Dom.A) Per effettuare una reazione di ligasi, ho a disposizione i seguenti “ingredienti”:
un vettore (4200 bp) tagliato con gli enzimi Bcl I e Bam H1, purificato su gel LM. La
concentrazione è di 15 ng / µl, il volume totale è di 125 µl;
un inserto di 210 bp tagliato, su entrambi i lati, con l’enzima Bgl II e purificato su gel LM. La
concentrazione è di 30 ng/µl e il volune totale di 30 µl.
un inserto di 420 bp tagliato con gli enzimi Bcl 1 e Bgl II e purificato su gel LM. La
concentrazione è di 30 ng/µl e il volune totale di 30 µl.
In base a queste condizioni, ti si chiede di:
1)
2)
3)
4)
Descrivere l’assemblaggio della reazione di ligasi (campioni, componenti, volumi).
Descrivere la procedura di trasformazione dei batteri.
Indicare quante colonie ti aspettti per piastra se l’esperimento è riuscito bene.
Indicare in che modo effettueresti l’identificazione delle colonie ricombinanti.
Dom.B) Quali sono le componenti di un terreno di coltura batterico e a che servono?
Dom.C) Su quali principi si basa la metodica di estrazione del DNA plasmidico detta
“miniprep”?
