MLL Break Apart
Sonde per Citogenetica Molecolare (FISH)
Descrizione della sonda
La sonda CGI MLL Break Apart è stata sviluppata per la rilevazione delle traslocazioni che coinvolgono il gene MLL sul
cromosoma 11q23.3 mediante ibridazione in situ fluorescente (FISH). Sono stati descritti almeno 54 geni partner di
traslocazione. Traslocazioni che coinvolgono MLL sono state trovate sia nella leucemia linfoblastica acuta (LLA) (3-10%)
che nella leucemia mieloide acuta (LMA) (8-10%) e hanno rilevanza clinica. Le implicazioni prognostiche tuttavia
dipendono dall’età e dal fenotipo della leucemia. LLA infantili con riarrangiamenti del MLL (circa 80%) sono ad alto rischio
e richiedono un trattamento aggressivo. Nella LMA, la prognosi è intermedia e non è in relazione all’età. Traslocazioni di
MLL si osservano anche in quasi il 25% dei pazienti con leucemie correlate alla terapia, in particolare quelle che
insorgono a seguito di un trattamento co gli inibitori del DNA topoisomerasi II e la pognosi in questi pazienti è infausta.
Oltre alle traslocazioni, in un sottogruppo di LLA e LMA possono verificarsi delezioni al 3’ e amplificazioni di MLL.
Rappresentazione schematica della sonda
MLL Break Apart
MLL
11q23
centromere
5’
~770kb
Le barre orizzontali rossa e verde indicano le
regioni coperte dalla sonda (approssimate alla
scala NCBI Build 36.1/Hg18/2006). I breakpoints
sul gene MLL coprono una regione di 8 kb compresa tra gli esoni 5 e 11 (frecce). La marcatura diretta
5’ MLL (verde) si affianca al gene MLL e può
rilevare traslocazioni, amplificazioni e delezioni
della parte 3’ MLL.
telomere
3’
~820kb
MLL
11
Interpretazione del segnale
Nei nuclei metafisici e interfasici normali diploidi, la sonda genera due segnali di fusione (rosso/verde o giallo) corrispondenti ai due cromosomi che coinvolgono MLL, il pattern che si osserva con più frequenza è una fusione che
rappresenta il cromosoma 11 normale ed un segnale rosso e uno verde che rappresentano i cromosomi derivativi
(figura 2). Le amplificazioni, le delezioni a 3’ di MLL, le copie aggiuntive del cromosoma 11, eventuali traslocazioni
sbilanciate, le copie multiple dei derivativi possono dare luogo a delle variante nel pattern dei segnali e queste dovrebbero essere confermate analizzando la metafase qualora sia possibile.
Figura 1: Metafase diploide
normale e nucleo in interfase (da
sangue periferico normale) con 2
segnali di fusione (rosso/verde o
giallo)
Referenze
1. Meyer, C., et al., Leukemia, 2009. 23: 1490-9.
2. Coenen, E.A., et al., Blood, 2011. 117(26): 7102-11.
3. Chowdhury, T., et al. Blood Cells Mol Dis, 2008. 40:192-199.
4. Barber, K. E, et al. Genes Chromosomes Cancer, 2001. 41:226-271.
5. Andersen, M. K, et al. Genes Chromosomes Cancer, 2001. 31:33-41
www.technogenetics.it
Figura 2: Nucleo in interfase con
1 segnale di fusione (rosso/verde
o giallo), 1 rosso (3’ MLL) e 1
verde (5’ MLL).
Filtri Microscopio a Fluorescenza
Fluoroforo
Eccitazione max
Emissione max
Verde
496 nm
520 nm
Rosso
580 nm
603 nm
DAPI
360 nm
460 nm
27
