Lisi o lisogenia? REPRESSIONE DEI GENI DELLA VIA LITICA Operatori che regione regolatrice controllano i geni del ciclo litico La proteina CI si lega come dimero agli operatori e blocca la trascrizione dei geni del ciclo litico N e cro Come sono fatti gli operatori del ciclo litico? Hanno 3 siti di legame per il repressore, ognuno di 17 coppie di nucleotidi con sequenze nucleotidiche simili ma non identiche OR OL -Il repressore CI ha maggiore affinita’ di legame per i siti OL1 e OR1, minore per i siti OL2 e OR2 e ancora minore per i siti OL3 e OR3 -Il legame di CI ai siti dell’operatore e’ cooperativo, ovvero quando e’ legato al sito OL1 o OR1 aumenta la sua affinita’ per i siti OL2 e OR2 LO STATO LISOGENICO E’ STABILE PERCHE’ LA SINTESI DEL REPRESSORE E’ MANTENUTA IN MODO AUTOGENO, OVVERO IL REPRESSORE REGOLA SE STESSO PRM PROMOTORE DI MANTENIMENTO DEL REPRESSORE CHE SI TROVA FRA CI e OR3 Il repressore legato al sito OR2 da un lato favorisce la trascrizione a partire dal promotore PRM e dall’altro reprime la trascrizione a partire da PR PRM PR attiva inibisce CI Se CI lega OR3 blocca la trascrizione a partire da PRM, si riduce la quantita’ di CI prodotta e CI si stacca dal sito OR3 ristabilendo la sua propria produzione GENI DELLA VIA LITICA N E CRO PRECOCI CII E CIII PRECOCI TARDIVI GENI TARDIVI PROTEINE DELLA STRUTTURA FAGICA CRO E’ IL REPRESSORE DELLA LISOGENIA -FUNZIONA IN MODO CONTRARIO A CI -SI LEGA ANCH’ESSO AGLI OPERATORI OL E OR -POSSIEDE MAGGIORE AFFINITA’ DI LEGAME PER I SITI OR3 E OL3 E MINORE PER I SITI OR1 E OL1 -CRO SI LEGA AL SITO OR3 E BLOCCA LA SINTESI DI CI da PRM N ANTITERMINATORE TRASCRIZIONALE PERMETTE LA TRASCRIZIONE AL DI LA’ DEI SEGNALI DI TERMINAZIONE E QUINDI LA TRASCRIZIONE DEI GENI TARDIVI TERMINATORI La proteina N si lega ai siti nut, che in presenza di proteine batteriche, permette all RNA polimerasi di continuare a trascrivere a valle dei terminatori In assenza di N la trascrizione si blocca al livello dei terminatori e le proteine tardive del ciclo litico non si producono La proteina Rho e’ il terminatore batterico della trascrizione Il suo effetto e’ contrastato dalla proteina N Gli UV o shock termico possono causare il passaggio dallo stato lisogenico allo stato litico:si attivano i meccanismi di riparazione del DNA, con attivazione della proteina RecA che taglia il repressore CI nella regione di dimerizzazione STATO LITICO O LISOGENICO? -Dipende dall’equilibrio tra proteina Cro e CI, ovvero da chi occupa per primo i siti degli operatori OL e OR Come si stabilisce la competizione tra proteina Cro e CI? Un altro promotore:PRE Primo promotore ad essere attivato dopo che lambda ha inserito il suo DNA nella cellula ospite PRE si attiva se e’ presente la proteina CII, precoce tardiva La proteina CII e’ molto instabile ed e’ mantenuta stabile dal prodotto del gene CIII PRE PRODUCE UN TRASCRITTO CHE CODIFICA L’ANTISENSO DI CRO E IL PRODOTTO DI CI, PER CUI CONTRIBUISCE ALLO STABILIRSI DEL CICLO LISOGENICO L’ATTIVAZIONE DI PRE DIPENDE DA CIII, CHE DIPENDE A SUA VOLTA DALLE CONDIZIONE DELLA CELLULA BATTERICA:IN CONDIZIONI POVERE DI CRESCITA CIII PROTEGGE PIU’ EFFICACEMENTE CII E SI STABILISCE LA LISOGENIA