Calypso II
Sistema automatico per una rapida caratterizzazione quantitativa di interazioni tra
macromolecole mediante la tecnica del composition-gradient multi-angle light scattering
(CG-MALS) La tecnica del Composition-Gradient Multi-Angle Light Scattering (CG-MALS)
utilizza campioni non frazionati, di diversa composizione, per caratterizzare le interazioni tra
macromolecole, quali ad esempio auto ed etero associazioni di proteine, velocità di reazione,
l’affinità di aggregazioni irreversibili ed il secondo coefficiente del viriale.
Non è necessario trattare il campione prima della misura, non si deve derivatizzare la molecola
ne tantomeno immobilizzare la molecola, la misura si esegue con la molecola tal quale ed in
soluzione.
Il Calypso è complementare ad altre tecniche analitiche quali la calorimetria e la
surface plasmon resonance (SPR), e come queste fornisce informazioni su:
•Specific reversible complex binding: Kd (costante di dissociazione all’equilibrio) da
picomolare a millimolare; stechiometria di associazione di complessi; auto o etero associazioni.
•Interazioni non specifiche: coefficienti del viriale.
•Aggregazioni ed altre reazioni tempo dipendenti: cinetiche in stop flow, t (tempo di
equilibratura o di rilassamento).
•Zimm plot: Gradienti di concentrazione per la determinazione di MW (peso molecolare
medio ponderale); A2, A3 (secondo e terzo coefficiente del viriale); rg (raggio di girazione).
•Incremento dell’indice di rifrazione: dn/dc L’automazione del Calypso aumenta la
produttività migliorando sia l’affidabilità che la ripetibilità, minimizzando i tempi ed il lavoro,
fornendo risultati rapidi ed accurati.
Applic
azioni: Drug Discovery:
•Quantificazione della affinità di binding e la stechiometria di interazioni antigene/anticorpo o
enzima/inibitore
•Studio dell’influenza di piccolo molecole sull’interazione proteina-proteina
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Calypso II
Sviluppo di Processo:
•Determinazione del secondo coefficiente del viriale modificando la composizione del buffer per
migliorare la stabilità
e la viscosità della formulazione
•Determinazione del cross virial coefficients per ottimizzare la purificazione dell’anticorpo e
studiare l’effetto degli eccipienti nella formulazione.
Self-assembly/Aggregazione:
•Quantificare l’impatto della forza ionica, pH o degli eccipienti sulla polimerizzazione o
l’associazione di proteine.
•Misura della cinetica di self-assembly e di aggregazione dalla variazione del peso molecolare o
del raggio di girazione
Biotech R&D:
•Caratterizzazione della affinità di binding di macromolecole e della stechiometria dei complessi
associati in un ampio range di composizione del buffer, tempo e temperatura.
Detectors compatibili: detectors MALS: DAWN HELEOS® o miniDAWN TREOS® detectors a concentrazione: Optilab® T-rEX, UV/Vis o simili
Pompe a siringa:
3 pompe a siringa e su ognuna valvola a 4 vie Volumi delle Siringhe:
12.5 μL-12.5 mL Degasatore:
1 per pompa, 100 μL di volume interno
Limiti di Pressione:
200-350 psi in funzione della siringa usata
Volume di campione per Analisi:
1.5-7 mL, a seconda del detector
Ripetibilità della misura:
Mw: ±5%, A2: ±0.5x10-4 mol*mL/g² per campioni con massa molare da 50-100 kDa
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log(Kd): ±0.3
Range di misura:
Kd: 100 pM-1 mM tipica per molecule da 100 kDa 3/3
