Elettroforesi
Migrazione di particelle cariche sotto l’azione di un campo elettrico.
Tecnica sia ANALITICA che PREPARATIVA.
Forza elettrica : Fel = q · E
Forza frizionale : Ffr = f ·v
(f = 6 r )
Quando le forze si bilanciano:
q ·E = f ·v
q
v= —·E
f
mobilità elettroforetica :
v
q
= — = —
E
f
Applicando un campo elettrico si può avere effetto Joule:
V=RI
W = R I2
Operare a I costante
Dissipare l’eccesso di calore
Materiali di supporto
•
•
•
•
Storicamente carta
Acetato di cellulosa
Agarosio
Poliacrilammide
ELETTROFORESI SU SUPPORTO
su carta
su gel
Gel di agarosio – Elettroforesi orizzontale
Formazione di un gel di poliacrilammide
• Acrilamide, bisacrilamide monomeri
• Ione perossodisolfato iniziatore
• TEMED catalizzatore
• L’ossigeno è un radicale, quindi interferisce con la polimerizzazione
Effetto “setaccio” in un gel uniforme
SDS-PAGE
(Sodium DodecylSulfate Poly-Acrylamide Gel Electrophoresis)
Migrazione
di proteine
e DNA in
gel di varia
porosita’
MOBILITA’ ELETTROFORETICA ED EFFETTO “SETACCIO MOLECOLARE”
Se q L, in
assenza di gel e’
pressoché
indipendente dalle
dimensioni
molecolari
SDS-PAGE : elettroforesi discontinua
Le tre specie ioniche aggiustano la loro concentrazione in modo che [Cl –] >
[proteina-SDS] > [glicinato].
Poiché la quantità di proteina-SDS e’ molto piccola, questa specie si concentra
in una banda molto stretta fra la banda del glicinato e quella del Cl –.
