Droghe d’Abuso urinarie in LC-MS – Cod. LC74010
Metodo di conferma in LC-MS
INTRODUZIONE
La determinazione delle droghe d’abuso nei liquidi biologici (soprattutto in urina) viene generalmente
effettuata in prima istanza usando tecniche immunometriche che si avvalgono della reazione
antigene-Anticorpo e successiva marcatura con vari reagenti. Queste metodologie sono considerate
di screening. Poiché tali tecniche non possono escludere falsi positivi, le positività allo screening
devono essere confermate con tecnica alternativa, generalmente con tecnica cromatografica sia
Gassosa (GC) che Liquida (LC) entrambe accoppiate con detector di Massa (MS).
Il presente metodo consente di determinare la Morfina, la Normorfina, la Norcodeina, la
Diidrocodeina, la Codeina, l’ Etilmorfina , la 6-Monoacetilmorfina, la Diacetilmorfina, l’Ossicodone, il
3,4-MDA, il 3,4-MDE, il 3,4-MDMA, la Chetamina, la Benzoilecgonina, la Cocaina, il Metadone,
l’EDDP, l’Amfetamina, la Metamfetamina, la Norbuprenorfina, la Buprenorfina, la Cocaetilene, l’LSD,
l’Efedrina, la Pseudoefedrina, la Norpseudoefedrina, l’MBDB ed il delta-9-THC-COOH con lettura in
LC-MS.
EUREKA srl – LAB DIVISION
VAT N° 01547310423
E-mail:[email protected]
www.eurekaone.com
Release N° 004
Head Quarter:
Via Enrico Fermi 25
60033 Chiaravalle (AN) ITALY
Tel. +39 071 7450790
Fax + 39 071 7496579
Droghe d’Abuso in LC/MS
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Dicembre 2010
CARATTERISTICHE DEL KIT
Principio del metodo :
Il presente metodo consente di determinare un ampio pacchetto di Droghe d’abuso urinarie dopo una semplice
idrolisi e lettura in LC-MS.
Recupero del Metodo :
100 %
Sensibilità del Metodo :
< 10,0 ng/ml
Range dinamico del Metodo :
10 – 10.000 ng/ml
Valore di cut-off:
Morfina
100 ng/ml Normorfina
Diidrocodeina
100 ng/ml Chetamina
Codeina
100 ng/ml Benzoilecgonina
Etilmorfina
100 ng/ml Cocaina
6-Monoacetilmorfina 100 ng/ml Metadone
Norcodeina
100 ng/ml Diacetilmorfina
Ossicodone
100 ng/ml Amfetamina
3,4-MDA
250 ng/ml Metamfetamina
3,4-MDMA
250 ng/ml Norbuprenorfina
3,4-MDE
250 ng/ml Buprenorfina
delta-9-THC-COOH 15 ng/ml EDDP
Cocaetilene
100 ng/ml Efedrina
LSD
n.d.
MBDB
100 ng/ml
100 ng/ml
100 ng/ml
150 ng/ml
100 ng/ml
100 ng/ml
250 ng/ml
250 ng/ml
5 ng/ml
5 ng/ml
100 ng/ml
250 ng/ml
250 ng/ml
Rif. Procedure applicative del procedimento n.99/cu 30 ottobre 2007
Tutti i reagenti sono pronti all’uso e stabili 3
anni a 2 – 8 °C.
Contenuto della Confezione :
Reagente A – Soluzione per idrolisi delta-9-THC-COOH, 1 x 2 ml
Da ricostituire con 9,0 ml di Reagente C.
Quando ricostituito, l’enzima è stabile 1 anno
a 2 – 8 °C.
Reagente B – Enzima di idrolisi Droghe, 4 x 1 ml
Reagente C – Soluzione Tampone per Idrolisi, 1 x 20 ml
Reagente D – Soluzione Diluente + Std interni, 1 x 150 ml
Reagente M1 – Fase Mobile M1, 1 x 250 ml
Reagente M2 – Fase Mobile M2, 1 x 250 ml
Dotazione strumentale minima richiesta :
Strumento LC-MS triplo quadrupolo con valvola Divert –
Analisi in gradiente binario – Modalità di lavoro MRM
Computer gestionale
Dotazione opzionale :
Autocampionatore
Modalità di prelievo urinario :
Prelevare 10 ml urina
Stabile per circa 3 mesi a –20 °C
Centrifugare le urine prima di processarle.
2
PROCEDURA ANALITICA PER LE DROGHE (ESCLUSO delta-9-THC-COOH, OPPIACEI e
NORBUPRENORFINA):
FASE 1 :
In provette di plastica da 10 ml idonee dispensare in sequenza.
Calibratore
Calibratore liofilo urinario o Standard
chimico MBDB
Campione
Controlli
Reagente D – Soluzione Diluente
Campione
Controlli
100 µl
100 µl
900 µl
900 µl
100 µl
900 µl
Al vortex per 10 secondi
INIEZIONE :
•
Iniettare 20 µl della soluzione nel sistema LC
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PROCEDURA ANALITICA SPECIFICA PER OPPIACEI e NORBUPRENORFINA:
FASE 1 : Ricostituzione dell’enzima
Aggiungere al Reagente B – Enzima di idrolisi (contenente 1 ml) 9 ml di Reagente C – Soluzione Tampone
per idrolisi.
Agitare per inversione
FASE 2 : Idrolisi del campione
In provette di plastica da 10 ml idonee dispensare in sequenza.
Calibratore
Campione
Controlli
1000 µl
Calibratore liofilo urinario
Campione
Controlli
Reagente B – Enzima ricostituito
1000 µl
100 µl
100 µl
1000 µl
100 µl
Al vortex per 10 secondi
FASE 3 : Porre in stufa a 150 °C per 3 ore.
Raffreddare a T° ambiente
FASE 4 : Prelevare 100µl di idrolizzato ed aggiungere 500 µl di Reagente D – Soluzione Diluente
Al vortex per 10 secondi
INIEZIONE :
•
Iniettare 20 µl della soluzione nel sistema LC
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PROCEDURA ANALITICA SPECIFICA PER delta-9-THC-COOH:
FASE 1 : Idrolisi del campione
In provette di plastica da 10 ml idonee dispensare in sequenza.
Calibratore
Campione
Controlli
500 µl
Calibratore liofilo urinario
Campione
Controlli
Reagente A – Soluzione per idrolisi
delta-9-THC-COOH
500 µl
100 µl
100 µl
500 µl
100 µl
Al vortex per 10 secondi
FASE 2 : Porre in stufa a 60 °C per 20 minuti.
Raffreddare a T° ambiente
Portare a pH compreso fra 5 e 7 con circa 60-80 µl di Acido Acetico glaciale
FASE 3 : Prelevare 100 µl di idrolizzato ed aggiungere 500 µl di Reagente D – Soluzione Diluente
Al vortex per 10 secondi
INIEZIONE :
•
Iniettare 20 µl della soluzione nel sistema LC
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Dicembre 2010
Droghe d’Abuso urinarie - Avvertenze
CONDIZIONAMENTO DELLA COLONNA
Installare la colonna analitica nuova PURSUIT XRs C18 30 x 2 mm. Disconnettere il detector e far
passare 30 ml di una soluzione di H2O : Metanolo ( 20 : 80 v/v ) al flusso di 200 ul / minuto. Non
riciclare i liquidi di lavaggio. Condizionare la colonna con la fase mobile al flusso di 1,0 ml /
minuto e scaricare i primi 10 ml.
NON è possibile effettuare analisi a ricircolo di fase.
Se la T Amb del Laboratorio è > 25°C si consiglia di conservate a 2-8°C la Fase Mobile fra una
seduta analitica e l’altra.
PULIZIA DELLA COLONNA
Disconnettere il detector. Flussare una soluzione di H2O : Metanolo ( 20 : 80 v/v ) per 30 minuti
scaricandola.
LAVAGGIO SIRINGA AUTOCAMPIONATORE
Lavare la siringa, prima di ogni seduta analitica, con Metanolo.
PARAMETRI COMPUTER GESTIONALE
SECONDO LE SPECIFICHE DEL SOFTWARE GESTIONALE
GRADIENTE
Tempo (min)
% M1 (POMPA A)
% M2 (POMPA B)
Flusso (µl/min)
0
95
5
200
0.50
95
5
200
0.51
95
5
200
1.50
5
95
200
1.51
5
95
200
3.50
5
95
200
3.51
95
5
200
4.00
95
5
200
6
ANALITA
PARENT ION
Normorfina
272.0
Morfina
286.3
Norcodeina
286.0
Codeina
300.0
Diidrocodeina
302.0
Ossicodone
316.3
MDA
180.0
MDMA
194.0
MDE
208.0
Chetamina
238.0
BEG
290.0
Cocaina
304.0
6-MAM
328.0
Metadone
310.0
Diacetilmorfina
370.0
EDDP
278.0
Amfetamina
136.0
Metamfetamina
150.0
Norbuprenorfina
414.0
Etilmorfina
314.0
Delta-9-THC-COOH
345.0
Cocaetilene
318.1
LSD
324.1
Efedrina
166.1
Pseudoefedrina
166.2
Norpseudoefedrina
166.1
MBDB
152.1
Buprenorfina
468.1
Delta-8-THC
315.2
Nalorfina
312.4
Propilbenzoilecgonina
332.2
3,4-MDPA
222.4
7
ACCESSORI E CONSUMABILI
CODICE
DESCRIZIONE
CC43016
Calibratore urinario per Amfetamine
2 x 5 x 5 ml
CC46016
Calibratore urinario per Benzoilecgonina e Cocaetilene
2 x 5 x 5 ml
CC48016
Calibratore urinario per Metadone
2 x 5 x 5 ml
CC43017
Controllo multiparametrico per Droghe d’abuso – Livello 1
6 x 5 ml
CC43018
Controllo multiparametrico per Droghe d’abuso – Livello 2
6 x 5 ml
CC43019
Controllo multiparametrico per Droghe d’abuso – Livelli 1 e 2
2 x 6 x 5 ml
CC44016
Calibratore urinario per Buprenorfina e Norbuprenorfina
Controllo urinario per Buprenorfina e Norbuprenorfina –
Livello 1
Controllo urinario per Buprenorfina e Norbuprenorfina –
Livello 2
Controllo urinario per Buprenorfina e Norbuprenorfina – Livelli
1e2
Calibratore urinario per Oppiacei
2 x 5 x 6 ml
CC44017
CC44018
CC44019
CC45016
CC45017
CONFEZIONE
6 x 6 ml
6 x 6 ml
2 x 6 x 6 ml
2 x 5 x 5 ml
CC45018
Controllo urinario per Oppiacei – Livello 1
Controllo urinario per Oppiacei – Livello 2
CC45019
Controllo urinario per Oppiacei – Livelli 1 e 2
2 x 6 x 5 ml
CC45116
Calibratore urinario per 6-Monoacetilmorfina
2 x 5 x 5 ml
CC46116
Calibratore urinario per Cocaina
2 x 5 x 5 ml
CC48116
Calibratore urinario per EDDP
2 x 5 x 5 ml
CC48017
Controllo urinario per EDDP, 6-MAM e Cocaina – Livello 1
6 x 5 ml
CC48018
Controllo urinario per EDDP, 6-MAM e Cocaina – Livello 2
6 x 5 ml
CC48019
Controllo urinario per EDDP, 6-MAM e Cocaina – Livelli 1 e 2
2 x 6 x 5 ml
CC47016
Calibratore urinario per THC
2 x 5 x 10 ml
CC47017
Controllo urinario per THC – Livello 1
6 x 10 ml
CC47018
Controllo urinario per THC – Livello 2
6 x 10 ml
CC47019
Controllo urinario per THC – Livelli 1 e 2
Z394983500
Vial standard di vetro da 2 ml con tappo a vite
A7501030X020
Colonna analitica Pursuit C 18 (30 x 2 mm. 2.8 um)
8
6 x 5 ml
6 x 5 ml
2 x 6 x 10 ml
1 x 144 Pz
1 Pz
Droghe d’Abuso urinarie
(Cromatogrammi/Spettri di riferimento LC-MS)
Fig. 1 :
Campione urinario
R.T. 3.54 delta-9-THC-COOH
Fig. 2 :
9
Spettro di Massa del delta-9-THC-COOH
Transizione 343.0 > 298.8
Droghe d’Abuso urinarie
(Cromatogrammi/Spettri di riferimento LC-MS)
Fig. 3 :
Campione urinario
R.T. 1.78 BENZOILECGONINA
Fig. 4 :
10
Spettro di Massa della Benzoilecgonina
Transizione 290.0 > 168.0
Droghe d’Abuso urinarie
(Cromatogrammi/Spettri di riferimento LC-MS)
Fig. 5 :
Campione urinario
R.T. 2.71 COCAINA
Fig. 6 :
11
Spettro di Massa della Morfina
Transizione 304.3 > 182.1
Droghe d’Abuso urinarie
(Cromatogrammi/Spettri di riferimento LC-MS)
Fig. 7 :
Campione urinario
R.T. 1.75 COCAETILENE
Fig. 8 :
12
Spettro di Massa della Cocaetilene
Transizione 318.1 > 196.2
Droghe d’Abuso urinarie
(Cromatogrammi/Spettri di riferimento LC-MS)
Fig. 9 :
Campione urinario
R.T. 1.00 MORFINA
Fig. 10 :
13
Spettro di Massa della Morfina
Transizione 286.3 > 201.2
Droghe d’Abuso urinarie
(Cromatogrammi/Spettri di riferimento LC-MS)
Fig. 11 :
Campione urinario
R.T. 1.85 CODEINA
Fig. 12 :
14
Spettro di Massa della Codeina
Transizione 300.0 > 215.1
Droghe d’Abuso urinarie
(Cromatogrammi/Spettri di riferimento LC-MS)
Fig. 13 :
Campione urinario
R.T. 1.95 ETILMORFINA
Fig. 14 :
15
Spettro di Massa della Etilmorfina
Transizione 314.0 > 183.0
Droghe d’Abuso urinarie
(Cromatogrammi/Spettri di riferimento LC-MS)
Fig. 15 :
Campione urinario
R.T. 1.70 DIIDROCODEINA
Fig. 16 :
16
Spettro di Massa della Diidrocodeina
Transizione 302.0 > 199.0
Droghe d’Abuso urinarie
(Cromatogrammi/Spettri di riferimento LC-MS)
Fig. 17 :
Campione urinario
R.T. 2.92 METADONE
Fig. 18 :
17
Spettro di Massa del Metadone
Transizione 310.1 > 265.0
Droghe d’Abuso urinarie
(Cromatogrammi/Spettri di riferimento LC-MS)
Fig. 19 :
Campione urinario
R.T. 2.55 3,4-MDMA
Fig. 20 :
18
Spettro di Massa del 3,4-MDMA
Transizione 194.0 > 163.0
Droghe d’Abuso urinarie
(Cromatogrammi/Spettri di riferimento LC-MS)
Fig. 21 :
Campione urinario
R.T. 2.39 AMFETAMINA
Fig. 22 :
19
Spettro di Massa della Amfetamina
Transizione 153.9 > 90.8
Droghe d’Abuso urinarie
(Cromatogrammi/Spettri di riferimento LC-MS)
Fig. 23 :
Campione urinario
R.T. 2.39 Metamfetamina
Fig. 24 :
20
Spettro di Massa della Metamfetamina
Transizione 150.0 > 150.0
Droghe d’Abuso urinarie
(Cromatogrammi/Spettri di riferimento LC-MS)
Fig. 25 :
Campione urinario
R.T. 2.80 3,4-MDE
Fig. 26 :
21
Spettro di Massa del 3,4-MDE
Transizione 208.0 > 163.1
Droghe d’Abuso urinarie
(Cromatogrammi/Spettri di riferimento LC-MS)
Fig. 27 :
Campione urinario
R.T. 2.65 EDDP
Fig. 28 :
22
Spettro di Massa dell’EDDP
Transizione 278.1 > 234.0
