Oncorhynchus mykiss

Biol. Mar. Medit. (2006), 13 (1): 544-547
S. Velotto, T. Stasi, M.R. Di Prisco, G. Perrucci, A. Crasto
Dipartimento di Scienze Zootecniche e Ispezione degli Alimenti, Facoltà di Agraria,
Università degli Studi di Napoli “Federico II”, Via Università, 133 - 80055 Portici (NA), Italia.
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LOCALIZZAZIONE ISTOCHIMICA DI MUCOSOSTANZE
NELL’APPARATO DIGERENTE DI ONCORHYNCHUS MYKISS.
TECNICHE DI ALLEVAMENTO ECOCOMPATIBILI
HISTOCHEMICAL LOCALIZATION OF MUCOSUBSTANCES
IN THE DIGESTIVE SYSTEM OF ONCORHYNCHUS MYKISS.
APPLICATION OF ECO-COMPATIBLE BREEDING TECHNIQUES
Abstract
The aim of this study was to evaluate the propolis effect on the production of mucosubstances in the
gastrointestinal tract. Thirtytwo trouts during the most meaningful phases of the development (15, 20, 25
and 30 cm in length) were used. The trouts were divided in two groups: 1 and 2. The first group (control)
and the second group (experimental) differed from one another in the propoli addition (hydro-glycerics
extracts). Samples of stomach (cardial and pyloric) and intestine (anterior and posterior) were investigated.
Key-words: propolis, mucosubstances, gastrointestinal tract.
Introduzione
La buona salute e il benessere dei pesci d’allevamento sono determinanti per
la sostenibilità dell’acquacoltura europea. Preservare quindi, il benessere dei pesci
allevati è una questione chiave per gli allevatori, e potrebbe essere legata alla
composizione della dieta somministrata. Tra i vertebrati (pesci inclusi), il tratto
gastrointestinale è implicato in varie funzioni, quali l’assorbimento dei nutrienti,
la digestione e la prevenzione dalle infezioni. La composizione della dieta
potrebbe essere legata all’integrità del tratto gastrointestinale e potrebbe avere un
certo peso sulle sue funzioni, incidendo sulla salute e la resistenza alle malattie.
L’obiettivo del nostro studio è stato evidenziare come l’aggiunta di sostanze biologicamente attive, quali la propoli, incida sulla produzione di mucosostanze nel
tratto gastrointestinale.
Materiali e metodi
La sperimentazione è stata condotta sulla specie Oncorhynchus mykiss prelevata
durante le fasi più significative dello sviluppo (15, 20, 25, e 30 cm) in due condizioni differenti: dieta tradizionale, distinta in una parte umida (50%) e un’altra
costituita da cereali, semi oleaginosi ed integratori (50%) che nell’insieme andavano a costituire i pellets umidi (congelati) tipo OREGON (OP-2) (gruppo 1);
dieta tradizionale con aggiunta di estratti idroglicerici di propoli (gruppo 2). La
propoli è stata utilizzata in tutte le fasi del ciclo produttivo e al momento della
distribuzione degli alimenti, veniva immessa nelle vasche propoli sciolta (0,05
g/m3 d’acqua). Ogni gruppo era formato da 16 esemplari. L’apparato digerente
Istochimica dell'apparato digerente di Oncorhynchus mykiss
Istochimica dell’apparato digerente di Oncorhynchus mykiss
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della specie in esame è stato suddiviso in stomaco (cardiale e pilorico) e intestino
(anteriore e posteriore). I campioni sono stati quindi fissati nel liquido di Bouin,
inclusi in paraffina e tagliati al microtomo (5 m). Sono stati poi tipizzati con
diverse tecniche per evidenziare la produzione di differenti mucosostanze: acide
solfate (Alcian blu pH 1), acide carbossilate (Alcian blu pH 2,5), neutre (PAS),
carbossilate e solfate (Aldeide fucsina/Alcian blu pH 2,5) neutre e acide (PAS/
Alcian blu pH 2,5).
ochimica dell'apparato digerente di Oncorhynchus mykiss
Risultati
Dall’esame al microscopio ottico dei preparati istologici e istochimici, in
entrambi i gruppi, è stato possibile evidenziare la morfologia dello stomaco e
dell’intestino e la presenza di diversi mucopolisaccaridi lungo tutto il canale alimentare. In relazione alle tipizzazioni istochimiche eseguite sono stati localizzati
Fig. 1. Sezione trasversale di intestino di Oncorhynchus mykiss (Gruppo 1) tipizzata attraverso metodica PAS. L
le seguenti mucosostanze: neutre
PAS)
(Fig.
1 Ingrandimento:
e 2), acide
cellule(tipizzazione
mucose sono debolmente
positive alla
reazione.
×400. solfate
Transverse section of Oncorhynchus mykiss intestine (Group 1) stained with PAS reaction. The mucous cells ar
weakly positive. Magnification: ×400.
1. Sezione trasversale di intestino di Oncorhynchus mykiss (Gruppo 1)Fig.
tipizzata
attraverso
metodica
PAS.diLe
2. Sezione
trasversale
di intestino
Oncorhynchus mykiss (Gruppo 2) tipizzata attraverso metodica PAS. L
Fig. 1 - Sezione
trasversale
di ×400.
intestino
Fig. 2 - Sezione
trasversale
di×250.
intestino di
ule mucose sono debolmente
positive
alla reazione.
Ingrandimento:
cellule mucosedi
sono fortemente
positive
alla reazione.
Ingrandimento:
mykiss
(Gruppo
1)ofreaction.
tipizOncorhynchus
mykiss
2)The
tipizSection
Oncorhynchus
mykiss cells
intestine
with(Gruppo
PAS reaction.
mucous cells are strongl
nsverse section of OncorhynchusOncorhynchus
mykiss intestine (Group
1) stained
with
PAS
The mucous
are (Group 2) stained
positive.
×250.
zata attraverso metodica PAS.
LeMagnification:
celzata attraverso metodica PAS. Le celkly positive. Magnification: ×400.
lule mucose sono debolmente positive
alla reazione. Ingrandimento: ×400.
lule mucose sono fortemente positive
alla reazione. Ingrandimento: ×250.
Transverse section of Oncorhynchus mykiss
intestine (Group 1) stained with PAS reaction. The mucous cells are weakly positive.
Magnification: ×400.
Section of Oncorhynchus mykiss
intestine (Group 2) stained with PAS
reaction. The mucous cells are strongly
positive. Magnification: ×250.
(tipizzazione Alcian blu pH 1), acide carbossilate (tipizzazione Alcian blu pH
2.5), neutre e acide (tipizzazione Alcian blu pH 2,5/PAS) (Fig. 3 e 4) e carbossi3. Sezione
di stomaco di
Oncorhynchus
mykiss (Gruppo
1) tipizzata
attraverso metodica Alcia
late e solfate (tipizzazione AlcianFig.blu
pHtrasversale
2,5/Aldeide
fucsina)
(Fig.
5 e 6).
I risulblu pH 2.5-PAS. Le cellule mucose sono debolmente positive alla reazione. Ingrandimento: ×160.
tati ottenuti indicano che le cellule
mucipare
dell’intestino
e
principalmente
quelle
Section of Oncorhynchus mykiss stomach (Group 1) stained with AB pH 2.5-PAS method. The mucous cells ar
2. Sezione trasversale di intestino di Oncorhynchus mykiss (Gruppo 2)weakly
attraverso
metodica×160.
PAS. Le
positive.
Magnification:
dello stomaco, nel gruppo 1 e 2tipizzata
realizzano
una
cospicua
produzione di mucopoule mucose sono fortemente positive alla reazione. Ingrandimento: ×250.
lisaccaridi
neutri
e stained
acidiwith
e una
scarsa
di mucopolisaccaridi solfati in
tion of Oncorhynchus
mykiss intestine
(Group 2)
PAS reaction.
Theproduzione
mucous cells are strongly
itive. Magnification:accordo
×250.
con i risultati di altri autori (Reifel e Travil, 1979; Elbal e Aguleiro, 1986;
Domeneghini et al., 1992). La risposta alle reazioni è risultata differente, nei vari
stati di accrescimento e nelle varie porzioni dell’apparato digerente. Nello stomaco
si ha una notevole risposta alla reazione, localizzata uniformemente lungo la porzione apicale della mucosa. Nell’intestino la positività maggiore è localizzata nelle
Istochimica dell'apparato digerente di Oncorhynchus mykiss
S. Velotto, T. Stasi, M.R. Di Prisco, G. Perrucci, A. Crasto
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cellule caliciformi. È stato inoltre evidenziato come l’aggiunta di propoli aumenti
la produzione di mucosostanze (gruppo 2) lungo tutto l’apparato digerente.
ig. 2. Sezione trasversale di intestino di Oncorhynchus mykiss (Gruppo 2) tipizzata attraverso metodica PAS. Le
ellule mucose sono fortemente positive alla reazione. Ingrandimento: ×250.
ection of Oncorhynchus mykiss intestine (Group 2) stained with PAS reaction. The mucous cells are strongly
ositive. Magnification: ×250.
ochimica dell'apparato digerente di Oncorhynchus mykiss
Fig. 4. Sezione trasversale di stomaco di Oncorhynchus mykiss (Gruppo 2) tipizzata attraverso metodica Al
blu pH 2,5-PAS. Le cellule mucose sono fortemente positive alla reazione. Ingrandimento: ×160.
Section of Oncorhynchus mykiss stomach (Group 2) stained with AB pH 2.5-PAS method. The mucous cells
strongly positive. Magnification: ×160.
ig. 3. Sezione trasversale di stomaco di Oncorhynchus mykiss (Gruppo
Alcian
Fig.1)4.tipizzata
Sezioneattraverso
trasversalemetodica
di stomaco
di Oncorhynchus mykiss (Gruppo 2) tipizzata attraverso metodica Alci
Fig. 3 - Sezione
trasversale
di blustomaco
di×160.
Fig. 4 - Sezione
trasversale
di stomaco
di×160.
lu pH 2.5-PAS. Le cellule
mucose
sono debolmente
positive alla reazione.
Ingrandimento:
pH 2,5-PAS. Le
cellule
mucose
sono
fortemente
positive alla reazione.
Ingrandimento:
ection of Oncorhynchus mykiss stomach
(Group 1) stained
with (Gruppo
AB pH
2.5-PAS
method.
are (Group 2) stained
Section
of1)Oncorhynchus
mykiss cells
stomach
with AB pH
2.5-PAS method.
Oncorhynchus
mykiss
tipiz- The mucous
Oncorhynchus
mykiss
(Gruppo
2) The mucous cells a
eakly positive. Magnification: ×160.
positive.blu
Magnification: ×160.
zata attraverso metodicastrongly
Alcian
tipizzata attraverso metodica Alcian
pH 2.5-PAS. Le cellule mucose sono
debolmente positive alla reazione.
Ingrandimento: ×160.
blu pH 2,5-PAS. Le cellule mucose
sono fortemente positive alla reazione. Ingrandimento: ×160.
Section of Oncorhynchus mykiss stomach
(Group 1) stained with AB pH 2.5-PAS
method. The mucous cells are weakly positive. Magnification: ×160.
Section of Oncorhynchus mykiss stomach
(Group 2) stained with AB pH 2.5-PAS
method. The mucous cells are strongly
positive. Magnification: ×160.
Fig. 5.
intestino Alcian
di Oncorhynchus mykiss (Gruppo 1) tipizzata attraverso metodica Ald
4. Sezione trasversale di stomaco di Oncorhynchus mykiss (Gruppo
2) Sezione
tipizzatatrasversale
attraversodimetodica
fucsina/Alcian
blu pH×160.
2.5. Le cellule mucose sono debolmente positive alla reazione. Ingrandimento: ×400.
pH 2,5-PAS. Le cellule mucose sono fortemente positive alla reazione.
Ingrandimento:
of Oncorhynchus
ion of Oncorhynchus mykiss stomach (Group 2) stained with ABSection
pH 2.5-PAS
method. The mykiss
mucousintestine
cells are(Group 1) stained with Aldehyde-fuchsin/ABpH 2.5 method.
mucous cells are weakly positive. Magnification: ×400.
ngly positive. Magnification: ×160.
Fig. 5. Sezione trasversale di intestino di Oncorhynchus mykiss (Gruppo 1) tipizzata attraverso metodica Aldei
fucsina/Alcian blu pH 2.5. Le cellule mucose sono debolmente positive alla reazione. Ingrandimento: ×400.
Section of Oncorhynchus mykiss intestine (Group 1) stained with Aldehyde-fuchsin/ABpH 2.5 method. T
mucous cells are weakly positive. Magnification: ×400.
Fig. 1)
6. tipizzata
Sezione trasversale
di intestinoAldeide
di Oncorhynchus mykiss (Gruppo 2) tipizzata attraverso metodica Ald
5. Sezione trasversale di intestino di Oncorhynchus mykiss (Gruppo
attraverso metodica
Fig. 5 - Sezione
difucsina/Alcian
intestino
di
Fig. 6 - Sezione
di allaintestino
di
pH 2,5.
Le cellule
mucose sono trasversale
fortemente positive
reazione. Ingrandimento:
×400.
ina/Alcian blu pH 2.5.
Le cellule
mucose sonotrasversale
debolmente positive
alla
reazione.blu
Ingrandimento:
×400.
of Oncorhynchus
mykiss
intestine
with Aldehyde-fuchsin/ABpH
2.5 method.
Oncorhynchus
mykiss
(Gruppo
1)
Oncorhynchus
mykiss
(Gruppo 2)
ion of Oncorhynchus mykiss intestine
(Group 1) stained
withSection
Aldehyde-fuchsin/ABpH
2.5 method.
The(Group 2) stained
mucous cells
are strongly positive. Magnification:
×400.
ous cells are weakly positive. Magnification:
tipizzata ×400.
attraverso metodica
Aldeide
tipizzata attraverso
metodica Aldeide
fucsina/Alcian blu pH 2.5. Le cellule
fucsina/Alcian blu pH 2,5. Le cellule
mucose sono debolmente positive alla
mucose sono fortemente positive alla
Fig. 6. Sezione trasversale di intestino di Oncorhynchus mykiss (Gruppo 2) tipizzata attraverso metodica Aldei
reazione. Ingrandimento:fucsina/Alcian
×400.
Ingrandimento:
blu pH 2,5. Le cellule reazione.
mucose sono fortemente
positive alla ×400.
reazione. Ingrandimento: ×400.
Section ofintestine
Oncorhynchus mykiss intestine
2) stained with mykiss
Aldehyde-fuchsin/ABpH
Section of Oncorhynchus mykiss
Section(Group
of Oncorhynchus
intestine
mucous cells are strongly positive. Magnification:
(Group 1) stained with Aldehyde-fuchsin/
(Group 2)×400.
stained with Aldehyde-fuchsin/
ABpH 2.5 method. The mucous cells are
ABpH 2.5 method. The mucous cells are
weakly positive. Magnification: ×400.
strongly positive. Magnification: ×400.
6. Sezione trasversale di intestino di Oncorhynchus mykiss (Gruppo 2) tipizzata attraverso metodica Aldeide
ina/Alcian blu pH 2,5. Le cellule mucose sono fortemente positive alla reazione. Ingrandimento: ×400.
2.5 method. T
Istochimica dell’apparato digerente di Oncorhynchus mykiss
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Conclusioni
L’efficienza del tratto digerente dipende dall’azione proteolitica dei succhi
gastrici e pancreatici, dalla secrezione delle cellule caliciformi e dalla digestione
intracellulare (Kappor et al., 1975). La qualità e la quantità delle mucosostanze
secrete lungo tutto il canale alimentare e nei diversi stadi di sviluppo è correlata,
in genere al diverso regime alimentare. La localizzazione dei glicoconiugati osservata risulta essere differente nelle varie fasi di accrescimento (15-30 cm), restando
pressoché costante negli animali adulti (25-30 cm). Si è osservato, inoltre una
maggiore produzione di mucopolisaccaridi lungo tutto l’apparato digerente dei
soggetti appartenenti al gruppo 2, grazie all’azione della propoli che sembra stimolare la secrezione dei succhi gastrici e la peristalsi intestinale.
Bibliografia
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