Biolife
Italiana S.r.l.
Scheda Tecnica
N°401368B I-2
9/2003 Pagina 1 di 2
DESOXYRIBONUCLEASE TEST MEDIUM
Terreno per il test della DNasi
FORMULA TIPICA (g/l)
Triptosio
20
Acido desossiribonucleico
2
Sodio cloruro
5
Agar
15
PREPARAZIONE
Sospendere 42 g di polvere in 1000 ml di acqua distillata fredda. Portare ad ebollizione sotto
agitazione, ed autoclavare a 121°C per 15 minuti. Raffreddare a circa 50°C e distribuire in piastre
sterili.
pH finale 7.3 ± 0.2
DESCRIZIONE
Desoxyribonuclease Test Medium, preparato secondo la formula di Jeffries, Holtman e Guse è un
terreno impiegato per l’identificazione degli stafilococchi patogeni sulla base della presenza dell’enzima
DNasi che scinde il DNA presente nel terreno. Cunningham, Catlin e Garilhe nel 1956 hanno
dimostrato che i ceppi di Staphylococcus aureus coagulasi positivi, mannitolo fermentanti e cromogeni,
producono una desossiribonucleasi termostabile calcio-dipendente, capace di idrolizzare i legami 5’fosfodiesterici del DNA e come tale distinguibile dagli altri enzimi similari di origine diversa. Weckman
e Caltin in uno studio condotto su 87 ceppi di stafilococco di origine clinica hanno dimostrato che
l’attività desossiribonucleasica è ben correlata con la presenza dell’enzima coagulasi e che il test della
coagulasi può essere supplementato dal test della DNasi nella determinazione degli stafilococchi
patogeni. Il Bergey’s Manual tra le proprietà distintive del genere Staphylococcus aureus include la
presenza dell’endonucleasi resistente al calore.
IMPIEGO
Per l’esecuzione del test strisciare pesantemente sulla superficie dell’agar ceppi isolati di stafilococchi
e incubare per 12-18 ore. Se si tratta di stafilococchi che possiedono l’attività DNasica si forma attorno
alla crescita un alone chiaro evidenziabile con acido cloridrico 1N, versato sulla superficie delle piastre.
Waller e coll. riportano un metodo alternativo a quello descritto che fa uso di blu-o toluidina.
Incorporando il colorante nel DNase Test Medium dopo sterilizzazione alla concentrazione dello
0.005% o ricoprendo per 3-5 minuti le piastre, inoculate ed incubate a 37°C per 18 ore, con una
soluzione acquosa allo 0.05% del colorante, gli autori citati registrano ottimi risultati nella
determinazione dell’attività DNasica dei ceppi saggiati. Tale attività si evidenzia con un alone rosa
attorno alla crescita batterica che con il metodo del colorante in soluzione, versato al di sopra delle
piastre, si apprezza bene dopo 30 minuti.
CONTROLLO QUALITÀ DELL’UTILIZZATORE
Controllo DNAsi positivo: S.aureus ATCC 25923
Controllo DNAsi negativo: E.coli ATCC 25922
Incubazione a 37°C per 24 ore
CONSERVAZIONE
Conservare a 10-30°C al riparo della luce, in luogo asciutto. In queste condizioni Desoxyribonuclease
Test Medium è valido fino alla data di scadenza indicata in etichetta. Non utilizzare oltre questa data.
Eliminare se vi sono segni evidenti di deterioramento della polvere (modifiche del colore, indurimento
della polvere ecc.). Conservare le piastre preparate in laboratorio per un massimo di 7 giorni a 2-8°C
PRECAUZIONI E SICUREZZA DEGLI OPERATORI
Il preparato qui descritto non è classificato come pericoloso ai sensi della legislazione vigente né contiene
sostanze pericolose in concentrazioni 1%. Come per tutti i terreni in polvere anche la manipolazione del
Desoxyribonuclease Test Medium deve essere effettuata con una adeguata protezione delle vie respiratorie.
Biolife Italiana S.r.l. Viale Monza 272, 20128 Milano. Tel. n° 02-25209.1, Fax n° 02-2576428,
E-mail: [email protected] ; sito Web: www.biolifeitaliana.it
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Il prodotto qui descritto è solo per uso diagnostico in vitro e deve essere usato in laboratorio, da operatori
adeguatamente addestrati, con metodi approvati di asepsi e di sicurezza nei confronti degli agenti patogeni.
Sterilizzare le piastre dopo il loro uso e prima dell’eliminazione come rifiuto.
BIBLIOGRAFIA
• Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology (1974) 8th edition. Baltimore: the Williams & Wilkins Company.
• Cunningham, L. Catlin, B.W. & M.P. di Garilhe (1956) J. Am. Chem. Soc., 78, 4642-4645.
• Jeffries, C.D., Holtman, D.F. & Guse D.G. (1957) J. Bacteriol., 73, 590.
•Waller, J.R., Hodel, S.L. and R.N. Nuti (1985) - Improvement of two toluidine Blue O-mediated techniques for
DNase detection. J. Clin. Microbiol. 21, 195.
• Weckman B.G. & Catlin B, W. (1957) J. Bacteriol., 73, 747-753.
CONFEZIONI
4013682
Desoxyribonuclease Test Medium,
CODICE CND W0104010101
500 g (11.9 l)
IVD
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