RIASSUNTO
ABSTRACT
Abbreviazioni
INTRODUZIONE
CAPITOLO1. ILMORBO DI ALZHEIMER.
1.1 L’Alzheimer disease (AD).
1.2 Neuropatologia.
La proteina tau e gli aggregati neurofibrillari.
Il peptide β-amiloide emeccanismi ad esso correlati.
CAPITOLO2. APPROCCIO TERAPEUTICO.
Memantina.
CX516.
Inibitori della β-secretasi, della γ-secretasi e delle chinasi.
Antiaggreganti e modulatori dell’amiloide.
Chelanti di metalli.
Antinfiammatori.
Farmaci che diminuiscono il livello di colesterolo: le statine.
Il futuro:il vaccino.
CAPITOLO3. SISTEMA COLINERGICO.
3.1 Sistema colinergico e AD.
Terapie.
3.2 Le Colinesterasi.
3.3 L’Acetilcolinesterasi.
Funzione.
Forme molecolari.
TcAChE.
CAPITOLO4. STRUTTURA TRIDIMENSIONALE della TcAChE.
4.1 Struttura generale.
4.2 Sito attivo e meccanismo catalitico.
4.3 La gola aromatica.
4.4 Sito periferico.
4.5 Cisteina libera.
4.6 Un enzima dinamico.
CAPITOLO5. INIBITORI dell’AChE.
5.1 Classificazione degli inibitori in base al meccanismo di azione.
Importanza della risoluzione delle strutture cristallografiche
dei complessi cristallini AChE-inibitore.
5.2 Inibitori che si legano covalentemente all’AChE: organofosfati
e carbammati.
I
V
IX
1
3
3
4
5
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19
19
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22
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24
27
27
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32
35
36
36
41
41
42
Organofosfati.
Carbammati.
Mf268.
Rivastigmina.
5.3 Inibitori reversibili.
Edrofonio.
Decametonio.
Tacrina.
E2020.
Huperzina e derivati.
Galantamina.
OGGETTO DELLA TESI.
RISULTATI E DISCUSSIONE
CAPITOLO6.
STRUTTURA
CRISTALLOGRAFICA
DEL
COMPLESSO TRA LA TcAChE ED IL NUOVO FARMACO
GANSTIGMINA (CHF-2819).
6.1 Introduzione.
6.2 Struttura cristallografica della TcAChE in complesso con la
ganstigmina.
Risultati.
Discussione.
CAPITOLO7.
STRUTTURA
CRISTALLOGRAFICA
DEL
COMPLESSO
TRA
LA
TcAChE
E
LA
N1 ,N8 BISNORCIMSERINA:UNA QUESTIONE APERTA.
7.1 Introduzione.
7.2 Struttura cristallografica della TcAChE in complesso con la
nor-eserolina.
Risultati.
Discussione.
CAPITOLO8.
STRUTTURA
CRISTALLOGRAFICA
DEL
COMPLESSO TRA LA TcAChE E GLI INIBITORI SPH-1371 E
SPH-1373.
8.1 Introduzione.
8.2 Struttura cristallografica del complesso tra la TcAChE e
l’SPH-1371.
Risultati.
Discussione.
8.3 Struttura cristallografica del complesso tra la TcAChE e
l’SPH-1373.
Risultati.
42
44
45
46
50
50
50
50
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53
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63
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64
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77
77
78
78
85
93
93
99
99
101
105
105
Discussione.
CONCLUSIONI
SEZIONE SPERIMENTALE
CAPITOLO 9.MATERIALI E METODOLOGIE
9.1 Preparazione della resina utilizzata nella purificazione della
TcAChE tramite cromatografia di affinità.
9.2 Sintesi del ligando di affinità.
Quaternizzazione dell’acido m-dimetilamminobenzoico.
Reazione di scambio ioduro-bromuro.
9.3 Derivatizzazione della fase stazionaria.
9.4 Purificazione della TcAChE.
9.5 Misurazione dell’attività della TcAChE.
9.6 Cristallizzazione della TcAChE.
9.7 Formazione dei complessi tra la TcAChE ed i quattro inibitori.
9.8 Spettro NMR del composto N1, N8 -bisnorcimserina.
9.9 Raccolta dati.
Luce di Sincrotrone.
Temperature criogeniche e crioprotezione.
9.10 Processamento dei dati.
9.11 Determinazione delle strutture.
Sostituzione molecolare.
Fitting ed affinamento delle strutture.
Validazione.
Appendice A. Cristallizzazione di proteine.
Appendice B. Calcolo della densità elettronica.
BIBLIOGRAFIA
RINGRAZIAMENTI
CURRICULUM VITAE ET STUDIORUM
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