D_1416_72-10_Informativa_riarrangiamenti_clonali

INFORMATIVA
per analisi molecolare di riarrangiamenti clonali
D/1416/72-10
Ed. 1
Rev. 0
del 12/03/2012
SOD Diagnostica Genetica
Analisi molecolare di riarrangiamenti clonali del gene IgH e dei geni TCR β e γ
Molti linfomi maligni possono essere diagnosticati tramite dati istomorfologici e immunoistochimici,
talvolta però è difficile distinguere tra un processo reattivo e un linfoma maligno. In queste situazioni la
rivelazione della clonalità utilizzando le analisi molecolari in PCR del riarrangiamento delle
immunoglobuline (Ig) e dei geni del TCR è uno strumento estremamente utile per diagnosticare i
processi linfoproliferativi B e T. I riarrangiamenti dei geni delle immunoglobuline e del TCR danno
origine a regioni ipervariabili e ciascun linfocita maturo presenta uno specifico riarrangiamento in
queste regioni con un’unica sequenza e lunghezza. Per questa ragione, se è amplificato il DNA da una
popolazione linfoide normale o reattiva, si osserverà la presenza di frammenti multipli all’interno di un
determinato intervallo di dimensioni che seguono una distribuzione Gaussiana. Quando il DNA è
amplificato da una popolazione linfoide clonale, i frammenti risultanti sono tutti identici in misura e
sequenza, mostrando un singolo picco superiore.
Il test genetico prevede l’analisi di riarrangiamenti clonali del gene IgH e dei TCR β e γ per poter fare
diagnosi differenziale tra un normale processo reattivo dei linfociti B o T e un processo linfoproliferativo
maligno (linfomi/leucemia B o T).
L’ analisi molecolare si basa sui seguenti metodi:
separazione delle cellule mononucleate, nel caso in cui il campione sia sangue periferico o
sangue midollare, mediante stratificazione con linfoprep o processo di eliminazione della
paraffina nel caso in cui il campione sia tessuto
estrazione del DNA
amplificazione mediante PCR (Polymerase Chain Reaction) del gene IgH o dei geni TCR β e γ
in base al tipo di richiesta del medico
separazione elettroforetica dei frammenti
L’analisi si può effettuare su:
DNA estratto da prelievo di sangue periferico (provette tappo viola da emocromo con
anticoagulante EDTA)
DNA estratto da prelievo di sangue midollare (il prelievo è eseguito tramite BOM in siringa
eparinata)
DNA estratto da tessuto paraffinato
I tempi di refertazione sono previsti in 20 giorni; in caso di urgenza massimo 10 giorni.
Azienda Ospedaliero-Universitaria Careggi - sede legale: largo Brambilla, 3 - 50134 FIRENZE
SOD Diagnostica Genetica, padiglione 15 Piastra dei servizi, tel. 0557949363
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