Biolife
Italiana Srl
Scheda Tecnica
N°401320 B I-4 04/2006 Pagina 1 di 2
m-CP AGAR BASE
Terreno di base e supplemento selettivo per l’isolamento e l’identificazione
presuntiva di Clostridium perfringens nelle acque
FORMULE TIPICHE
m-CP Agar Base (g/l)
Triptosio……………….…..…30.0
Estratto di lievito………….....20.0
Saccarosio………………...…..5.0
L-cisteine HCl……………...….1.0
Magnesio solfato. 7H2O…..….0.1
Agar…………………….….....13.2
Bromocresolo porpora..........0.04
m-CP Antimicrobic Supplement (contenuto della fiala)
Polimixina B solfato………..12.5 mg (105.000 IU)
D-Cicloserina ………………200 mg
METODO DI PREPARAZIONE
Sospendere 34.7 g in 500 ml di acqua distillata fredda. Portare ad ebollizione sotto agitazione fino a
completa soluzione, quindi sterilizzare in autoclave a 121°C per 15 minuti. Raffreddare a 50°C ed addizionare
il contenuto di una fiala di m-CP Antimicrobic Supplement ricostituita secondo le indicazioni contenute nella
confezione. Addizionare inoltre le seguenti soluzioni sterili preparate di fresco in acqua distillata, con i
substrati fornibili da Biolife in flaconi contenenti ciascuno una quantità per 500 g di terreno in polvere:
Fenoftaleina difosfato 0.5%
10 ml
Cloruro ferrico esaidrato 4.5%
1 ml
Indoxyl -D-glucoside 0.75%*
4 ml
*equivalente a 30 mg in 4 ml
Mescolare bene e distribuire in piastre di Petri sterili
pH finale 7.6 ± 0.2
DESCRIZIONE
Il terreno completo m-CP Agar è un substrato colturale selettivo e cromogenico per l’isolamento e
l’identificazione presuntiva di Clostridium perfringens nelle acque. Il terreno m-CP Agar è stato descritto da
Bisson and Cabelli per il conteggio rapido di C. perfringens nelle acque ed è ora raccomandato dall’
European Council Directive 98/83/EC e dal DL 2/2/2001 n° 31 per l’esame delle acque destinate al consumo
umano.
Nel m-CP Agar la differenziazione di C.perfringens è ottenuta attraverso le seguenti reazioni biochimiche: -D
glucosidasi, fermentazione del saccarosio, fosfatasi acida. L’attività dell’enzima -D glucosidasi si esplica sul
substrato indoxyl
-D-glucoside; in caso di reazione positiva si sviluppa un colore verde blu. La
fermentazione del saccarosio si evidenzia con lo sviluppo di una colorazione gialla dovuta al viraggio di
colore dell’indicatore di pH bromocresolo porpora; la presenza della fosfatasi si traduce nel clivaggio della
fenoftaleina difosfato e si evidenzia con uno sviluppo di un colore rosa-rosso esponendo le colonie a vapori
di ammonio idrossido.
IMPIEGO
Filtrare un volume adeguato di campione attraverso una membrana di acetato di cellulosa o di nitrato di
cellulosa da 0.45 µm. Posizione la membrana su una piastra di m-CP Agar preparato come sopra descritto.
Incubare in anaerobiosi per 21 ± 3 ore a 44 ± 1° C. Esaminare le piastre per la presenza di colonie di
C.perfringens presunto: colonie opache, gialle che virano al rosa-rosso dopo esposizione a vapori di
ammonio idrossido per 20-30 secondi.
Su m-CP Agar si possono osservare le seguenti colonie tipiche:
Biolife Italiana S.r.l. Viale Monza 272, 20128 Milano. Tel. n° 02-25209.1, Fax n° 02-2576428,
E-mail: [email protected] ; sito Web: www.biolifeit.com
Biolife
Microrganismo
C. perfringens
Altri clostridi (C.baratii,
C.paraputrificum,
C.tertium)
Altri clostridi
(C.bifermentans,
C.difficile,
C.sporogenes)
Altri clostridi
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caratteristiche delle
colonie
saccarosio
-D-glucosidasi
Giallo opache, rosse dopo
esposizione ai vapori di
ammonio idrossido
Blu verde
+
-
+
+
Porpora
-
+o-
Giallo opache negative
all’esposizione ai vapori di
ammonio idrossido
+
-
fosfatasi
+
-
CONTROLLO DI QUALITÀ DELL’UTILIZZATORE
Controllo produttività: Clostridium perfringens ATCC13124: buona crescita, colonie gialle, opache, rosso-rosa
dopo esposizione ai vapori di idrossido ammonio.
Controllo specificità: Clostridium sporogenes ATCC 19404: crescita, colonie porpora.
Controllo selettività: Escherichia coli ATCC 25922 : inibito
Incubazione: 44°C , anaerobiosi, 24 ore.
CONSERVAZIONE
Terreno in polvere m-CP Agar Base: conservare a 15-30°C al riparo della luce, in luogo asciutto. In queste condizioni il
prodotto rimane valido fino alla data di scadenza indicata in etichetta. Non utilizzare oltre questa data. Eliminare se vi
sono segni evidenti di deterioramento della polvere (modifiche del colore, indurimento della polvere ecc.).
Supplemento m-CP Antimicrobic Supplement conservare a 2-8°C fino alla data di scadenza indicata in etichetta.
Conservare il terreno preparato in laboratorio in piastra per un massimo di 5 giorni al buio a 2-8°C.
PRECAUZIONI E SICUREZZA DEGLI OPERATORI
Solo per uso diagnostico in vitro. I prodotti qui descritti devono essere usati solo in laboratorio, da operatori
adeguatamente addestrati. Operare con metodi approvati di asepsi e di sicurezza nei confronti degli agenti patogeni.
Sterilizzare le piastre dopo il loro uso e prima dell’eliminazione come rifiuto.
BIBLIOGRAFIA
• Bisson, J. W. and Cabelli, V. J. (1979) App. and Environ. Microb., 37, 1, pp 55-88.
• Decreto Legislativo 2 febbraio 2001 n° 31: Attuazione della Direttiva 98/83/CE relative alla qualità delle acque
destinate al consumo umano.
• E.U. (1998) 98/83/EC of Council of 3rd of November 1998 on the quality of water intended for human consumption.
Off. J. Eur. Commun., L330, 32-54.
CONFEZIONI
Terreno in polvere
4013201
m-CP Agar Base
4013202
m-CP Agar Base
100 g (1.4 l)
500 g (7,2 l)
Supplemento selettivo
4240070
m-CP Antimicrobic Supplement
10 fiale per 500 ml
Substrati
4240070A
4240070B
4240070C
fiala con 750 mg
fiala con 700 mg
fiala con 450 mg
m-CP Supplement A -Fenoftaleina difosfato (fiala predosata per 500 g)
m-CP Supplement B -loruro ferrico esaidrato (fiala predosata per 500 g)
m-CP Supplement C -Indoxyl -D-glucoside (fiala predosata per 500 g)
Terreno pronto in piastra da 55 mm
491320
m-CP Agar
30 piastre ∅ 55 mm
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