Corso di Laurea Specialistica in Biologia Molecolare Chimica Bioorganica Prova scritta – 12/2/2007 Il peptide sotto riportato ha un’elevata affinità per la proteina PKG H-Arg-Lys-Arg-Ser-Arg-Ala-Glu-OH 5) Se questa molecola viene trattata con l’enzima tripsina, che ha una specificità di taglio rivolta a legami ammidici il cui amminoacido dal lato N-terminale è basico, che cosa si ottiene? 7) Qual è lo stato di carica di questo peptide a pH fisiologico (circa 7)? 9) Se la serina viene fosforilata dalla PKG, qual è la nuova carica globale di questo peptide sempre a pH fisiologico (circa 7)? 11) Se questa molecola viene fatta reagire a pH= 10 con la biotina, attivata al gruppo carbossile con un estere attivo (EA, figura sottostante), quante molecole di biotina si legheranno covalentemente al peptide ed in quali posizioni? O HN NH EA S O 4’) (opzionale) rappresentare schematicamente il meccanismo della reazione 4). Lo zucchero qui a fianco è il trealosio, che è comune in batteri, spore, funghi ed insetti. E’ formato da due unità di Dglucosio. 5) Identificate la configurazione (alfa o beta) dei due ossidrili anomerici. 6) Il trealosio è reattivo al saggio di Tollens? Perché? 7) Se tratto il trealosio in acqua lievemente acida a 60°c per tre ore, cosa si forma? 7’) (opzionale) scrivete il meccanismo della reazione soprastante. La metilazione della citosina è un meccanismo di regolazione genica molto comune nei mammiferi. La reazione biochimica è rappresentata a fianco. 8) Se una citosina metilata che si trova nel DNA va incontro a reazione di deamminazione spontanea, qual è il prodotto? E’ distinguibile dalle altre basi del DNA? 8’) (opzionale) Quale delle seguenti molecole, se usate al posto della Sadenosilmetionina, avrebbe la maggior probabilità di fare avvenire la stessa reazione per via chimica? H C I 3 H C H 3 O H C N 3 C 9) Spiegare brevemente il metodo di sequenziamento di Sanger, o del dideossi. 10) Applicando il metodo di Sanger tradizionale, è possibile distinguere citosine metilate da citosine non metilate? Perché?