ACETALDEIDE URINARIA in UV

ACETALDEIDE URINARIA in UV – Codice Z66010
BIOCHIMICA
Il dosaggio della Acetaldeide o Aldeide acetica urinaria viene effettuato in seguito
all’esposizione ad Acetaldeide ed Etanolo.
L’Acetaldeide a temperatura ambiente è un liquido incolore volatile e infiammabile,
dall'odore pungente e irritante. È una sostanza tossica, probabilmente cancerogena. È un
importante reattivo impiegato nelle sintesi industriali organiche.
Come tutte le aldeidi è facilmente ossidabile ad acido, in questo caso ad acido acetico. Nel
corpo umano, l'acetaldeide si forma per iniziale ossidazione dell’Etanolo nel fegato ad
opera dell’enzima alcool deidrogenasi; viene successivamente convertita in acido acetico
dall'enzima aldeide deidrogenasi. Essendo più tossica dell'alcool etilico, l'Acetaldeide è
responsabile di molti dei malesseri associati ad un’elevata assunzione di alcool. I farmaci
concepiti per combattere l'abuso di alcool (come il disulfiram) agiscono su quest'ultimo
stadio rallentando l'ossidazione dell'Acetaldeide ad acido acetico con conseguente
prolungamento del malessere.
Il presente metodo permette di dosare l’Acetaldeide urinaria in HPLC.
EUREKA srl – LAB DIVISION
VAT N° 01547310423
E-mail:[email protected]
www.eurekaone.com
Release N° 002
Head Quarter:
Via Enrico Fermi 25
60033 Chiaravalle (AN) ITALY
Tel. +39 071 7450790
Fax + 39 071 7496579
Acetaldeide urinaria in UV
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Marzo 2010
CARATTERISTICHE DEL KIT
Principio del Metodo:
Il presente metodo consente di determinare le concentrazioni urinarie dell’Acetaldeide dopo
derivatizzazione del campione urinario a 70 °C per 15 minuti. Il campione derivatizzato viene diluito ed
iniettato nel cromatografo HPLC.
Recupero del Metodo:
100 %
Sensibilità del Metodo:
0,1 mg/l
Range dinamico del Metodo:
0,05 – 500 mg/l
Valori di riferimento:
Popolazione non esposta
< 1 mg/l
Popolazione esposta
< 50 mg/l
Tutti i reagenti sono pronti all’uso e stabili 3 anni a
temperatura ambiente (< 20 °C).
Contenuto della confezione:
Reagente A - Soluzione Tampone 1, 1 x 10 ml
Reagente B - Soluzione Tampone 2, 1 x 10 ml
Reagente C - Soluzione Derivatizzante, 1 x 10 ml
Reagente D - Soluzione Test/Standard chimico, 1 x 10 ml
Vedi Avvertenze
Reagente M - Fase Mobile, 4 x 500 ml
Dotazione strumentale minima richiesta :
Strumento HPLC isocratico con loop da 50 µl
Detector UV λ = 385 nm
Registratore di cromatogrammi
Dotazione opzionale :
Autocampionatore
Computer gestionale
Modalità di raccolta delle urine :
Urine di fine turno o spot per abuso di alcool.
Stoccare il campione a 2-8 °C, stabile per 2 giorni.
Stabile 3 mesi a -20 °C.
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PROCEDURA PREANALITICA
FASE 1 : Derivatizzazione della Soluzione Test
Reagente A – Soluzione Tampone 1
Reagente D – Soluzione Test
Reagente B – Soluzione Tampone 2
Reagente C – Sol. Derivatizzante
Test
100 µl
50 µl
100 µl
100 µl
Al vortex per 10 secondi
FASE 2 : Incubare a 70 °C per 15 minuti
Raffreddare
FASE 3 : Prelevare 100 µl del Test derivatizzato ed aggiungere 400 µl di H2O di grado HPLC
NOTA : Prima di iniziare la seduta analitica è consigliabile iniettare 50 µl di questa soluzione in HPLC per
identificare il tempo di ritenzione dell’ Acetaldeide che deve essere simile a quello riportato in fig.1. Se il Test
ha dato esito positivo si può procedere alla seduta analitica. Se così non fosse verificare la funzionalità del
sistema analitico. Importante : Questo Test così ottenuto non deve essere usato come calibratore.
PROCEDURA ANALITICA
FASE 1 : Derivatizzazione del Bianco (necessario come punto “0” di calibrazione), dei Campioni, dello
Standard chimico e degli eventuali Controlli (ottenuti diluendo lo Standard chimico in H2O di grado HPLC)
Dispensare in provetta tipo eppendorf da 1,5 ml con tappo:
Bianco
100 µl
50 µl
Reagente A – Soluzione Tampone 1
Acqua di grado HPLC
Reagente D – Standard chimico
Campione
Controllo
Reagente B – Soluzione Tampone 2
Reagente C – Sol. Derivatizzante
Standard
100 µl
Campione
100 µl
Controllo
100 µl
50 µl
50 µl
100 µl
100 µl
100 µl
100 µl
100 µl
100 µl
50 µl
100 µl
100 µl
Al vortex per 10 secondi
FASE 2 : Incubare a 70 °C per 15 minuti
Raffreddare
FASE 3 : Prelevare 100 µl del Campione derivatizzato ed aggiungere 400 µl di H2O di grado HPLC.
N.B.: il campione così preparato è stabile 3 giorni a 2-8 °C
INIEZIONE :
•
Iniettare 50 µl del sovranatante limpido nel cromatografo HPLC e attendere la stampa del
cromatogramma.
Release N° 002
Acetaldeide urinaria in UV
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Marzo 2010
ACETALDEIDE - Avvertenze
REAGENTE D : SOLUZIONE TEST/STANDARD CHIMICO
ACETALDEIDE
99,5 mg/l
PARAMETRI DEL DETECTOR SPETTROFOTOMETRICO
λ
GAIN
TEMPO DI INTEGRAZIONE
385 nm
0,002 AUFS
5 secondi
PROTEZIONE DELLA COLONNA ANALITICA
Per salvaguardare la colonna analitica Reverse Phase GENESIS 4,6 x 150 mm, 4 µ, è
tassativo l’uso del Metaguard - Guard Column (1 x 3 pz), cod. ZA600MG e del Metasaver
Precolumn Filter 0.5 um (1 x 10 pz.) cod. ZA6005.
CONDIZIONAMENTO DELLA COLONNA
Installare la colonna analitica nuova Reverse Phase GENESIS C 18 (4,6 x 150 mm, 4 µ).
Disconnettere il detector e far passare 30 ml di una soluzione di H2O : Acetonitrile ( 20 : 80 v/v )
e successivamente 30 ml di H2O per HPLC, al flusso di 1,2 ml/minuto. Non riciclare i liquidi di
lavaggio. Condizionare la colonna con la fase mobile al flusso di 1,2 ml/minuto e scaricare i
primi 30 ml.
Non è possibile effettuare analisi a ricircolo di fase.
Se la temperatura amb. del Laboratorio è > 20 °C si consiglia di conservare a 2-8 °C la Fase
Mobile fra una seduta analitica e l’altra.
PULIZIA DELLA COLONNA
Disconnettere il detector. Flussare 30 ml di H2O e scaricare. Flussare una soluzione di H2O :
Acetonitrile ( 20 : 80 v/v ) per 30 minuti scaricandola. Quando la colonna verrà usata di nuovo
far passare 30 ml di H2O prima di condizionarla con la Fase Mobile.
PARAMETRI HPLC
LOOP
Flusso di lavoro consigliato
Pressione corrispondente
50 µl
1,2 ml/minuto
Circa 110 bar
PARAMETRI INTEGRATORE HP – 3394 / 3395 / 3396
ATTENUAZIONE
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PARAMETRI COMPUTER GESTIONALE
SECONDO LE SPECIFICHE DEL SOFTWARE GESTIONALE
ACCESSORI E CONSUMABILI
CODICE
DESCRIZIONE
Z66020
Standard chimico per Acetaldeide
ZFM15960E
ZA600MG
ZA6005
S394983500
CONFEZIONE
Colonna Analitica Genesis C18 (150 x 4,6mm -4 um)
Metaguard – Guard Column
2 x 5 ml
1 PZ
1 x 3 PZ
Metasaver Precolumn Filter 0.5 um
1 x 10 PZ
Vial standard di vetro da 2 ml con tappo a vite
1 x 144 PZ
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ACETALDEIDE URINARIA
( Cromatogrammi di Riferimento )
Fig. 1 Soluzione Test
R.T. 13.37 Acetaldeide
Fig. 2
99,5 mg/l
Standard di Calibrazione diluito
R.T. 13.23 Acetaldeide
9,95 mg/l
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Fig. 3
Campione di urina arricchito
R.T. 13.23 Acetaldeide
4,5 mg/l
ACETALDEIDE URINARIA
( Cromatogrammi di Riferimento )
Fig. 4
Standard di calibrazione diluito (Controllo)
R.T. 13.20 Acetaldeide
0,995 mg/l
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Fig. 5
Bianco
R.T. 13.02
Acetaldeide