Kosten unterschiedlich
sind, ist es hilfreich, zwischen Influenza A und Influenza B zu unterscheiden,
um die geeignetste therapeutische Entscheidung treffen zu können.
•
•
•
Für die Untersuchung mit dem Xpect Flu A&B-Test kommen
Nasensekrete sowie Abstriche von Nase und Rachen in Frage.
Die Proben sollten im frühen Krankheitsstadium entnommen und
schnellstmöglich getestet werden. Unsachgemäße Entnahme,
Lagerung und Beförderung der Proben können zu falsch negativen
Testergebnissen führen. Da die Qualität der Proben eine große Rolle
spielt, sollte das für die Probenentnahme verantwortliche Personal
entsprechend geschult werden.
Abstrichproben sollten mit beflockten Stäbchen oder Tupfern mit
synthetischer Spitze (z. B. aus Polyester) und einem Aluminium- oder
Plastikstäbchen entnommen werden. Abstrichstäbchen aus Holz mit
Tupfern aus Watte sind nicht zu empfehlen. Es dürfen keine Proben
mit Stäbchen aus Kalziumalginat verwendet werden.
Die frisch entnommenen Proben können sofort und ohne
Verwendung eines Transportmediums getestet werden.
Alternativ dazu können die Proben in einem angemessenen Medium
bei 2-8°C aufbewahrt und innerhalb von 72 Stunden nach der
Entnahme getestet werden.
Eingefrorene Proben können in einem passenden flüssigen
Virentransportmedium bei Temperaturen von -20°C oder kälter
gelagert und innerhalb eines Zeitraumes von höchstens sechs
Monaten nach Entnahme getestet werden. Bitte tauen Sie die Proben
während der Lagerung nicht auf.
Transportmedien:
Die folgenden Transportmedien wurden ausgewertet und sind mit dem
Xpect Flu A&B Test kompatibel.
Amies Medium
Bartels Viral Transport Medium
BD™ Universelles Virentransportsystem
Cary Blair Medium
Copan Universelles Transportmedium
Earle’s Minimum Essential Medium (EMEM)
EMEM mit 1% Rinderserum-Albumin
EMEM mit 1% Lactalbumin-Hydrolysat
Hank’s Balanced Salt Solution
Flüssiges Stuarts Medium
M4®
M4RT®
M5®
M6™
Phosphate Buffered Saline (PBS)
PBS mit 0,5% Rinderserum-Albumin
PBS mit 0,5% Gelatine
Kochsalzlösung (normal)
Sucrose-Phosphat
Tryptic Soy Broth (Tryptische Soja-Brühe) mit 0,5% Rinderserum-Albumin
Tryptic Soy Broth (Tryptische Soja-Brühe) mit 0,5% Gelatine
Infusionslösung (Kalb)
Infusionslösung (Kalb) mit 0,5% Rinderserum-Albumin
Xpect Flu A&B bietet wertvolle, praktische Informationen für die Diagnose von
Influenza bei symptomatischen Patienten. Ärzte können sehr schnell
diejenigen Patienten identifizieren, die von der Behandlung profitieren,
und können das geeignete Dosierungsschema festlegen, das für eine
effektive Kontrolle von und Vorbeugung gegen Influenza unerlässlich ist.
TESTPRINZIP
Xpect Flu A&B ist ein chromatografisches Immunoassay für den
qualitativen Nachweis viraler Antigene der Influenza A und Influenza B. Das
Testgerät enthält separate Membranstreifen für Influenza A und
Influenza B. Zur Durchführung des Tests wird die Patientenprobe verdünnt
und in die Probenvertiefungen des Geräts abgegeben. Die Mischung bewegt
sich aufgrund der Kapillarwirkung entlang der Membranen. Sofern
vorhanden, binden die viralen Influenza A- oder B-Antigenein der
Patientenprobe die konjugierten Anti-Influenza A- oder B -Antikörper. Im
Testbereich (T) bildet sich eine mit einem Komplex von AntikörperAntigen-Antikörper beschichteten Linie von Farbpartikeln (T). Nicht an der
5
GERMAN
Positiver Test (Antigen vorhanden):
Ein positiver Test ist durch zwei blau Linien gekennzeichnet, eine im (T)Bereich und eine im (C)-Bereich. Ein komplettes, blaus, deutlich sichtbare
Testlinie sollte als postiver testergebnis interpretiert.
REAGENZIEN UND IM LIEFERUMFANG ENTHALTENE MATERIALIEN
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Testgeräte (20): Jeder Plastikbeutel enthält ein Einmal-Testgerät
mit zwei Membranstreifen. Die Streifen im Gerät enthalten Antikörper
für Influenza A oder B.
Probenverdünner (20 ml): Eine Tropfflasche mit einer gepufferten
Kochsalzlösung mit einem Detergens, einem mukolytischen Agens
und Konservierungsstoffen
Probenröhrchen
(20):
Flexible
Plastikröhrchen
für
die
Probenvorbereitung
Einwegpipetten (20): Pipetten sollten mit einer Skala von
ca. 0,1 ml-Abständen markiert sein
Flu A+/B- Kontrolltupfer (1): Ein trockener Tupfer mit einem
inaktivierten Influenza A-Antigen
Flu A-/B+ Kontrolltupfer (1): Ein trockener Tupfer mit einem
inaktivierten Influenza B-Antigen
Gebrauchsanleitung (IFU)
Flu A
Positiv
ERFORDERLICHE MATERIALIEN, DIE NICHT IM LIEFERUMFANG
ENTHALTEN SIND
1.
2.
Labortimer
Probenbehälter und Transportmedien
Negativer Test (Antigen nicht nachgewiesen):
Ein negativer Test ist gekennzeichnet durch eine blau Linie im (C)Bereich.
VERFAHREN
1.
Flu B
Positiv
Entnehmen Sie das Testgerät aus dem Plastikbeutel und legen Sie
es auf eine flache Oberfläche. (Wenn Kit-Komponenten gekühlt
gelagert wurden, auf Zimmertemperatur erwärmen lassen.)
2.
Das Gerät mit einer Patienten- oder Kontroll-ID versehen.
3.
Probenvorbereitung:
a.
Für Tupferprobe ohne Verdünnung* in den Transport
Medien (einschließlich der zum Lieferumfang gehörenden Quality
Control Swabs):
i.
25 Tropfen (ca. 0,6 ml) des Probenverdünners in
ein Probenröhrchen geben.
ii.
Die Tupferprobe in das Röhrchen geben.
iii.
Sorgfältig mischen oder schütteln, um das
Antigen-Material vom Tupfer zu lösen
iv. Den Tupfer fest gegen die Röhrchenwand reiben,
anschließend das Röhrchen eindrücken (wie
abgebildet) und den Tupfer entfernen.
Flu A und B
Negativ
Ungültiger Test:
Eine ungültige Test tritt auf, wenn das Testlinie teilweise oder
unvollständig ist, oder das Kontrollinie abwesend oder unvollständig.
Aufgrund von übermäßig mukoiden Proben ungültige Tests können
wiederholt werden, indem die Verdünnung mit der doppelten Menge an
Probenverdünner erfolgt.
*Für in nicht ausreichendem Transportmedium eingetauchte Tupfer
0,1 ml Verarbeitung einräumen.
b.
Für nasale Spűlung und Tupferprobe transportiert in > 0.3
ml flüssige Medien:
i.
5 Tropfen (ca. 0,1 ml) Probenverdünner in das zum
Lieferumfang gehörende Röhrchen geben.
ii.
Probe gut mischen und mit Hilfe der zum Lieferumfang
gehörenden Pipette 0,1 ml (erste Markierung unterhalb
der Spitze) der flüssigen Probe (nasale Spülung oder
Proben im Transportmedium) in das dafür vorgesehene
Röhrchen geben.
4.
Mit Hilfe einer Pipette je 0,1 ml (erste geprägte Markierung unterhalb
der Spitze) der Probe in die Flu-A-Probenvertiefung und die Flu-BProbenvertiefung des korrekt etikettierten Xpect Testgeräts
übertragen.
5.
Lesen und protokollieren Sie die Testergebnisse bei 15 Minuten
entsprechend der Anweisungen im Abschnitt "Interpretation".
(Ausgeprägte positive Ergebnisse können vor Ablauf von 15 Minuten
angezeigt werden.)
Nicht interpretierbar
Auswertungsergebnisse:
Positiv - Positiv in Bezug auf Influenza A und/oder B-Antigene. Dieses
Ergebnis schließt die gleichzeitige Infektion mit anderen
Erregern nicht aus und gibt keinen Aufschluss über spezifische
Subtypen des Influenza A-Virus.
INTERPRETATION
Das Testgerät verfügt über zwei separate Ergebnisfenster; das auf der
linken Seite ist für Flu A und das auf der rechten Seite ist für Flu B (siehe
Abb.).
Negativ - Negativ in Bezug auf Influenza A und/oder B-Antigene.
Negative Ergebnisse schließen keine Infektion mit InfluenzaViren aus und sollte nicht als einzige Grundlage für
Behandlungen oder andere Verlaufsentscheidungen verwendet
werden. Dies liegt an der Tatsache, dass das in der Probe
vorhandene Antigen in einer Menge unterhalb der
Nachweisgrenze vorliegt. Ein negatives Testergebnis ist
vermutliche und es wird empfohlen diese Ergebnisse durch
Virus Kultur oder mit FDA-Zulassung Influenza-A-und B
molekularen Assays bestätigt werden.
6
GERMAN
Testleistung nach Standort:
QUALITÄTSKONTROLLE
Intern: Der Test enthält eine integrierte Verfahrenskontrolle. Eine im (C)Bereich angezeigte farbige Linie dient als interne positive
Verfahrenskontrolle und weist auf eine ordnungsgemäße Leistung und
reaktive Reagenzien hin. Ein deutlicher Hintergrund im Ergebnisbereich
wird als interne Negativkontrolle angesehen. Wenn der Test
ordnungsgemäß ausgeführt wurde und die Reagenzien ordnungsgemäß
funktionieren, ist das Ergebnis vor dem Hintergrund deutlich zu erkennen.
Extern: Es wird empfohlen, dass mit jeder neuen Kit-Chargennummer
Positiv- und Negativkontrollen ausgeführt werden. Jedes Labor sollte
dabei den jeweiligen staatlichen und lokalen Bestimmungen folgen.
Qualitätskontroll-Tupfer Flu A+/B- und Flu A-/B+ sind im Kit enthalten.
Tupfer gemäß Schritt 3 (a) für Tupferproben ohne Transportmedien
handhaben. Wenn die Kontrollen nicht erwartungsgemäß funktionieren,
die Patientenergebnisse nicht aufzeichnen.
2.
3.
4.
5.
Mit dem Xpect Flu A&B Test können sowohl lebensfähige als auch
nicht-lebensfähige Influenza A- und B-Viren nachgewiesen werden.
Aufgrund des niedrigen Virensheddings, einer inadäquaten Probenentnahme oder einer nicht ordnungsgemäßen Handhabung oder eines
nicht sachgemäßen Transports, schließt ein negatives Testergebnis
das Vorhandensein von Influenzaviren nicht aus. Folglich sollten die
Ergebnisse des Xpect Flu A&B Tests zusammen mit anderen klinischen
Ergebnissen verwendet werden, um zu einer Diagnose zu gelangen.
Ein Positivtest schließt die Möglichkeit einer Ko-Infektion mit
anderen Pathogenen nicht aus.
Die Leistungsmerkmale des Xpect Flu A&B Tests wurden für die
Verwendung bei der Überwachung antiviraler Behandlungen oder für
Zellkulturnachweise bzw. Nachweismethoden nicht festgestellt.
Zur Differenzierung besonderer Influenza A-Subtypen oder
Virenstämme ist ein zusätzlicher Test in Anlehnung an die
Bestimmungen der örtlichen oder staatlichen Gesundheitsämter
notwendig.
Flu B
Standort
1
2
3
#
0/0
0/0
36/36
Empfindlichkeit
%
95% CI
NA
NA
NA
NA
100
90.3-100
#
1/1
74/74
128/128
Spezifität
%
95% CI
100
NA
100
95.1-100
100
97.2-100
A+ / B-
Kulturergebnisse
A- / B+
A- / B-
A+ / B-
10
0
0
A- / B+
0
4
0
A- / B-
0
0
16
Testleistung nach Standort:
Flu A
Standort
1
2
3
Flu B
Standort
1
2
3
Klinische Genauigkeit:
Die Leistungsfähigkeit von Xpect Flu A&B wurde in drei verschiedenen
Teststationen im Norden, Süden und Osten der USA während der
Grippesaison 2002-2003 bewertet. Zu den Standorten zählten eine
Kinderklinik (pädiatrische Population), eine Universitätsklinik (vorwiegend
erwachsene Population) sowie ein Referenzlabor (erwachsene und
pädiatrische Population (60/40)). Die Gesamtempfindlichkeit aller mit dem
Xpect Flu A&B Test ausgewerteten Proben betrug im Vergleich zur Kultur
92,2 % (71/77) für Influenza A und 97,8 % (45/46) für Influenza B. Die
Gesamt-spezifizität betrug sowohl für Influenza A (314/314) und
Influenza B (345/345) 100 %. Für Influenza A waren 6 Proben kulturpositiv
und Xpect Flu A&B-negativ. Für Influenza B waren jeweils 1 Probe
kulturpositiv und Xpect Flu A&B-negativ. Vier von fünf für die Analyse
verfügbare, abweichende Proben waren RT-PCR-positiv.
Empfindlichkeit
#
%
95% CI
10/10
100
69.2-100
0/0
NA
NA
NA
NA
NA
#
18/18
2/2
NA
Spezifität
%
95% CI
100
81.5-100
100
15.8-100
NA
NA
Empfindlichkeit
%
95% CI
100
39.8-100
NA
NA
NA
NA
#
24/24
2/2
NA
Spezifität
%
95% CI
100
85.8-100
100
15.8-100
NA
NA
#
4/4
0/0
NA
Nasaler Abstrich (n=122)
Influenza A
88,9% Empfindlichkeit (24/27); 95% CI = 70,8-97,7%
100% Spezifizität (95/95); 95% CI = 96,2-100%
Influenza B
83,3% Empfindlichkeit (5/6); 95% CI = 35,9-99,6%
100% Spezifizität (116/116); 95% CI = 96,9-100%
GESAMT
Xpect Flu A&B
Results
Nasale Spülung (n=239)
Influenza A
92,5% Empfindlichkeit (37/40); 95% CI = 79,6-98,4%
100% Spezifizität (199/199); 95% CI = 98,2-100%
A+ / BA- / B+
A- / B-
A+ / B24
0
3*
Kulturergebnisse
A- / B+
0
5
1*
A- / B0
0
89
*RT-PCR wurde mit zwei der vier verfügbaren, abweichenden Proben ausgeführt (eine
Influenza A und eine Influenza B). Beide Proben waren PCR-positiv.
Influenza B
100% Empfindlichkeit (36/36); 95% CI = 90,3-100%
100% Spezifizität (203/203); 95% CI = 98,2-100%
A+ / BA- / B+
A- / B-
Spezifität
%
95% CI
100
NA
100
94.8-100
100
97.2-100
Xpect Flu A&B
Results
LEISTUNGSMERKMALE
Xpect Flu A&B Results
#
1/1
69/69
129/129
GESAMT
In den USA herrscht Influenza vorwiegend in den Wintermonaten vor.
Während der Spitzenperioden können bis zu 30 % der getesteten Proben
Influenza-positiv sein. Der Anteil an Influenza A-positiven Proben kann im
Vergleich zu Influenza B von Jahr zu Jahr dramatisch von 50 % bis 99 %
variieren.
A+ / B37
0
3*
Empfindlichkeit
%
95% CI
NA
NA
60.0
14.7-94.7
97.1
85.1-99.9
Influenza B
100% Empfindlichkeit (4/4); 95% CI = 39,8-100%
100% Spezifizität (26/26); 95% CI = 86,8-100%
ERWARTETE WERTE
GESAMT
#
0/0
3/5
34/35
Rachenabstrich (n=30)
Influenza A
100% Empfindlichkeit (10/10); 95% CI = 69.2-100%
100% Spezifizität (20/20); 95% CI = 83,2-100%
GRENZEN DES VERFAHRENS
1.
Flu A
Standort
1
2
3
Testleistung nach Standort:
Flu A
Standort
1
2
3
Kulturergebnisse
A- / B+
A- / B0
0
36
0
0
163
Flu B
Standort
1
2
3
*RT-PCR wurde für drei abweichende Ergebnisse ausgeführt. Eine der drei Proben war
negativ für PCR, zwei waren positiv.
7
Empfindlichkeit
#
%
95% CI
24/27
88.9
70.8-97.7
0/0
NA
NA
NA
NA
NA
#
5/6
0/0
NA
Empfindlichkeit
%
95% CI
83.3
35.9-99.6
NA
NA
NA
NA
#
91/91
4/4
NA
Spezifität
%
95% CI
100
96.0-100
100
39.8-100
NA
NA
#
112/112
4/4
NA
Spezifität
%
95% CI
100
96.8-100
100
39.8-100
NA
NA
GERMAN
Sensitivität der Analyse:
Die Störanfälligkeit wurde an 17 Influenza-Stämmen getestet, davon 11
mit Influenza A- und 6 mit Influenza B-Viren. Jeder Virenstamm wurde
quantitativ erfasst und titriert, bis unter Verwendung des Xpect Flu A&BTests ein positver Endpunkt erreicht wurde. Die Virusmenge in der
Endpunktlösung, ausgedrückt pro Test, wurde als Maßangabe für die
Reaktivität des Tests bestimmt.
Typ
Nachweisgrenze
TCID50/ml
A/Anhui/1/2013
A/California/04/2009
A/New Caledonia/20/1999
A (H7N9)
A (H1N1)
A (H1N1)
1.26 x 10
3
4.41 x 10
3
1.63 x 10
A/Puerto Rico/8/34
A/Fort Monmouth/1/47
A/New Jersey/8/76
A/Hong Kong/8/68
A/Victoria/3/75
A/Port Chalmers/1/73
A/BhGoose/QH/1/05
A/Chicken/WD/98
B/Lee/40
B/Allen/45
B/Maryland/1/59
B/GL/1739/54
B/Taiwan/2/62
B/Hong Kong/5/72
A (H1N1)
A (H1N1)
A (H1N1)
A (H3N2)
A (H3N2)
A (H3N2)
A (H5N1)
A (H9N2)
B
B
B
B
B
B
Influenza-Typ
5
CEID50/ml
4
8.9 x 10
7.9 x 102
2
8.9 x 10
2
2.8 x 10
3
8.9 x 10
2
4.0 x 10
5
2.0 x 10
4
3.16 x 10
7.9 x 104
1
4 x 10
6 x 101
8.9 x 102
3 x 101
1.58 x 103
TCID50 – 50% Infektiöse Dosis der Gewebekultur (Tissue Culture Infectious Dose)
CEID50 – 50% Infektiöse Dosis in Hühnerembryos (Chicken Embryo Infectious Dose)
Obgleich belegt wurde, dass dieser Test aus einer positiven Humanprobe
kultiviertes Influenza A/California/04/2009 (H1N1) und A/Anhui/1/2013
(H7N9)-Viren
aus
positiver
Virus
nachweist,
wurden
die
Leistungsmerkmale dieses Geräts bei mit dem 2009 H1N1-Influenza-Virus
infizierten Humanproben nicht ermittelt. Xpect Flu A&B kann zwischen
Influenza A- und B-Viren, jedoch nicht die Influenza-Subtypen
unterscheiden.
Kreuzreaktivität:
Es wurden 36 Mikroorganismen mit dem Xpect Flu A&B Test ausgewertet.
Es wurde weder für Influenza A noch für Influenza B eine Kreuzreaktivität
beobachtet. Bakterien- und Hefeisolate wurden bei 108 koloniebildenden
Einheiten pro ml Konzentration getestet. Virale Isolate wurden bei
Konzentrationen von 104 bis 105 TCID50 (Gewebekultur-infektiöse Dosis)
pro ml Konzentration getestet. Die folgenden Organismen wurden im
Xpect Flu A&B Test getestet.
Acinetobacter baumanni
Bordetella pertussis
Candida albicans
Enterococcus faecalis
Escherichia coli
Gardnerella vaginalis
Haemophilus influenzae
Klebsiella pneumoniae
Lactobacillus casei
Legionella pneumophila
Listeria monocytogenes
Moraxella catarrhalis
Neisseria gonorrhoeae
Neisseria meningitidis
Neisseria sicca
Neisseria subflava
Proteus vulgaris
Pseudomonas aeruginosa
Störende Substanzen:
Die folgenden Substanzen wurden mit dem Xpect Flu A&B Test getestet
und im Assay wurden für keine der an den angegebenen Leveln
getesteten Substanzen Störungen beobachtet: Vollblut (2 %), 3
Mundspülungen (25 %), 3 Rachenabstriche (25 %), 3 Nasensprays
(25 %),
4-Acetamidophenol (Acetaminophen) (10 g/ml), Acetylsalicylicsäure (20 mg/ml), Chlorpheniramin (5 mg/ml), Dextro-methorphan
(10 mg/ml),
Diphenhydramin
(5 mg/ml),
Guaiacol-Glyzerinäther
(Guaifenesin) (20 mg/ml), Oxymetazolin (10 mg/ml), Phenylephrin
(25 mg/ml), Phenylpropanolamin (20 mg/ml).
Serratia marcescens
Staphylococcus aureus (Cowan)
Staphylococcus epidermidis
Streptococcus mutans
Streptococcus pneumoniae
Streptococcus pyogenes Group A
Streptococcus, Gruppe B
Streptococcus, Gruppe C
Streptococcus, Gruppe F
Adenovirus, Typ 5
Coronavirus
Coxsackievirus B5
Cytomegalovirus
Parainfluenza (Sendai), Typ 1
Parainfluenza, Typ 2
Parainfluenza, Typ 3
Respiratory-Syncytial-Virus, A
Rhinovirus, Typ 14
Wiederholbarkeit:
Wiederholbarkeitstests wurden an vier Standorten ausgeführt,
einschließlich eines Inhouse-Standorts, an vier unterschiedlichen Tagen
mit sechs Blindproben ausgeführt. Die aus verdünnten Influenza A- und
Influenza B-Antigenen bestehenden Proben sollten schwach positiv oder
negativ mit dem Xpect Flu A&B Test reagieren. 99% der getesteten
96 Proben produzierten das erwartete Ergebnis.
LITERATURVERWEISE
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Shaw, M.W., N.H. Arden, and H.F. Maassab. 1992. Clin. Microbiol. Rev.
5:74-92.
Centers for Disease Control and Prevention. 2003. Prevention and Control
of Influenza: Recommendations of the Advisory Committee on
Immunization Practices. Morbid. Mortal. Weekly Rep. Vol. 52, No. RR-8.
Murray, P.R., E.J. Baron, J.H. Jorgensen, M.A. Pfaller, and R.H. Yolken.
2003. Manual of Clinical Microbiology. 8th ed. ASM, Washington, D.C.
Anderson, R.N. 2002. National Vital Statistics Reports. Vol. 50, No. 16.
National Center for Health Statistics, Hyattsville, MD.
Herrmann, B., C. Larsson, and B.W. Zweygberg. 2001. J. Clin. Microbiol.
39:134-138.
Mills, R.D., K.J. Cain, and G.L. Woods. 1989. J. Clin. Microbiol. 27:25052508.
Reina, J., E. Padilla, F. Alonso, E. Ruiz de Gopegui, M. Munar, and M.
Mari. 2002. J. Clin. Microbiol. 40:3515-3517.
PACKUNGSINHALT
REF R24600, Xpect Flu A&B ...................................................20 Tests/Kit
Symbollegende
REF
Katalog-Nr.
IVD
Medizinisches Produkt für die In-Vitro-Diagnostik
LAB
Für Laborgebrauch
Gebrauchsanweisung beachten
Temperatureinschränkungen (Lagertemp.)
LOT
Chargenbezeichnung (Chargen-Nr.)
Zu verwenden bis (Verfallsdatum)
EC REP
Autorisierte Vertretung für U-Länder
Xpect® ist ein eingetragenes Warenzeichen von Thermo Fisher Scientific und deren
Tochtergesellschaften.
ATCC® ist ein eingetragenes Warenzeichen von American Type Culture Collection.
IFU 24600, Revidierte Fassung vom 2013-07-09
12076 Santa Fe Drive, Lenexa, KS 66215, USA
Allgemeine Auskünfte: (800) 255-6730 Website: www.remel.com E-Mail: [email protected]
Telefon lokal/international: (913) 888-0939 Fax international: (913) 895-4128
Printed in U.S.A
FRENCH
STOCKAGE
Stockez le produit à la température ambiante ou frigorifiez (2-25°C)
jusqu'à ce que la date d'échéance ait imprimé sur la boîte. Ne pas
congeler ou exposer à des températures trop élevées. Si stocké frigorifié,
permettez aux composants de venir à la température ambiante avant
l'emploi.
Flu A&B
PRÉCAUTIONS
UTILISATION
•
•
•
Xpect Flu A&B de Remel est un test immunochromatographique rapide in
vitro pour la détection qualitative directe de l’antigène des virus de la
grippe Influenza A ou B (nucléoprotéine) à partir du liquide de lavage
nasal, d’un écouvillonnage nasal, ou d’un écouvillonnage pharyngé chez
des patients symptomatiques. Le test a été conçu pour aider au diagnostic
rapide des infections par les virus grippaux A et B. Un test négatif est
présumée et il est recommandé ces résultats soient confirmés par culture
virale ou une grippe approuvé par la FDA A et B test moléculaire.
•
•
RESUME ET EXPLICATION
La grippe est une maladie respiratoire aiguë très contagieuse, caractérisée
par un début brutal comportant fièvre, myalgies, céphalées, malaise, toux non
productive, mal de gorge et rhinite. Dans le monde entier, la grippe
apparaît selon un caractère saisonnier unique dans la zone géographique,
mais avec les voyages internationaux, la maladie pourrait devenir un
phénomène davantage annuel. Les virus A et B de la grippe sont
responsables des épidémies de maladie survenant presque tous les hivers.1
Aux États-Unis, ces épidémies hivernales de grippe touchent 10 à 20% de la
population et sont associées à 36 000 décès et 114 000 hospitalisations en
moyenne chaque année.2 Le virus de la grippe de type C est généralement associé seulement à une maladie légère ou asymptomatique.3
•
Pour usage diagnostique in vitro uniquement.
Lire attentivement et respecter scrupuleusement les instructions.
Ne pas utiliser les composants au-delà de la date de péremption
imprimée.
Ne pas réutiliser les composants ou cartes-test du coffret.
Suivre les procédures du laboratoire établies en matière de sécurité
lorsque vous travaillez avec des échantillons de patients. Si une
infection par un nouveau virus de la grippe A est soupçonnée, selon
les critères de sélection cliniques et épidémiologiques actuels
recommandés par les autorités de santé publique, les échantillons
doivent être recueillis en observant les précautions appropriées en
matière de contrôle des infections pour les nouveaux virus virulents
de la grippe et être envoyés aux services de santé nationaux ou
locaux pour y être testés. Des cultures virales ne doivent pas être
pratiquées dans ces cas, à moins qu’un laboratoire de niveau P3 ne
soit disponible pour recevoir de tels échantillons et en faire la culture.
Prendre les précautions habituelles contre les risques microbiologiques en stérilisant convenablement les prélèvements, les
récipients et les cartes-test après usage.
PRÉLÈVEMENT DES ÉCHANTILLONS
La grippe guérit généralement en une à deux semaines, mais certaines
personnes vont présenter des complications menaçant le pronostic vital.
La grippe peut aggraver des pathologies sous-jacentes (notamment cardiopulmonaires), provoquer une pneumonie bactérienne secondaire ou une
pneumonie virale grippale primitive ou survenir en tant que co-infection
avec d’autres agents pathogènes viraux ou bactériens. La pneumonie et
la grippe représentent la septième cause la plus fréquente de décès aux
États-Unis et la cinquième cause principale de décès parmi les américains
de plus de 65 ans.4
•
Le traitement approprié des patients présentant une maladie ressemblant à
la grippe repose sur un diagnostic précis et rapide, pouvant réduire
l’utilisation inappropriée d’antibiotiques et offrir la possibilité d’utiliser un
traitement antiviral. Le diagnostic de la grippe uniquement à partir des
symptômes est difficile car les symptômes initiaux peuvent être comparables
à ceux provoqués par d’autres agents infectieux. Diverses méthodes de
laboratoire sont disponibles pour détecter le virus de la grippe, comme la
culture cellulaire classique, la culture en flacon cylindrique, l'immunofluorescence, les tests sérologiques, les tests d’amplification de l’acide
nucléique et les immuno-essais rapides.5-7 Lorsque le diagnostic est posé
dans les 48 heures suivant l’apparition des symptômes, il existe plusieurs
traitements antiviraux pouvant raccourcir la durée et diminuer la gravité des
symptômes associés à une grippe non compliquée. Ces médicaments
peuvent également être utilisés en prophylaxie pour aider à prévenir la
maladie chez les personnes en contact avec le patient. L’amantadine et la
rimantadine sont disponibles pour la prévention ou le traitement de la grippe
A uniquement. Les antiviraux de la classe des inhibiteurs de la neuraminidase utilisés contre la grippe (zanamivir et osteltamivir) sont efficaces
dans la prévention et le traitement des types A et B. Les molécules diffèrent
par leur voie d’administration, leur posologie, leurs effets secondaires, leurs
indications (âge des patients) et leur coût ; il est donc utile de différencier les
infections grippales A et B, afin de choisir le traitement le plus approprié.
•
•
•
•
•
Les échantillons pouvant être testés à l'aide du test Xpect Flu A&B
comprennent les lavages nasaux, les écouvillonnages nasaux et les
écouvillonnages pharyngés.
Il est recommandé de prélever les échantillons au stade précoce de
la maladie et de les tester dès que possible. Le prélèvement, le
stockage et le transport inadéquats des échantillons sont susceptibles
de donner des résultats de test faussement négatifs. En raison de
l'importance de la qualité des échantillons, une formation au
prélèvement des échantillons est fortement recommandée.
Les échantillons obtenus par écouvillonnage doivent être prélevés à
l'aide d’écouvillons floqués ou d’écouvillons à embout synthétique
(par exemple, en polyester) et à tige en aluminium ou en plastique.
Les écouvillons à embout en coton et à tige en bois sont contreindiqués. Les échantillons prélevés à l'aide d'écouvillons en alginate
de calcium ne sont pas acceptables.
Les échantillons fraîchement prélevés peuvent être testés
immédiatement sans l'utilisation d'un milieu de transport.
Sinon, les échantillons peuvent être placés dans un milieu de
transport approprié, maintenus entre 2 et 8°C et être testés dans les
72 heures suivant leur prélèvement.
Les échantillons congelés placés dans un milieu de transport viral liquide
approprié conservés à une température égale ou inférieure à -20°C
dans un congélateur sans dégivrage peuvent être analysés jusqu'à
six mois après leur prélèvement. Éviter de multiples cycles de
congélation/décongélation.
Milieux de transport:
Les milieux de transport suivants ont été évalués et sont compatibles avec
l’utilisation du test Xpect Flu A&B.
Milieu Amies
Milieu de transport viral de Bartels
BD™ système de transport viral universel
Milieu Cary Blair
Copan milieu de transport universel
Milieu minimum essentiel de Earle (EMEM)
EMEM contenant 1 % de sérum albumine bovine
EMEM contenant 1 % d’hydrolysat de lactalbumine
Solution salée équilibrée de Hank
Milieu de Stuart liquide
M4®
M4RT®
M5®
M6™
Tampon phosphate salin (PBS)
PBS contenant 0,5 % de sérum albumine bovine
PBS contenant 0,5 % de gélatine
Chlorure de sodium (isotonique)
Phosphate saccharose
Bouillon de soja tryptique contenant 0,5 % de sérum albumine bovine
Bouillon de soja tryptique contenant 0,5 % de gélatine
Bouillon d’infusion de veau
Bouillon d’infusion de veau contenant 0,5 % de sérum albumine bovine
Xpect Flu A&B fournit une information pratique et précieuse pour aider au
diagnostic de la grippe chez les patients symptomatiques. Les médecins
peuvent rapidement identifier les patients susceptibles de bénéficier d’un
traitement et établir le schéma thérapeutique adéquat, qui est essentiel
pour le contrôle et la prévention efficaces de la grippe.
PRINCIPE
Xpect Flu A&B est un test immunochromatographique pour la détection
qualitative des antigènes viraux Influenza A et B. La carte-test comprend
des bandelettes membranaires distinctes pour le virus grippal A et le virus
grippal B. Pour l'exécution du test, l'échantillon de patient est dilué et
ajouté aux puits d'échantillon du dispositif. Le mélange migre le long des
membranes par capillarité. Les antigènes du virus Influenza A ou B, s’ils
sont présents, se fixent sur les anticorps conjugués anti-Influenza A ou B.
Il se forme un trait visible, alors que le complexe anticorps-antigèneanticorps recouvert de particules colorées est capturé dans la zone de
test (T). Les anticorps recouverts de particules colorées mais non retenus
au niveau du trait de la zone test sont ensuite capturés dans la zone de
contrôle (C) contenant des anticorps de chèvre anti-souris. Un trait visible
apparaît toujours dans la zone de contrôle, indiquant que le test a
correctement fonctionné. La présence d’un trait de contrôle associée à
l’absence de trait visible dans la zone de test est interprétée comme un
résultat négatif.
9
FRENCH
Test positif (antigène présent):
La présence de deux traits bleus, l’un dans la zone (T) et l’autre dans la
zone (C), indique que le test est positif. Un complet, bleue, traits
clairement évidente d'essai de n'importe quelle intensité devrait être
interprété en tant que positif.
REACTIFS ET MATERIEL FOURNIS
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Tests (20): Chaque sachet en aluminium contient une carte-test à
usage unique comportant deux bandelettes membranaires. Les
bandelettes contiennent des anticorps dirigés contre le virus
Influenza A ou B.
Diluant pour échantillon (20 ml): Un flacon compte-gouttes
contenant une solution saline tamponnée, un détergent, un
mucolytique et un conservateur
Tubes de dilution (20): Tubes en plastique souple pour la
préparation des échantillons
Pipettes de transfert jetables (20): Pipettes graduées avec
incréments de 0,1 ml environ
Ecouvillons de contrôle pour le virus grippal A+/B- (1): Un
écouvillon sec contenant l’antigène Influenza A inactivé
Ecouvillons de contrôle pour le virus grippal A-/B+ (1): Un
écouvillon sec contenant l’antigène Influenza B inactivé
Notice d’utilisation (IFU)
Flu A
Positif
MATÉRIEL REQUIS MAIS NON FOURNI
1.
2.
Flu B
Positif
Minuteur
Récipients pour le recueil des échantillons et milieux de transport
Test négatif (antigène non détecté):
La présence d’un seul trait bleu dans la zone de contrôle (C) indique que le
test est négatif.
MODE OPERATOIRE
1.
Au moment de réaliser le test, retirer le dispositif du sachet en
aluminium et le placer sur une surface plane. (Laisser les
composants du coffret atteindre la température ambiante s’ils sont
conservés au réfrigérateur.)
2.
Etiqueter la carte-test avec l’identification du patient ou du contrôle.
3.
Préparation de l’échantillon:
a.
Pour l’écouvillon spécimens sans dilution dans des médias
de transport (y compris les écouvillons de contrôle qualité
fournis avec le coffret):
i.
Déposer 25 gouttes (environ 0,6 ml) de diluant pour
échantillon dans un tube de dilution.
i.
Placer l’écouvillon portant l’échantillon dans le
tube.
ii.
Mélanger complètement ou passer au mélangeur
vortex pour libérer le matériel antigénique retenu sur
l’écouvillon.
iii.
Faire tourner l’écouvillon fermement contre les
parois du tube puis pincer les bords du tube
(comme sur la représentation) en retirant l’écouvillon.
Flu A et B
Négatif
Test non valide:
Un essai inadmissible se produit quand la bande d'essai est partielle ou
inachevée ou la bande de commande est absente ou inachevée. Les
tests ayant entraîné un résultat non valide en raison d’un excès de mucus
dans l’échantillon peuvent être répétés en utilisant deux fois le volume
normal de diluant pour échantillon au cours de l’étape de dilution.
*Ecouvillon non immergé dans un volume suffisant de milieu de transport
pour permettre le traitement de 0,1 ml.
b.
Pour les lavages nasaux et l’écouvillon spécimens
transportés en >0.3 ml de médias liquids:
ii.
Déposer 5 gouttes (environ 0,1 ml) de diluant pour
échantillon dans le tube de dilution fourni.
iii.
Bien mélanger l’échantillon et utiliser une pipette de
transfert fournie dans le coffret pour transférer 0,1 ml
(première graduation moulée à partir de l’embout)
d’échantillon liquide (liquide de lavage nasal ou
échantillons dans un milieu de transport) dans le tube de
dilution fourni.
4.
Utiliser une pipette de transfert pour verser 0,1 ml (première
graduation en partant de la pointe) d'échantillon dans le puits
d'échantillon Flu A et 0,1 ml dans le puits d'échantillon Flu B du
dispositif de test Xpect dûment étiqueté.
5.
Lire à l’œil nu et enregistrer les résultats du test à 15 minutes selon
la section Interprétation. (Les résultats fortement positifs peuvent
apparaître avant 15 minutes.)
Non interprétable
Expression des résultats:
Il est recommandé d’exprimer les résultats de la façon suivante:
Positif - Positif pour l'antigène de la grippe A et/ou de la grippe B. Ce
résultat n'exclut pas des co-infections par d'autres pathogènes
et n’identifie pas de quelque sous-type spécifique du virus de la
grippe A il s'agit.
INTERPRÉTATION
Le dispositif est muni de deux fenêtres distinctes de lecture, l’une sur la
gauche pour le virus Influenza A et l’autre sur la droite pour le virus
Influenza B comme sur la représentation.
Négatif -
10
Négatif pour l'antigène de la grippe A et/ou de la grippe B. Des
résultats négatifs n'écartent pas une infection par le virus de la
grippe et ne doivent pas être utilisés comme fondement unique
pour le traitement ou d'autres décisions de prise en charge, car
l'antigène présent dans l’échantillon peut être au-dessous de la
limite de détection du test. Un test négatif est présumée et il est
recommandé ces résultats soient confirmés par culture virale
ou une grippe approuvé par la FDA A et B test moléculaire.
FRENCH
CONTRÔLE DE QUALITÉ
Performance du test par centre:
Interne: Le test comprend un contrôle interne. L’apparition d’un trait
coloré dans la zone de contrôle (C) est considérée comme un contrôle
interne positif du test, indiquant le bon fonctionnement du test et des
réactifs. Un fond clair dans la zone de résultat est considéré comme un
contrôle interne négatif. Si le test a été réalisé correctement et si les
réactifs fonctionnent correctement, le fond s’éclaircit pour donner un
résultat discernable.
Externe: Il est recommandé de tester les contrôles positif et négatif pour
chaque nouveau numéro de lot de coffret. Tous les laboratoires doivent
suivre les exigences locales et nationales.
Les écouvillons de contrôle qualité Flu A+/B- et Flu A-/B+ sont fournis
avec le coffret. Traiter les écouvillons selon l’étape 3 (a) du mode
opératoire pour les écouvillonnages sans milieu de transport. Si les
contrôles ne donnent pas les résultats escomptés, ne pas considérer les
résultats du patient.
2.
3.
4.
5.
Les virus Influenza A et B sont détectables avec le test Xpect Flu
A&B, qu’ils soient viables ou non.
A cause des faibles concentrations dues à une perte virale, un
recueil inapproprié de l’échantillon ou une manipulation ou un
transport inadaptés, un résultat négatif n’exclut pas la présence du
virus grippal. En conséquence, les résultats du test Xpect Flu A&B
doivent être interprétés conjointement avec les autres résultats
cliniques pour établir un diagnostic.
Un test positif n’exclut pas la possibilité de co-infection par un autre
agent pathogène.
Les performances du test Xpect Flu A&B n’ont pas été établies pour
la surveillance du traitement ou pour les méthodes de culture
cellulaire de confirmation/identification.
Des tests complémentaires sont requis afin de différencier des soustypes ou des souches spécifiques de la grippe A, en consultation
avec les services de santé nationaux et locaux.
Spécificité
%
IC à 95%
100
NA
100
94,8-100
100
97,2-100
Flu B
Centre
1
2
3
#
0/0
0/0
36/36
Sensibilité
%
IC à 95%
NA
NA
NA
NA
100
90,3-100
#
1/1
74/74
128/128
Spécificité
%
IC à 95%
100
NA
100
95,1-100
100
97,2-100
Résultats du test
Xpect Flu A&B
A+ / BA- / B+
A- / B-
Résultats de la culture
A+ / BA- / B+
A- / B10
0
0
0
4
0
0
0
16
Performance du test par centre:
CARACTÉRISTIQUES DE PERFORMANCE
Précision clinique:
Les performances du test Xpect Flu A&B ont été évaluées dans trois sites
situés au nord, au sud et à l’est des États-Unis pendant la saison de la
grippe 2002-2003. Les centres d’essai clinique comprenaient un hôpital
pour enfants (population pédiatrique), un hôpital universitaire (population
essentiellement adulte) et un laboratoire de référence (population adulte
et pédiatrique [60/40]). Pour tous les échantillons analysés, la sensibilité
globale du test Xpect Flu A&B, comparé aux cultures a été de 92,2 %
(71/77) pour le virus grippal A et de 97,8 % (45/46) pour le virus grippal B.
La spécificité globale a été de 100% pour les deux virus Influenza A
(314/314) et B (345/345). Pour le virus Influenza A, 6 échantillons ont
présenté une culture positive et un test Xpect Flu A&B négatif. Pour le
virus Influenza B, 1 échantillon a présenté une culture positive et un test
Xpect Flu A&B négatif. Quatre échantillons divergents sur les cinq
disponibles pour analyse ont été positifs par PCR-RT.
Flu A
Centre
1
2
3
#
10/10
0/0
NA
Sensibilité
%
IC à 95%
100
69,2-100
NA
NA
NA
NA
#
18/18
2/2
NA
Spécificité
%
IC à 95%
100
81,5-100
100
15,8-100
NA
NA
Flu B
Centre
1
2
3
#
4/4
0/0
NA
Sensibilité
%
IC à 95%
100
39.8-100
NA
NA
NA
NA
#
24/24
2/2
NA
Spécificité
%
IC à 95%
100
85.8-100
100
15,8-100
NA
NA
Ecouvillonnage nasal (n=122)
Influenza A
Sensibilité de 88,9% (24/27); IC à 95% = 70,8-97,7%
Spécificité de 100% (95/95); IC à 95% = 96,2-100%
Influenza B
Sensibilité de 83,3% (5/6); IC à 95% = 35,9-99,6%
Spécificité de 100% (116/116); IC à 95% = 96,9-100%
GLOBAL
Résultats du test
Xpect Flu A&B
A+ / BA- / B+
A- / B-
Résultats de la culture
A+ / BA- / B+
A- / B24
0
0
0
5
0
3*
1*
89
*Une PCR-RT a été réalisée sur les deux échantillons divergents sur quatre qui étaient
disponibles (un virus grippal A et un virus grippal B). Les deux échantillons se sont révélés
positifs par PCR.
Liquide de lavage nasal (n = 239)
Influenza A
Sensibilité de 92,5% (37/40); IC à 95% = 79,6-98,4%
Spécificité de 100% (199/199); IC à 95% = 98,2-100%
Performance du test par centre:
Influenza B
Sensibilité de 100% (36/36); IC à 95% = 90,3-100%
Spécificité de 100% (203/203); IC à 95% = 98,2-100%
A+ / BA- / B+
A- / B-
#
1/1
69/69
129/129
GLOBAL
Aux États-unis la grippe est prévalente essentiellement pendant les mois
d’hiver. Pendant les périodes de pointe, jusqu’à 30 % des échantillons
analysés peuvent donner une culture positive du virus Influenza. La
proportion d’échantillons positifs pour le virus grippal A comparativement
au virus grippal B peut varier considérablement d’une année à l’autre,
allant d’environ 50 % à 99 %.
Résultats du test
Xpect Flu A&B
Sensibilité
%
IC à 95%
NA
NA
60,0
14,7-94,7
97,1
85,1-99,9
Influenza B
Sensibilité de 100% (4/4); IC à 95% = 39,8-100%
Spécificité de 100% (26/26); IC à 95% = 86,8-100%
VALEURS ATTENDUES
GLOBAL
#
0/0
3/5
34/35
Ecouvillonnage pharyngé (n=30)
Influenza A
Sensibilité de 100% (10/10); IC à 95% = 69,2-100%
Spécificité de 100% (20/20); IC à 95% = 83,2-100%
LIMITES
1.
Flu A
Centre
1
2
3
Résultats de la culture
A+ / BA- / B+
A- / B37
0
0
0
36
0
3*
0
163
*Une PCR-RT a été réalisée sur les trois résultats divergents. Un des trois échantillons s’est
révélé négatif par PCR, les deux autres ont été posiitifs.
11
Flu A
Centre
1
2
3
#
24/27
0/0
NA
Sensibilité
%
IC à 95%
88,9
70,8-97,7
NA
NA
NA
NA
#
91/91
4/4
NA
Spécificité
%
IC à 95%
100
96,0-100
100
39,8-100
NA
NA
Flu B
Centre
1
2
3
#
5/6
0/0
NA
Sensibilité
%
IC à 95%
83,3
35,9-99,6
NA
NA
NA
NA
#
112/112
4/4
NA
Spécificité
%
IC à 95%
100
96,8-100
100
39,8-100
NA
NA
FRENCH
Sensibilité Analytique:
La sensibilità analitica è stata valutata utilizzando 17 ceppi di influenza, 11
di influenza A e 6 di influenza B. Ciascun ceppo virale è stato quantificato
e titolato fino a ottenere un risultato finale positivo con il test Flu A&B
Xpect. La quantità di virus presente nella diluizione finale è stata utilizzata
come unità di misura per la sensibilità analitica.
Souche d’Influenza
A/Anhui/1/2013
A/California/04/2009
A/New Caledonia/20/1999
Type
Seuil de détection
TCID50/ml
A (H7N9)
A (H1N1)
A (H1N1)
1.26 x 10
4.41 x 103
3
1.63 x 10
5
CEID50/ml
A/Puerto Rico/8/34
A/Fort Monmouth/1/47
A/New Jersey/8/76
A/Hong Kong/8/68
A/Victoria/3/75
A/Port Chalmers/1/73
A/BhGoose/QH/1/05
A/Chicken/WD/98
B/Lee/40
B/Allen/45
B/Maryland/1/59
B/GL/1739/54
B/Taiwan/2/62
B/Hong Kong/5/72
A (H1N1)
A (H1N1)
A (H1N1)
A (H3N2)
A (H3N2)
A (H3N2)
A (H5N1)
A (H9N2)
B
B
B
B
B
B
8.9 x 104
2
7.9 x 10
2
8.9 x 10
2
2.8 x 10
3
8.9 x 10
4.0 x 102
5
2.0 x 10
3.16 x 104
4
7.9 x 10
1
4 x 10
6 x 101
8.9 x 102
3 x 101
1.58 x 103
TCID50 - dose infectieuse sur la culture de tissus 50%
CEID50 - dose infectieuse sur un embryon de poulet 50%
Bien qu'il ait été montré que ce test détecte le virus de la grippe
A/Californie/04/2009 (H1N1) et A/Anhui/1/2013 (H7N9) mis en culture à
partir d'un échantillon humain positif, les caractéristiques de performance
de ce dispositif avec des échantillons humains infectés par le virus de la
grippe ces n’ont pas été établies. Le test Xpect Flu A&B permet de faire la
distinction entre les virus de la grippe A et B mais ne permet pas de
différencier les sous-types de grippe.
Substances interférant:
Les substances suivantes ont été testées avec Xpect Flu A&B; aucune
interférence n’a été observée pour le dosage des substances testées aux
concentrations indiquées: sang total (2%), 3 liquides de lavage buccal
(25%), 3 gouttes pour la gorge (25%), 3 pulvérisateurs nasaux (25%), 4acétamidophénol (acétaminophène) (10 mg/ml), acide acétylsalicylique
(20 mg/ml), chlorphéniramine (5 mg/ml), dextrométhorphan (10 mg/ml),
diphénhydramine (5 mg/ml), éther glycérique du guaiacol (guaifénésine)
(20 mg/ml), oxymétazoline
(10 mg/ml), phényléphrine (25 mg/ml),
phénylpropanolamine (20 mg/ml).
Reproductibilité:
Les essais de reproductibilité ont été réalisés dans quatre centres,
comprenant un centre en interne, sur quatre jours différents avec six
échantillons en aveugle. Les échantillons liquides comprenaient des
antigènes dilués des virus Influenza A et B conçus pour donner des
résultats faiblement positifs ou négatifs avec le test Xpect Flu A&B.
Quatre-vingt dix-neuf pourcents des 96 échantillons testés ont produit le
résultat attendu.
BIBLIOGRAPHIE
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Shaw, M.W., N.H. Arden, and H.F. Maassab. 1992. Clin. Microbiol. Rev.
5:74-92.
Centers for Disease Control and Prevention. 2003. Prevention and Control
of Influenza: Recommendations of the Advisory Committee on Immunization Practices. Morbid. Mortal. Weekly Rep. 52, No. RR-8.
Murray, P.R., E.J. Baron, J.H. Jorgensen, M.A. Pfaller, and R.H. Yolken.
2003. Manual of Clinical Microbiology. 8th ed. ASM, Washington, D.C.
Anderson, R.N. 2002. National Vital Statistics Reports. Vol. 50, No. 16.
National Center for Health Statistics, Hyattsville, MD.
Herrmann, B., C. Larsson, and B.W. Zweygberg. 2001. J. Clin. Microbiol.
39:134-138.
Mills, R.D., K.J. Cain, and G.L. Woods. 1989. J. Clin. Microbiol. 27:25052508.
Reina, J., E. Padilla, F. Alonso, E. Ruiz de Gopegui, M. Munar, and M.
Mari. 2002. J. Clin. Microbiol. 40:3515-3517.
CONDITIONNEMENT
REF R24600, Xpect Flu A&B ............................................. 20 Tests/coffret
Legende Des Symboles Utilises
Réactions croisées:
Trente-six microorganismes ont été évalués avec le test Xpect Flu A&B.
On n’a observé aucune réaction croisée avec les virus Influenza A ou B.
Les isolats de bactéries et de levures ont été testés à la concentration de
108 unités formant colonie (UFC) par ml. Les isolats viraux ont été testés
aux concentrations de 104 à 105 TCID50 (dose infectant 50% des cultures
tissulaires) par ml. Les organismes suivants ont été analysés avec le test
Xpect Flu A&B.
Acinetobacter baumanni
Bordetella pertussis
Candida albicans
Enterococcus faecalis
Escherichia coli
Gardnerella vaginalis
Haemophilus influenzae
Klebsiella pneumoniae
Lactobacillus casei
Legionella pneumophila
Listeria monocytogenes
Moraxella catarrhalis
Neisseria gonorrhoeae
Neisseria meningitidis
Neisseria sicca
Neisseria subflava
Proteus vulgaris
Pseudomonas aeruginosa
Serratia marcescens
Staphylococcus aureus (Cowan)
Staphylococcus epidermidis
Streptococcus mutans
Streptococcus pneumoniae
Streptococcus pyogenes Group A
Streptococcus, Group B
Streptococcus, Group C
Streptococcus, Group F
Adenovirus, Type 5
Coronavirus
Coxsackievirus B5
Cytomegalovirus
Parainfluenza (Sendai), Type 1
Parainfluenza, Type 2
Parainfluenza, Type 3
Virus syncytial respiratoire, A
Rhinovirus, Type 14
REF
Numéro de catalogue
IVD
Dispositif médical de diagnostic in vitro
LAB
Pour l ‘usage de laboratoire
Lire les instructions avant utilisation (IFU = mode d’emploi)
Limites de température (stockage)
LOT
Code de lot (numéro de lot)
À utiliser avant le (date de péremption)
EC REP
Représentant autorisé pour l'UE
Xpect® est une marque déposée de Thermo Fisher Scientific et ses filiales.
ATCC® est une marque déposée d’American Type Culture Collection.
IFU 24600, révisé le 2013-07-09
12076 Santa Fe Drive, Lenexa, KS 66215, États-Unis
Renseignements: (800) 255-6730
Site Web: www.remel.com
E-mail: [email protected]
Téléphone (international): +1 (913) 888-0939 Télécopie (international): +1 (913) 895-4128
Imprimé aux États-Unis d’Amérique
ITALIAN
alla linea del test sono catturati successivamente nella zona di controllo
(C) con anticorpi anti-topo di capra. Se il test funziona correttamente
compare una linea nella zona di controllo. Se compare una linea di
controllo e si nota contemporaneamente l’assenza di una linea del test, il
risultato è negativo.
Flu A&B
CONDIZIONI DI CONSERVAZIONE
Immagazzini il prodotto alla temperatura ambiente o frigorifero (2-25°C) fino
alla data di scadenza riportata sulla scatola. Non congelare o
surriscaldare. Se conservati in frigorifero, prima dell’uso i componenti
devono raggiungere la temperatura ambiente.
USO PREVISTO
Remel Xpect Flu A&B è un testo in vitro immunocromatografico per la
rilevazione qualitativa diretta dell’antigene virale (nucleoproteina)
dell’influenza A e B di campioni di lavaggio nasale, tampone nasale e
lavaggio tracheale da pazienti sintomatici. Il è test è uno strumento
prezioso per la diagnosi rapida delle infezioni virali dell’influenza A e B.Un
test negativo è presuntiva e si consiglia di questi risultati saranno
confermati da coltura virus o un influenzale approvato dalla FDA A e B
test molecolare.
PRECAUZIONI
Esclusivamente per uso diagnostico in Vitro.
•
•
Leggere con attenzione le istruzioni contenute in questo documento
•
•
•
DESCRIZIONE DEL PRODOTTO
L’influenza è una malattia respiratoria acuta altamente contagiosa
caratterizzata dall’improvvisa insorgenza di febbre, mialgia, mal di testa,
malessere, tosse non produttiva, infiammazione della faringe e rinite. In
tutto il mondo l’incidenza dell’influenza è stagionale e limitata a una
specifica area geografica, ma con la diffusione dei viaggi internazionali la
malattia può diventare un fenomeno annuale. I virus dell’influenza di tipo
A e B sono responsabili di epidemie che si verificano per lo più in
inverno1. Negli Stati Uniti le epidemie invernali possono raggiungere un
tasso di incidenza nella popolazione pari a 10-20% e sono associate a
una media di 36.000 decessi e 114.000 ospedalizzazioni all’anno2.
L’influenza di tipo C, invece, è generalmente asintomatica o presenta
sintomi di lieve entità3.
•
Di solito l’influenza scompare dopo una o due settimane, ma vi sono
anche soggetti in cui si verificano complicanze letali. L’influenza può
determinare l’esacerbazione di una patologia latente (per es. patologie
cardiopolmonari), può portare a polmonite batterica secondaria o
polmonite virale influenzale o si verifica come infezione multipla con altri
agenti patogeni o batterici. La polmonite e l’influenza sono la settima più
comune causa di morte negli Stati Uniti e la quinta causa principale di
morte tra gli americani di età superiore a 65 anni4.
e seguirle scrupolosamente.
Non utilizzare i componenti scaduti.
Non riutilizzare i componenti del kit o i dispositivi del test.
Quando si trattano campioni umani, attenersi alle procedure
standard di sicurezza del laboratorio. Qualora, sulla base degli
attuali criteri di monitoraggio clinico ed epidemiologico raccomandati
dalle autorità di sanità pubblica, si sospetti un'infezione da virus della
nuova influenza A, prelevare i campioni adottando le dovute
precauzioni per il controllo delle infezioni da virus della nuova
influenza e inviarli ai dipartimenti sanitari statali o locali per farli
analizzare. In questi casi non eseguire colture virali, salvo siano
presenti laboratori a livello 3 di biosicurezza disponibili a ricevere e a
eseguire una coltura di campioni.
Si consiglia di adottare le consuete precauzioni contro eventuali
rischi microbiologici sterilizzando opportunamente dopo l'uso
campioni, contenitori, strumenti e dispositivi di analisi.
RACCOLTA DEI CAMPIONI, CONSERVAZIONE E TRASPORTO
•
•
La terapia adeguata per i pazienti con patologie influenzali dipende da
un’accurata e tempestiva diagnosi, che può ridurre il rischio di
somministrazione di terapie inadeguate a base di antibiotici, consentendo
in questo modo di scegliere terapie antivirali. È difficile formulare la
diagnosi di influenza basandosi soltanto sui sintomi, perché quelli inziali
possono essere simili a quelli causati da altri agenti infettivi. Sono
dipsonibili in commercio molti metodi di laboratorio per la rilevazione del
virus dell’influenza che comprendono colture cellulari variabili, coltura
cellulare in fiale, colorazione mediante immunofluorescenza, test
sierologici, esame di rilevazione dell’acido nucleico amplificato e dosaggi
immunologici rapidi 5,6,7. Se l’influenza vine diagnosticata nelle 48 ore
successive all’insorgenza dei sintomi è possibile ricorre ai molti farmaci
antivirali disponibili, che consentono di ridurre la durata della patologia e
diminuire la gravità dei sintomi associati a un’influenza con complicazioni.
Questi farmaci possono anche essere somministrati come trattamento
profilattico per prevenire il contagio con pazienti affetti dalla malattia.
L’amantadina e la rimantadina sono adatti soltanto per la prevenzione o il
trattamento dell’influenza di tipo A. Gli inibitori della neuraminidasi
(zanamivir and oseltamivir) sono farmaci antivirali efficaci per prevenire e
trattare entrambi i tipo dei influenza (tipo A e tipo B). Poiché però questi
due farmaci si differenziano per la via di somministrazione, il regime
posologico, gli effetti collaterali, le indicazioni per l’uso (età del paziente) e il
costo, in genere si distinguono le infezioni di tipo A da quelle di tipo B al fine
di scegliere il trattamento terapeutico più adatto.
•
•
•
•
I campioni adatti per il test con il kit Flu A&B Xpect sono i lavaggi
nasali e i tamponi nasali e della gola.
I campioni devono essere prelevati durante la prima fase della
malattia e analizzati quanto prima possibile. Il prelievo, la
conservazione e il trasporto inadeguati dei campioni possono
produrre risultati falso-negativi. Considerata l’importanza della
qualità del materiale da analizzare, si consiglia vivamente di
rivolgersi a personale specializzato nel prelievo dei campioni.
I campioni devono essere raccolti utilizzando tamponi a spazzola o
con punta sintetica (ad esempio poliestere) e con manico in plastica
o in alluminio. Sono sconsigliati i tamponi con punta di cotone e
manico in legno. Non sono accettabili campioni raccolti con tamponi
di alginato di calcio.
I campioni appena prelevati possono essere analizzati immediatamente senza utilizzare terreni di trasporto.
In alternativa, collocare i campioni in un terreno di trasporto idoneo,
conservarli a temperatura compresa tra 2-8°C e analizzarli entro 72
ore dal prelievo.
I campioni congelati in un terreno di trasporto liquido per virus e
conservati a -20°C o a una temperatura inferiore in un freezer non a
sbrinamento automatico possono essere esaminati entro 6 mesi dal
prelievo. Evitare cicli successivi di congelamento e scongelamento.
Terreni di trasporto:
I terreni di coltura elencati qui di seguito sono stati sottoposti a valutazione
e considerati compatibili con il test Xpect Flu A&B.
Terreno di Amies
Terreno di trasporto virale di Bartel
BD™ sistema di trasporto virale universale
Terreno di Cary Blair
Copan terreno di trasporto universale
Terreno minimo essenziale (EMEM) di Earle
EMEM con sieroalbumina di bovino 1%
EMEM idrolisato di lattalbumina 1%
Soluzione salina bilanciata di Hank
Terreno liquido di Stuart
M4®
M4RT®
M5®
M6™
Soluzione salina tamponata con fosfato (PBS)
PBS con sieroalbumina di bovino 0,5%
PBS con gelatina 0,5%
Soluzione salina (normale)
Saccarosio fosfato
Brodo Tryptic Soy con sieroalbumina di bovino 0,5%
Brodo Tryptic Soy con gelatina 0,5%
Brodo di infusione di vitello
Brodo di infusione di vitello con 0,5% di sieroalbumina di bovino
Il test Xpect Flu A&B fornisce preziose informazioni pratiche per formulare
la diagnosi di influenza in pazienti sintomatici. Grazie a Xpect Flu A&B il
medico è in grado di identificare velocemente la tipologia di pazienti che
possono trarre beneficio dalla terapia e stabilire il regime terapeutico più
efficace, fondamentale per un controllo e una prevenzione adeguata
dell’influenaza.
PRINCIPIO
Xpect Flu A&B è un immunodosaggio cromatografico per la rilevazione
qualitativa degli antigeni virali dell’influenza di tipo A e dell’influenza di tipo
B. Il dispositivo del test è munito di strisce di membrana distinte per
l’influenza di tipo A e per l’influenza di tipo B.
Per l'esecuzione del test, il campione del paziente viene diluito e aggiunto
nei pozzetti per campioni del dispositivo. La miscela si muove lungo le
membrane per azione capillare. Se presenti nel campione del paziente, gli
antigeni virali dell’influenza di tipo A o B legano gli anticorpi coniugati
contro l’influenza di tipo A o B. Un complesso anticorpo-atigene-anticorpo
rivestito di particelle colorate, a forma di una linea, viene catturato nella
zona (T) del test. Gli anticorpi rivestiti di particelle colorate non catturati
13
ITALIAN
Test positivo (antigene presente)
Se il test è positivo compaiono due strisce blu, una nella regione (T) e una
nella regione (C). Una completo striscia blu chiaramente visibile, dovrebbe
essere interpretato come positivo.
REAGENTI E MATERIALI FORNITI
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Dispositivi per il test (20): ogni busta in carta metallizzata contiene
un dispositivo per il test monouso con due strisce di membrana. Le
strisce nel dispositivo contengono anticorpi contro l’influenza A o B.
Diluente campione (20 ml): un flacone contagocce contiene una
soluzione salina tampone con detergente, un agente mucolitico e un
conservante
Provette di diluizione (20): provette flessibili in plastica per la
preparazione dei campioni
Pipette di trasferimento monouso (20): Pipette con graduzione a
intervalli di ca. 0,1 ml
Tamponi di controllo per influenza A+/B- (1): un tampone a secco
contenente l’antigene inattivo dell’influenza A
Tamponi di controllo per l’influenza A-/B+ (1): un tampone a
secco contenente l’antigene inattivo dell’influenza B
Istruzioni per l’uso (IFU)
Flu A
Positivo
MATERIALI NECESSARI MA NON FORNITI
1.
2.
Timer
Contenitori per la raccolta campioni e il terreno di trasporto
Test negativo (antigene non rilevato)
Se il test è negativo compare soltanto una striscia blu nella zona di controllo
(C).
PROCEDIMENTO
1.
Rimuovere il dispositivo per il test dall’involucro di carta metallizzata al
momento di eseguire il test e posizionarlo su una superficie piana. Far
equilibrare i componenti a temperatura ambiente se refrigerati.
2.
Apporre al dispositivo l'etichetta che consente di identificare il paziente o
il controllo.
3.
Preparazione dei campioni:
a.
Per campioni tamponi senza diluzione* nei mezzi di trasporto
(compresi i tamponi controllo qualità forniti con il kit):
i.
Dispensare 25 gocce (ca. 0,6 ml) di diluente del
campione in una provetta di diluizione.
ii.
Posizionare il campione tampone nella provetta.
iii.
Miscelare accuratamente o passare nel vortex per
far rilasciare l'antigene catturato dal tampone.
iv.
Ruotare il campione energicamente contro le
pareti della provetta, quindi premerne i lati (come
illustrato) rimuovendo il tampone.
Flu A e B
Negativo
Test non valido
Una prova non valida accade quando la fascia della prova è parziale o
incompleta o la fascia di controllo è assente o incomplete. I risultati non
validi dovuti a campioni eccessivamente mucoidi possono essere ripetuti
usando il diluente del campione raddoppiato di volume durante il
passaggio di diluizione.
*Il campione non è stato sommerso in un volume sufficiente di
terreno di trasporto per consentire il trattamento di 0,1 ml.
b.
4.
5.
Per lavaggio nasale e campioni tamponi trasportato dentro >
0.3 ml liquids medias:
i.
Dispensare 5 gocce (ca. 0,1 ml) di diluente del campione
nell’apposita provetta diluizione fornita in dotazione.
ii.
Miscelare accuratamente il campione e con la pipetta di
trasferimento presente nel kit trasferire 0,1 ml (1a tacca
della scala graduata a partire dalla punta) di campione
liquido (lavaggio nasale o campioni nel terreno di
trasporto dei campioni) nella provetta di diluizione fornita
in dotazione.
Flu B
Positivo
Usare una pipetta di trasferimento per dispensare 0,1 ml (prima tacca
graduata incisa dalla punta della pipetta) di campione nel pozzetto per
campione Flu A e 0,1 ml nel pozzetto per campione Flu B del
dispositivo per test Xpect adeguatamente etichettato.
Non interpretabile
Leggere e refertare i risultati del test dopo 15 minuti in conformità alle
indicazioni presenti nella sezione Interpretazione. Risultati
chiaramente positivi possono essere visibili prima di 15 minuti.
Refertazione dei risultati:
È opportuno che i risultati siano refertati come indicato qui di seguito.
Positivo - Positivo all’antigene dell’influenza A e/o dell’influenza B.
Questo risultato non esclude infezioni secondarie da altri
patogeni, né identifica alcun sottotipo specifico del virus
dell’influenza A.
INTERPRETAZIONE
Il dispositivo del test è munito di due diverse finestre di lettura: una sulla
sinistra per l’influenza A e una sulla destra per l’influenza B come illustrato
nella figura qui di seguito.
Negativo - Negativo all’antigene dell’influenza A e/o dell’influenza B. I
risultati negativi non escludono un'infezione da virus
dell’influenza e non possono essere utilizzati come unica base
di riferimento per la terapia o per altre decisioni relative alla
gestione della malattia, in quanto l’antigene presente nel
campione può essere inferiore alla soglia di sensibilità
dell'analisi. Un test negativo è presuntiva e si consiglia di questi
risultati saranno confermati da coltura virus o un influenzale
approvato dalla FDA A e B test molecolare.
14
ITALIAN
CONTROLLO QUALITÀ
Prestazioni del test per ogni singolo laboratorio:
Interno: un controllo della procedura è compreso nel kit del test. Se
compare una striscia colorata nella zona della banda di controllo (C), il
controllo interno della procedura è considerato positivo. In questo caso le
prestazioni del test e dei reagenti sono state adeguate. Uno sfondo
chiaro nella zona dei risultati indica invece un controllo interno negativo.
Se il test è stato eseguito in maniera corretta e i reagenti agiscono in
maniera adeguata, lo sfondo scomparirà e sarà possibile leggere il
risultato molto chiaramente.
Esterno: si consiglia di eseguire il controllo positivo e negativo ad ogni
nuovo numero di lotto del test. Ogni laboratorio deve attenersi
scrupolosamente alle normative nazionali o locali.
I tamponi per il controllo qualità influenza A+/B- e influenza A-/B+ sono
presenti nel kit del test. Trattare i campioni in conformità alla procedura
descritta al Passaggio 3 (a) per i campioni tampone senza terreno di
trasporto. Se il controllo non dà i risultati attesi non refertare i dati ottenuti.
3.
4.
5.
#
0/0
3/5
34/35
Sensibilità
%
95% CI
NA
NA
60,0
14,7-94,7
97,1
85,1-99,9
#
1/1
69/69
129/129
Specificità
%
95% CI
100
NA
100
94,8-100
100
97,2-100
Flu B
Laboratorio
1
2
3
#
0/0
0/0
36/36
Sensibilità
%
95% CI
NA
NA
NA
NA
100
90,3-100
#
1/1
74/74
128/128
Specificità
%
95% CI
100
NA
100
95,1-100
100
97,2-100
Lavaggio faringeo (n=30)
Influenza A
100% sensibilità (10/10); 95% CI = 69,2-100%
100% specificità (20/20); 95% CI = 83,2-100%
LIMITAZIONI
1. Il virus attivo e non attivo dell’influenza A e B sono rilevabili con il
2.
Flu A
Laboratorio
1
2
3
test Xpect Flu A&B.
A causa di una diffusione limitata del virus, di una raccolta,
manipolazione e trasporto dei campioni non adeguati, un eventuale
risultato negativo del test non esclude la presenza del virus
dell’influenza. Pertanto, per formulare una diagnosi corretta è
opportuno valutare, oltre ai risultati del test Xpect Flu A&B, il quadro
clinico del paziente.
Un test positivo non esclude la possibilità di coinfezione e quindi la
presenza di altri microrganismi patogeni.
Le caratteristiche relative alle prestazioni del test Xpect Flu A&B
sono state stabilite per l’uso nel trattamento antivirale di
monitoraggio o per i metodi di identificazione/conferma della coltura
cellulare.
Dopo aver consultato i dipartimenti di sanità pubblica statali o locali,
potrebbe essere necessario eseguire ulteriori analisi per
differenziare i sottotipi o i ceppi specifici dell’influenza A.
Influenza B
100% sensibilità (4/4); 95% CI = 39,8-100%
100% specificità (26/26); 95% CI = 86,8-100%
OVERALLTOTALE
Risultati Xpect
Flu A&B
A+ / BA- / B+
A- / B-
Culture ResultsRisultati della coltura
A+ / BA- / B+
A- / B10
0
0
0
4
0
0
0
16
Prestazioni del test per ogni singolo laboratorio:
RISULTATI ATTESI
Negli Sati Uniti l'influenza è più diffusa durante i mesi invernali. Durante i
periodi di maggior diffusione, è possibile che fino al 30% dei campioni
testati sia positivo alla coltura per la rilevazione dell’influenza. Il rapporto
tra i campioni positivi all’influenza A e all’influenza B varia di anno in anno
in maniera considerevole in un intervallo che varia tra il 50% e il 99%.
CARATTERISTICHE RELATIVE ALLE PRESTAZIONI
Accuratezza clinica:
Le prestazioni del test Flu A&B Xpect sono state valutate in tre laboratori
diversi situati nelle regioni a nord, a sud e a est degli Stati Uniti durante la
stagione influenzale 2002-2003. I centri dello studio clinico comprendevano
un ospedale pediatrico (popolazione pediatrica), una clinica universitaria
(principalmente popolazione adulta) e un laboratorio di riferimento
[popolazione adulta e pediatrica (60/40)]. Per tutti i campioni valutati la
sensibilità complesiva del test Xpect Flu A&B, se comparata alla coltura,
era pari al 92,2% (71/77) per l’influenza di tipo A e il 97,8% (45/46) per
l’influenza di tipo B. La specificità complessiva era pari al 100% sia per
l'influenza di tipo A (314/314) sia per l’influenza di tipo B (345/345). Per
l’influenza di tipo A, si sono verificati 6 casi in cui i campioni erano positivi
alla coltura e negativi a Xpect Flu A&B. Per l’influenza di tipo B, si è
verificato 1 caso in cui il campione era positivo alla coltura e negativo
Xpect Flu A&B. Quattro di cinque campioni discrepanti disponibili per
l'esame risultarono positivi a RT-PCR.
Flu A
Laboratorio
1
2
3
#
10/10
0/0
NA
Sensitivity
%
95% CI
100 69.2-100
NA
NA
NA
NA
#
18/18
2/2
NA
Specificità
%
95% CI
100
81,5-100
100
15,8-100
NA
NA
Flu B
Laboratorio
1
2
3
#
4/4
0/0
NA
Sensibilità
%
95% CI
100
39.8-100
NA
NA
NA
NA
#
24/24
2/2
NA
Specificità
%
95% CI
100
85.8-100
100
15.8-100
NA
NA
Tampone nasale (n=122)
Influenza A
88,9% sensibilità (24/27); 95% CI = 70,8-97,7%
100% specificità (95/95); 95% CI = 96,2-100%
Influenza B
83,3% sensibilità (5/6); 95% CI = 35,9-99,6%
100% specificità (116/116); 95% CI = 96,9-100%
OVERALLTOTALE
A+ / BRisultati
Xpect Flu
A- / B+
A&B
A- / B-
Culture Results Risultati della coltura
A+ / BA- / B+
A- / B24
0
0
0
5
0
3*
1*
89
*RT-PCR è stato eseguito su due di quattro campioni discrepanti che erano disponibili
(un caso di influenza A e uno di influenza B). Entrambi I campioni erano positivi a PCR.
Lavaggio nasale (n=239)
Influenza A
92,5% sensibilità (37/40); 95% CI = 79,6-98,4%
100% specificità (199/199); 95% CI = 98,2-100%
Prestazioni del test per ogni singolo laboratorio:
Influenza B
100% sensibilità (36/36); 95% CI = 90,3-100%
100% specificità (203/203); 95% CI = 98,2-100%
OVERALLTOTALE
Risultati Xpect Flu
A&B
A+ / BA- / B+
A- / B-
Risultati della coltura
A+ / BA- / B+
A- / B37
0
0
0
36
0
3*
0
163
*La valutazione mediante RT-PCR è stata eseguita su tre risultati discrepanti. Uno di tre
campioni era negativo a PCR, due erano positivi.
15
Flu A
Laboratorio
1
2
3
#
24/27
0/0
NA
Sensibilità
%
95% CI
88.9
70.8-97.7
NA
NA
NA
NA
#
91/91
4/4
NA
Specificità
%
95% CI
100
96.0-100
100
39.8-100
NA
NA
Flu B
Laboratorio
1
2
3
#
5/6
0/0
NA
Sensibilità
%
95% CI
83.3
35.9-99.6
NA
NA
NA
NA
#
112/112
4/4
NA
Specificità
%
95% CI
100
96.8-100
100
39.8-100
NA
NA
ITALIAN
Sensibilità Analitica:
La sensibilità analitica è stata valutata utilizzando 17 ceppi di influenza, 11
di influenza A e 6 di influenza B. Ciascun ceppo virale è stato quantificato
e titolato fino a ottenere un risultato finale positivo con il test Flu A&B
Xpect. La quantità di virus presente nella diluizione finale, espressa per
ciascun test, è stata utilizzata come unità di misura per la sensibilità
analitica.
Tipo
Limite di rilevazione
TCID50/ml
A/Anhui/1/2013
A/California/04/2009
A/New Caledonia/20/1999
A (H7N9)
A (H1N1)
A (H1N1)
1.26 x 10
3
4.41 x 10
3
1.63 x 10
A/Puerto Rico/8/34
A/Fort Monmouth/1/47
A/New Jersey/8/76
A/Hong Kong/8/68
A/Victoria/3/75
A/Port Chalmers/1/73
A/BhGoose/QH/1/05
A/Chicken/WD/98
B/Lee/40
B/Allen/45
B/Maryland/1/59
B/GL/1739/54
B/Taiwan/2/62
B/Hong Kong/5/72
A (H1N1)
A (H1N1)
A (H1N1)
A (H3N2)
A (H3N2)
A (H3N2)
A (H5N1)
A (H9N2)
B
B
B
B
B
B
Influenza StrainCeppo
dell’influenza
5
CEID50/ml
4
8.9 x 10
2
7.9 x 10
2
8.9 x 10
2.8 x 102
3
8.9 x 10
2
4.0 x 10
5
2.0 x 10
4
3.16 x 10
4
7.9 x 10
4 x 101
6 x 101
8.9 x 102
3 x 101
1.58 x 103
Sostanze interferenti:
Le seguenti sostanze sono state testate con Xpect Flu A&B e non è stata
osservata alcuna interferenza ai livelli indicati: sangue intero (2%), 3
lavaggi orali (25%), 3 gocce faringee (25%), 3 spray nasali (25%), 4acetamidofenolo (acetaminofen) (10 mg/ml), acido acetilsalicilico (20
mg/ml), clorfeniramina (5 mg/ml), destrometorpano (10 mg/ml),
difenidramina (5 mg/ml), etere guaiacol glicerico (guaifenesin) (20 mg/ml),
ossimetazolina (10 mg/ml), fenilefrina (25 mg/ml), fenilpropanolamina (20
mg/ml).
Riproducibilità:
Il test di riproducibilità è stato condotto in quattro laboratori, compreso un
laboratorio in-house, in quattro giorni diversi con sei campioni in cieco. I
campioni liquidi erano costituiti da antigeni dell’influenza A e antigeni
dell’influenza B che si attendeva fossero stati letti come debolmente
positivi o negativi con il test Xpect Flu A&B. 99% di 96 campioni testati
hanno prodotto i risultati attesti.
BIBLIOGRAFIA
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Shaw, M.W., N.H. Arden, and H.F. Maassab. 1992. Clin. Microbiol. Rev.
5:74-92.
Centers for Disease Control and Prevention. 2003. Prevention and Control
of Influenza: Recommendations of the Advisory Committee on
Immunization Practices. Morbid. Mortal. Weekly Rep. 52, No. RR-8.
Murray, P.R., E.J. Baron, J.H. Jorgensen, M.A. Pfaller, and R.H. Yolken.
2003. Manual of Clinical Microbiology. 8th ed. ASM, Washington, D.C.
Anderson, R.N. 2002. National Vital Statistics Reports. Vol. 50, No. 16.
National Center for Health Statistics, Hyattsville, MD.
Herrmann, B., C. Larsson, and B.W. Zweygberg. 2001. J. Clin. Microbiol.
39:134-138.
Mills, R.D., K.J. Cain, and G.L. Woods. 1989. J. Clin. Microbiol. 27:25052508.
Reina, J., E. Padilla, F. Alonso, E. Ruiz de Gopegui, M. Munar, and M.
Mari. 2002. J. Clin. Microbiol. 40:3515-3517.
TCID50 – 50% della dose infettante per coltura di tessuti
CEID50 – 50% della dose infettante per embrione di pulcino
7.
Sebbene sia stato dimostrato che questo test rileva il virus dell’influenza
A/California/04/2009 (H1N1) e A/Anhui/1/2013 (H7N9) virus coltivato da
un campione umano positivo, le caratteristiche delle prestazioni di questo
dispositivo con campioni umani infetti dal virus dell’influenza con questi
virus influenzali non sono state stabilite. Xpect Flu A&B è in grado di
distinguere tra i virus dell’influenza A e B, ma non distingue fra i sottotipi
dell’influenza.
CONFEZIONE
Reattività crociata:
Trentasei microrganismi sono stati valutati con il test Xpect Flu A&B. Non
è stata osservata alcuna reattività crociata per i batteri dell’influenza A o
dell’influenza B. I batteri e gli isolati di lievito sono stati testati a una
concentrazione di 108 unità che costituiscono una colonia per ml. Gli
isolati virali sono stati testati a concentrazioni di 104 a 105 TCID50 (dose
contagiosa della coltura del tessuto) per ml di concentrazione. I seguenti
microrganismi sono stati testati con il test Xpect Flu A&B.
Acinetobacter baumanni
Bordetella pertussis
Candida albicans
Enterococcus faecalis
Escherichia coli
Gardnerella vaginalis
Haemophilus influenzae
Klebsiella pneumoniae
Lactobacillus casei
Legionella pneumophila
Listeria monocytogenes
Moraxella catarrhalis
Neisseria gonorrhoeae
Neisseria meningitidis
Neisseria sicca
Neisseria subflava
Proteus vulgaris
Pseudomonas aeruginosa
Serratia marcescens
Staphylococcus aureus (Cowan)
Staphylococcus epidermidis
Streptococcus mutans
Streptococcus pneumoniae
Streptococcus pyogenes, gruppo A
Streptococcus, gruppo B
Streptococcus, gruppo C
Streptococcus, gruppo F
Adenovirus, tipo 5
Coronavirus
Coxsackievirus B5
Citomegalovirus
Parainfluenza (Sendai), tipo 1
Parainfluenza, tipe 2
Parainfluenza, tipo 3
Virus sinciziale respiratorio, A
Rinovirus, tipo 14
REF R24600, Xpect Flu A&B..............................................20 test/kit
Legenda Dei Simboli
REF
Codice numero
IVD
Dispositivo per uso diagnostico in vitro
LAB
Per uso del laboratorio
Consultare le istruzioni per l'uso (IFU)
Limitazioni per la temperatura (Temp. di conservazione)
LOT
Codice lotto (Numero Lotto)
Da utilizzare entro (data di scadenza)
EC REP
Rappresentante autorizzato per l'Europa
Xpect® è un marchio registrato di Thermo Fisher Scientific e delle sue sussidiarie.
ATCC® è un marchio registrato di American Type Culture Collection.
IFU 24600, data dell’ultima revisione 2013-07-09
12076 Santa Fe Drive, Lenexa, KS 66215, USA
Informazioni generali: (800) 255-6730 Sito web: www.remel.com E-Mail: [email protected]
Tel. locali/internazionali: (913) 888-0939
Fax internazionale: (913) 895-4128
Stampato negli U.S.A.
SPANISH
antirratón de cabra. Siempre aparecerá una línea visible en la región de
control para indicar que la prueba está funcionando correctamente. La
presencia de una línea de control y la ausencia de una línea de ensayo
visible debe interpretarse como un resultado negativo.
ALMACENAMIENTO
Flu A&B
Almacene el producto en la temperatura ambiente o refrigerado (2-25°C)
hasta la fecha de caducidad impresa en la caja. No congelar ni calentar a
temperaturas excesivas. En caso de refrigerar el producto, dejar
estabilizar a temperatura ambiente antes de utilizar.
USO PREVISTO
La prueba Xpect Flu A&B de Remel es una prueba inmunocromato-gráfica
rápida in vitro para la detección cualitativa directa del antígeno del virus de
la influenza A y la influenza B (nucleoproteína) en muestras de lavado
nasal, frotis nasal y frotis faríngeo de pacientes sintomáticos. Esta prueba
está indicada para facilitar el diagnóstico rápido de las infecciones
causadas por el virus de la influenza A y la influenza B. Un examen
negativo es presuntivo y se recomienda estos resultados sean
confirmados por cultivo del virus o una gripe aprobado por la FDA y un
ensayo molecular B.
PRECAUCIONES
•
•
•
•
•
RESUMEN Y EXPLICACIÓN
La influenza es una enfermedad respiratoria aguda altamente contagiosa
que se caracteriza por la aparición abrupta de fiebre, mialgia, cefalea,
malestar general, tos no productiva, dolor de garganta y rinitis. Si bien es
de carácter estacional, es posible que debido que al aumento en los
desplazamientos internacionales se esté convirtiendo en un fenómeno de
presencia constante durante todo el año. Los virus de la influenza tipo A y
tipo B son responsables de las epidemias de esta enfermedad que suelen
tener lugar casi todos los inviernos.1 En los Estados Unidos, estas
epidemias invernales pueden afectar al 10-20% de la población y son
responsables de 36.000 muertes y 114.000 hospitalizaciones al año en
promedio.2 Por lo general, la influenza tipo C sólo se asocia con la forma
leve o asintomática de la enfermedad.3
•
Para uso diagnóstico in vitro solamente.
Se deben leer y seguir atentamente las instrucciones.
No utilizar los componentes después de las fechas de caducidad
impresas en sus respectivos envases.
No reutilizar los componentes del kit ni los dispositivos de prueba.
Siga los procedimientos de seguridad del laboratorio al trabajar con
muestras de pacientes. Si existe la sospecha de que se haya podido
producir un contagio con un nuevo virus de la gripe A, según los
criterios de detección epidemiológicos y clínicos vigentes
recomendados por las autoridades sanitarias, se deberán obtener
muestras de nuevas cepas virulentas del virus de la gripe con las
debidas precauciones de control de infecciones y enviarlas a los
servicios sanitarios regionales o locales para su análisis. No es
conveniente tratar de obtener cultivos víricos en estos casos, a
menos que haya disponible para la recepción y el cultivo de las
muestras un laboratorio con seguridad biológica de nivel 3 o superior.
Deben tomarse las precauciones habituales contra los riesgos
biológicos esterilizando correctamente las muestras, envases y
dispositivos de prueba después de su uso.
Normalmente, la influenza se resuelve en una o dos semanas pero algunas
personas sufren complicaciones que pueden poner en peligro sus vidas. La
influenza puede exacerbar otros trastornos médicos subyacentes (por
ejemplo, enfermedades cardiopulmonares), llevar a la neumonía bacteriana
secundaria o neumonía viral por influenza primaria, o bien acompañar a otra
infección causada por otros patógenos virales o bacterianos. La neumonía y
la influenza ocupan juntas el séptimo lugar entre las causas más comunes
de muerte en los Estados Unidos y son la quinta causa principal de muerte
entre los estadounidenses de más de 65 años.4
OBTENCIÓN, ALMACENAMIENTO Y TRANSPORTE DE LA MUESTRA
El tratamiento adecuado de los pacientes con enfermedades de
características similares a la influenza depende de un diagnóstico preciso
y oportuno que permita reducir el uso inadecuado de antibióticos y recurrir
a una terapia antiviral. El diagnóstico de la influenza basado únicamente
en los síntomas resulta difícil ya que los síntomas iniciales pueden ser
similares a los causados por otros agentes infecciosos. Existen varios
métodos de laboratorio para la detección del virus de la influenza, como el
cultivo celular convencional, cultivo en shell vial, tinción inmunofluorescente, análisis serológicos, ensayos de detección del ácido
nucleico amplificado e inmunoensayos rápidos.5-7 Si se diagnostica la
enfermedad dentro de las 48 horas de la aparición de los síntomas,
existen varios medicamentos antivirales que pueden administrarse para
reducir su duración y atenuar la gravedad de los síntomas cuando no hay
complicaciones. Estos medicamentos también pueden utilizarse como
medio profiláctico para ayudar a prevenir la enfermedad por el contacto
con los pacientes. La amantadina y la rimantadina sólo pueden utilizarse
para prevenir o tratar la influenza tipo A. Los inhibidores de la neuraminidasa (zanamivir y osteltamivir) son eficaces para la prevención y tratamiento
de ambos tipos de influenza. Debido a que las drogas difieren en su vía de
administración, posología, efectos colaterales, indicaciones de uso (edad
del paciente) y coste, es aconsejable distinguir entre las infecciones por
influenza tipo A y tipo B para tomar la decisión terapéutica más adecuada.
•
•
•
•
•
•
Entre las muestras que se pueden analizar por medio de la prueba
Xpect Flu A&B están los lavados y frotis nasales y los frotis faríngeos.
Hay que obtener las muestras en una fase temprana de la
enfermedad y someterlas a análisis lo antes posible. Si las muestras
no se obtiene, almacenan y transportan en las debidas condiciones,
es probable que generen falsos negativos al analizarlas. Es muy
recomendable que el personal encargado de esta tarea haya recibido
formación en la obtención de muestras, dada la importancia de la
calidad de las mismas.
Los frotis se deben recoger con bastoncillos floqueados o de punta
sintética (p. ej., poliéster) y mango de plástico o aluminio. No es
aconsejable utilizar bastoncillos con punta de algodón y mango de
madera. No se pueden emplear muestras recogidas con bastoncillos
de alginato cálcico.
Las muestras recién obtenidas se deben analizar de inmediato y sin
utilizar ningún medio de transporte.
Otra opción consiste en colocar las muestras en un medio de
transporte apropiado, a una temperatura de entre 2 y 8°C, y
analizarlas en las 72 horas siguientes a su obtención.
Las muestras congeladas y conservadas en un medio de transporte
líquido para virus a una temperatura de -20°C o inferior dentro de un
congelador sin dispositivo antiescarcha se pueden analizar en los
seis meses siguientes a su obtención. Evite congelar y descongelar
varias veces.
Medios de transporte:
Se han evaluado los siguientes medios de transporte y se ha determinado
su compatibilidad con la prueba Xpect Flu A&B.
Medio de Amies
Medio de transporte viral de Bartels
BD™ sistema de transporte de virus universal
Medio de Cary Blair
Copan medio de transporte universal
Medio esencial mínimo de Earle (EMEM)
EMEM con albúmina sérica bovina 1%
EMEM con hidrolisato de lactalbúmina 1%
Solución salina equilibrada de Hank
Medio de Stuart líquido
M4®
M4RT®
M5®
M6™
Solución salina tampón fosfato (PBS)
PBS con albúmina sérica bovina 0,5%
PBS con gelatina 0,5%
Solución salina (normal)
Sucrosa fosfato
Caldo de soja tríptico con albúmina sérica bovina 0,5%
Caldo de soja tríptico con gelatina 0,5%
Caldo de infusión de ternera
Caldo de infusión de ternera con albúmina sérica bovina 0,5%
La prueba Xpect Flu A&B permite obtener información valiosa y práctica
que facilita el diagnóstico de la influenza en pacientes sintomáticos. Los
médicos pueden identificar rápidamente qué pacientes se beneficiarán
con el tratamiento y establecer el régimen de tratamiento adecuado, que
es esencial para controlar y prevenir de forma eficaz la influenza.
PRINCIPIO DE LA PRUEBA
La prueba Xpect Flu A&B es un inmunoensayo cromatográfico para la
detección cualitativa de los antígenos del virus de la influenza A y la
influenza B. El dispositivo de prueba incluye tiras de membrana
separadas para la influenza A y para la influenza B. Para realizar la
prueba, la muestra de paciente se diluye y se añade a los pocillos del
dispositivo. La mezcla se desplaza por las membranas por la acción
capilar. Los antígenos del virus de la influenza A o B presentes en la
muestra del paciente atrapan los anticuerpos contra la influenza A o B
conjugados. Cuando se atrapa un complejo de partículas de color
recubiertas por una capa del tipo anticuerpo-antígeno-anticuerpo en la
región de prueba (T), se forma una línea visible. Las partículas de color
recubiertas con anticuerpos no atrapadas en la línea de prueba son
capturadas después en la región de control (C), que contiene anticuerpos
17
SPANISH
REACTIVOS Y MATERIALES SUMINISTRADOS
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Prueba positiva (presencia de antígeno):
Si el resultado de la prueba es positivo, aparecerán dos bandas de color
azules. Una en la región (T) y otra en la región (C). Un completo, azul,
venda claramente visible de la prueba se debe interpretar como positiva.
Dispositivos de prueba (20): cada bolsa de aluminio contiene un
dispositivo de prueba para un solo uso con dos tiras de membrana.
Las tiras contienen anticuerpos contra la influenza A o B.
Diluyente de muestras (20 ml): un frasco con cuentagotas que
contiene una solución salina tampón con detergente, un agente
mucolítico y conservante
Tubos de dilución (20): tubos de plástico flexibles para la
preparación de las muestras
Pipetas de transferencia desechables (20): pipetas graduadas
con marcas cada 0,1 ml aproximadamente
Torundas de control Influenza A+/B- (1): una torunda seca que
contiene antígeno de la influenza A inactivado
Torundas de control Influenza A-/B+ (1): una torunda seca que
contiene antígeno de la influenza B inactivado
Instrucciones de uso (IFU)
MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS
1.
2.
Flu A
Positiva
Minutero
Recipientes para la recogida de muestras y medios de transporte
Prueba negativa (no se detectó antígeno):
Si el resultado de la prueba es negativo, sólo aparecerá una banda azul en la
región de control (C).
PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA
1.
Retire el dispositivo de prueba de la bolsa de aluminio cuando esté
listo para realizar la prueba y colóquelo sobre una superficie plana.
(Deje que los componentes del kit se estabilicen a la temperatura
ambiente si los ha refrigerado.)
2.
Coloque al dispositivo una etiqueta con la identificación del paciente o
una identificación de control.
3.
Preparación de la muestra:
a.
Para las torundas con la muestra sin la dilusión* en medios
del transporte (incluyendo las torundas de control de calidad
suministradas en el kit):
i.
Coloque 25 gotas (aproximadamente 0,6 ml) de
diluyente de muestras en un tubo de dilución.
ii.
Coloque la torunda con la muestra en el tubo.
iii.
Mezcle bien o coloque en un mezclador vórtex
para liberar el material antigénico atrapado en la
torunda.
iv.
Rote la rotunda con fuerza contra las paredes
del tubo y apriete los lados del tubo (como
muestra la figura) mientras la retira.
Flu A e Flu B
Negativa
Prueba no válida:
Una prueba inválida ocurre cuando la banda de la prueba es parcial o
incompleta o la banda del control es ausente o incomplete. Los
resultados no válidos debido a muestras excesivamente mucoides
pueden repetirse utilizando el doble del volumen normal de diluyente
durante la dilución.
*Torunda no sumergida en un volumen suficiente de medio de
transporte para permitir el procesamiento de 0,1 ml.
b.
4.
5.
Flu B
Positiva
Para lavado nasales y torundas con la muestra transportados en
>0.3 ml de medios líquidos:
i.
Coloque 5 gotas (aproximadamente 0,1 ml) de diluyente de
muestras en el tubo de dilución suministrado.
ii.
Mezcle bien la muestra y utilizando la pipeta de transferencia
suministrada en el kit transfiera 0,1 ml (la primera marca de
graduación en relieve en la punta de la pipeta) de muestra
líquida (lavado nasal o muestras en medio de transporte) al
tubo de dilución suministrado.
Con una pipeta de transferencia, dispense 0,1 ml (primera marca
graduada desde la punta de la pipeta) de muestra en el pocillo Flu A
y 0,1 ml en el pocillo Flu B del dispositivo de prueba Xpect
debidamente etiquetado.
Imposible de interpretar
Lea y registre los resultados de la prueba visualmente en de 15
minutos como se indica en la sección Interpretación. (Los resultados
positivos fuertes pueden observarse a veces antes de los 15
minutos.)
Información de resultados:
Se recomienda informar los resultados de la siguiente manera:
Positivo - Positivo para el antígeno de la gripe A y/o de la gripe B. Este
resultado no excluye la existencia de coinfecciones con otros
patógenos ni identifica ningún subtipo concreto de virus de la
gripe A.
INTERPRETACIÓN
El dispositivo de prueba tiene dos ventanas de lectura separadas. La de
la izquierda es para la influenza A y la de la derecha es para la influenza
B, como muestra la figura.
Negativo - Negativo para el antígeno de la gripe A y/o de la gripe B. Los
resultados negativos no excluyen la posibilidad de que exista
infección por el virus de la gripe y no deben servir como único
fundamento para el tratamiento u otras decisiones
relacionadas con el mismo, ya que la cantidad de antígeno
presente en la muestra puede ser inferior al límite de detección
de la prueba. Un examen negativo es presuntivo y se
recomienda estos resultados sean confirmados por cultivo del
virus o un aprobado por la FDA de influenza A y B ensayo
molecular.
18
SPANISH
Funcionamiento de la prueba en cada centro:
CONTROL DE CALIDAD
Interno: la prueba incluye un control de procedimiento. Si aparece una
banda de color en la región de control (C), significa que el control interno
es positivo, es decir, que la prueba y los reactivos han funcionado
correctamente. Si no aparece ninguna banda, significa que el control
interno es negativo. Si la prueba se ha realizado correctamente y los
reactivos funcionan bien, el fondo se despejará y proporcionará un
resultado discernible.
Externo: se recomienda realizar controles positivos y negativos con cada
kit de prueba perteneciente a otro número de lote. Cada laboratorio debe
cumplir con los requerimientos locales y del estado.
El kit incluye torundas de control de calidad Influenza A+/B- e Influenza A/B+. Procese las torundas según el Paso 3 (a) del Procedimiento para
muestras de frotis sin medio de transporte. Si los controles no
proporcionan el resultado esperado, no informe los resultados obtenidos
en la prueba.
3.
4.
5.
#
0/0
3/5
34/35
Sensibilidad
%
95% CI
NA
NA
60,0
14,7-94,7
97,1
85,1-99,9
Especificidad
#
%
95% CI
1/1
100
NA
69/69
100
94,8-100
129/129
100
97,2-100
Flu B
Centro
1
2
3
#
0/0
0/0
36/36
Sensibilidad
%
95% CI
NA
NA
NA
NA
100
90,3-100
Especificidad
#
%
95% CI
1/1
100
NA
74/74
100
95,1-100
128/128
100
97,2-100
Frotis faríngeo (n=30)
Influenza A
Sensibilidad 100% (10/10); 95% CI = 69,2-100%
Especificidad 100% (20/20); 95% CI = 83,2-100%
LIMITACIONES
1. La prueba Xpect Flu A&B permite detectar virus de la influenza A y
2.
Flu A
Centro
1
2
3
de la influenza B viables y no viables.
Debido a los bajos niveles de excreción viral, a la obtención de
muestras inadecuada o a la manipulación o transporte inadecuados,
la obtención de un resultado negativo no descarta la presencia del
virus de la influenza. Por esta razón, los resultados obtenidos con la
prueba Xpect Flu A&B deben utilizarse junto con los resultados de
otras pruebas clínicas para poder establecer un diagnóstico correcto.
Un resultado positivo no descarta la posibilidad de coinfección con
otro patógeno.
Aún no se han establecido las características de funcionamiento de
la prueba Xpect Flu A&B para su uso en la monitorización del
tratamiento antiviral o para los métodos de confirmación/identificación
mediante cultivos celulares.
Para diferenciar las cepas o los subtipos concretos del virus de la
gripe A, es necesario realizar más pruebas, con el asesoramiento de
los servicios sanitarios regionales o locales.
Influenza B
Sensibilidad 100% (4/4); 95% CI = 39,8-100%
Especificidad 100% (26/26); 95% CI = 86,8-100%
GENERAL
A+ / BA- / B+
A- / B-
Resultados de
Xpect Flu A&B
Resultados de cultivo
A+ / BA- / B+
A- / B10
0
0
0
4
0
0
0
16
Funcionamiento de la prueba en cada centro:
VALORES ESPERADOS
En los Estados Unidos, la influenza es más común durante los meses de
invierno. Durante los períodos pico, hasta el 30% de las muestras
analizadas pueden dar un resultado positivo. La proporción de muestras
positivas de influenza A comparada con las de influenza B puede variar
considerablemente de un año a otro y oscila entre el 50% y el 99%,
aproximadamente.
Flu A
Centro
1
2
3
#
10/10
0/0
NA
Flu B
Centro
1
2
3
#
4/4
0/0
NA
Sensibilidad
%
95% CI
100
69,2-100
NA
NA
NA
NA
Especificidad
#
%
95% CI
18/18
100 81,5-100
2/2
100 15,8-100
NA
NA
NA
Sensibilidad
%
95% CI
100
39,8-100
NA
NA
NA
NA
Especificidad
#
%
95% CI
24/24
100 85,8-100
2/2
100 15,8-100
NA
NA
NA
CARACTERÍSTICAS DE FUNCIONAMIENTO
Exactitud clínica:
El rendimiento de la prueba Xpect Flu A&B se evaluó en tres laboratorios
situados en las regiones norte, sur y este de Estados Unidos durante la
temporada de gripe de 2002-2003. Los centros de prueba clínica
incluyeron un hospital de niños (población pediátrica), un hospital
universitario (población adulta principalmente) y un laboratorio de
referencia (población adulta y pediátrica (60/40)). Para todas las muestras
evaluadas, la sensibilidad general de la prueba Xpect Flu A&B comparada
con la del cultivo fue de 92,2% (71/77) para la influenza A y de 97,8%
(45/46) para la influenza B. La especificidad general fue de 100% tanto
para la influenza A (314/314) como para la influenza B (345/345). Para la
influenza A, hubo 6 muestras positivas según el cultivo y negativas según
la prueba Xpect Flu A&B. Para la influenza A, hubo 1 muestra positiva
según el cultivo y negativa según la prueba Xpect Flu A&B. Cuatro de
cinco muestras discrepantes disponibles para el análisis fueron positivas
según el método RT-PCR.
Frotis nasal (n=122)
Influenza A
Sensibilidad 88,9% (24/27); 95% CI = 70,8-97,7%
Especificidad 100% (95/95); 95% CI = 96,2-100%
Influenza B
Sensibilidad 83,3% (5/6); 95% CI = 35,9-99,6%
Especificidad 100% (116/116); 95% CI = 96,9-100%
GENERAL
Resultados de
Xpect Flu A&B
A+ / BA- / B+
A- / B-
Resultados de cultivo
A+ / BA- / B+
A- / B24
0
0
0
5
0
3*
1*
89
*El método RT-PCR se aplicó a dos de las cuatro muestras discrepantes disponibles (una
influenza A y una influenza B). Ambas muestras dieron positivas según el método PCR.
Lavado nasal (n=239)
Influenza A
Sensibilidad 92,5% (37/40); 95% CI = 79,6-98,4%
Especificidad 100% (199/199); 95% CI = 98,2-100%
Funcionamiento de la prueba en cada centro:
Influenza B
Sensibilidad 100% (36/36); 95% CI = 90,3-100%
Especificidad 100% (203/203); 95% CI = 98,2-100%
GENERAL
Resultados de
Xpect Flu A&B
A+ / BA- / B+
A- / B-
Resultados de cultivo
A+ / BA- / B+
A- / B37
0
0
0
36
0
3*
0
163
*El método RT-PCR se aplicó a los tres resultados discrepantes. Una de las tres muestras
fue negativa según el método PCR, dos dieron positivas.
19
Flu A
Centro
1
2
3
#
24/27
0/0
NA
Sensibilidad
%
95% CI
88,9
70,8-97,7
NA
NA
NA
NA
#
91/91
4/4
NA
Especificidad
%
95% CI
100
96,0-100
100
39,8-100
NA
NA
Flu B
Centro
1
2
3
#
5/6
0/0
NA
Sensibilidad
%
95% CI
83,3
35,9-99,6
NA
NA
NA
NA
#
112/112
4/4
NA
Especificidad
%
95% CI
100
96,8-100
100
39,8-100
NA
NA
SPANISH
Sensibilidad Analítica:
La sensibilidad analítica se evaluó mediante 17 cepas del virus: 11 de
gripe A y 6 de gripe B. Cada una de las cepas fue sometida a un análisis
cuantitativo y volumétrico hasta alcanzar un punto final positivo para la
prueba Xpect Flu A&B. Se calculó la cantidad de virus en la dilución de
punto final como una medida de la sensibilidad analítica.
Tipo
Límite de Detección
TCID50/ml
A/Anhui/1/2013
A/California/04/2009
A/New Caledonia/20/1999
A (H7N9)
A (H1N1)
A (H1N1)
1.26 x 10
4.41 x 103
3
1.63 x 10
A/Puerto Rico/8/34
A/Fort Monmouth/1/47
A/New Jersey/8/76
A/Hong Kong/8/68
A/Victoria/3/75
A/Port Chalmers/1/73
A/BhGoose/QH/1/05
A/Chicken/WD/98
B/Lee/40
B/Allen/45
B/Maryland/1/59
B/GL/1739/54
B/Taiwan/2/62
B/Hong Kong/5/72
A (H1N1)
A (H1N1)
A (H1N1)
A (H3N2)
A (H3N2)
A (H3N2)
A (H5N1)
A (H9N2)
B
B
B
B
B
B
Cepa de influenza
Sustancias interfirientes:
Se analizaron las siguientes sustancias con la prueba Xpect Flu A&B y no
se observó interferencia en el ensayo para ninguna de ellas a los niveles
indicados: sangre entera (2%), 3 enjuagues bucales (25%), 3 gotas para
la garganta (25%), 3 aerosoles nasales (25%),4-acetamidofenol
(acetaminofeno) (10 mg/ml), ácido acetilsalicílico (20 mg/ml),
clorfeniramina (5 mg/ml), dextrometorfano (10 mg/ml), difenhidramina (5
mg/ml), éter gliceril guayacol (guaifenesina) (20 mg/ml), oximetazolina
(10 mg/ml), fenilefrina (25 mg/ml), fenilpropanolamina (20 mg/ml).
5
CEID50/ml
8.9 x 104
2
7.9 x 10
2
8.9 x 10
2
2.8 x 10
3
8.9 x 10
4.0 x 102
5
2.0 x 10
3.16 x 104
4
7.9 x 10
1
4 x 10
1
6 x 10
8.9 x 102
3 x 101
1.58 x 103
Reproducibilidad:
Se realizaron pruebas de reproducibilidad con seis muestras ciegas en
cuatro centros, incluyendo uno propio, en cuatro días distintos. Las
muestras líquidas utilizadas consistieron en antígenos de la influenza A y
de la influenza B diluidos para obtener resultados positivos o negativos
débiles con la prueba Xpect Flu A&B. El 99% de las 96 muestras
probadas dio el resultado esperado.
BIBLIOGRAFÍA
1.
2.
3.
4.
5.
6.
TCID50 – dosis infecciosa en cultivo tisular: 50%
CEID50 – dosis infecciosa en embrión de pollo: 50%
Aunque esta prueba se ha demostrado que la detección de la gripe
A/California/04/2009 (H1N1) y A/Anhui/1/2013 (H7N9) virus cultivado a
partir de muestras humanas positivas, las características de rendimiento
de este dispositivo con especímenes humanos infectados con estos virus
de la influenza no se han establecido. Xpect Flu A&B puede distinguir
entre los virus de la gripe A y B, pero no diferencia los subtipos de gripe.
Reactividad cruzada:
Se evaluaron 36 microorganismos con la prueba Xpect Flu A&B. No se
observó reactividad cruzada para la influenza A ni para la influenza B. Se
probaron las bacterias y aislados de levadura a 108 unidades de
formación de colonias por ml de concentración. Los aislados virales se
probaron a concentraciones de TCID50 (dosis infecciosa de cultivo de
tejido) de 104 a 105 por ml de concentración. Se analizaron los siguientes
organismos en la prueba Xpect Flu A&B:
Acinetobacter baumanni
Bordetella pertussis
Candida albicans
Enterococcus faecalis
Escherichia coli
Gardnerella vaginalis
Haemophilus influenzae
Klebsiella pneumoniae
Lactobacillus casei
Legionella pneumophila
Listeria monocytogenes
Moraxella catarrhalis
Neisseria gonorrhoeae
Neisseria meningitidis
Neisseria sicca
Neisseria subflava
Proteus vulgaris
Pseudomonas aeruginosa
Serratia marcescens
Staphylococcus aureus (Cowan)
Staphylococcus epidermidis
Streptococcus mutans
Streptococcus pneumoniae
Streptococcus pyogenes Grupo A
Streptococcus, Grupo B
Streptococcus, Grupo C
Streptococcus, Grupo F
Adenovirus, Tipo 5
Coronavirus
Coxsackievirus B5
Citomegalovirus
Parainfluenza (Sendai), Tipo 1
Parainfluenza, Tipo 2
Parainfluenza, Tipo 3
Virus sincitial respiratorio, A
Rinovirus, Tipo 14
7.
Shaw, M.W., N.H. Arden, and H.F. Maassab. 1992. Clin. Microbiol. Rev.
5:74-92.
Centers for Disease Control and Prevention. 2003. Prevention and Control
of Influenza: Recommendations of the Advisory Committee on
Immunization Practices. Morbid. Mortal. Weekly Rep. 52, No. RR-8.
Murray, P.R., E.J. Baron, J.H. Jorgensen, M.A. Pfaller, and R.H. Yolken.
2003. Manual of Clinical Microbiology. 8th ed. ASM, Washington, D.C.
Anderson, R.N. 2002. National Vital Statistics Reports. Vol. 50, No. 16.
National Center for Health Statistics, Hyattsville, MD.
Herrmann, B., C. Larsson, and B.W. Zweygberg. 2001. J. Clin. Microbiol.
39:134-138.
Mills, R.D., K.J. Cain, and G.L. Woods. 1989. J. Clin. Microbiol. 27:25052508.
Reina, J., E. Padilla, F. Alonso, E. Ruiz de Gopegui, M. Munar, and M.
Mari. 2002. J. Clin. Microbiol. 40:3515-3517.
PRESENTACIÓN
REF R24600, Xpect Flu A&B. ............................................. 20 Pruebas/Kit
Símbolos
REF
Número de catálogo
IVD
Dispositivo médico para diagnóstico in vitro
LAB
Para el uso del laboratorio
Consulte las instrucciones de uso
Límite de temperatura (Temp. de almacenamiento)
LOT
Código de lote (Número de lote)
Fecha de caducidad
EC REP
Representante autorizado en Europa
Xpect® es una marca registrada de Thermo Fisher Scientific y sus filiales.
ATCC® es una marca registrada de American Type Culture Collection.
IFU 24600, Revisado el 2013-07-09
12076 Santa Fe Drive, Lenexa, KS 66215, EE.UU.
Información general: (800) 255-6730 Dirección en Internet: www.remel.com Correo electrónico: [email protected]
Teléfono local/Internacional: (913) 888-0939 Fax internacional: (913) 895-4128
Impreso en los EE.UU.