Diagnostica di laboratorio delle infezioni

Diagnostica di laboratorio delle infezioni
• La diagnostica microbiologica esempio
tipico di diagnostica eziologica
– consiste nell’ identificare la causa microbica di una
malattia o di un’infezione
 Il più delle volte consiste nell’identificazione dell’agente
di un’infezione [alla base di una malattia infettiva]
 Valutazione dell’immunità specifica a una data malattia
o infezione
• Diagnosi di malattia non infettiva, ad eziologia microbica
– botulismo alimentare; intossicazione alimentare stafilococcica;
TSS, ..
diagnostica di laboratorio delle infezioni
partizione principale
Diagnosi diretta
Diagnosi indiretta
• trova e identifica
l’agente
• cerca le prove di una
risposta immunitaria
specifica in atto
– isolandolo e
identificandolo
– dimostrando la
presenza di suoi
prodotti specifici
• tossine
• antigeni
• acidi nucleici
– ricerca di anticorpi
 movimento anticorpale
 titolo alto
 IgG /IgM, sIgA
 scelta tra le svariate
reazioni atg-acp
– valutazione CMI
 skin test (Mantoux per tbc)
 nuovi test
Mantoux intradermo
Linfocita T
Cellula
presentante l’Ag
Rilascio di IFN-, TNF e IL8
richiamo e
attivazione cellulare
indurimento e arrossamento nel punto dell’iniezione
Produzione di interferone- (IFN-)
• L’infezione tubercolare stimola la risposta
della cellule T
• Le cellule-T attivate secernono citochine
– IFN- , TNF, IL-8
• Le cellule-T effettrici producono IFN-
entro poche ore dalla stimolazione
• Le cellule-T memoria devono prima
proliferare trasformandosi in cellule
effettrici, non sono quindi in grado di
produrre IFN- prima di 24h
• L’IFN- non è normalmente presente in
circolo, è stabile e misurabile
I test basati sull’interferone-γ
• I linfociti del soggetto in esame vengono posti in
contatto con l’antigene, con un controllo negativo
privo di antigene e con un controllo positivo
contiene fitoemoagglutinina
• Ricerca dell’IFN-γ dopo opportuna incubazione
– assenza di IFN-γ = ASSENZA DI INFEZIONE
– presenza di IFN-γ = INFEZIONE
• presenza di IFN-γ nel controllo NEG = TEST NON VALIDO
• assenza di IFN-γ nel controllo POS = DEFICIT
IMMUNITARIO
Diagnostica di laboratorio delle infezioni
campione
• Scelta del campione
– sede sterile/non sterile
• Modalità del prelievo
– invasivo/non invasivo
• Conservazione e invio al laboratorio
• Terapia
Diagnostica di laboratorio delle infezioni
Diagnosi diretta - modalità
• Visualizzazione
– Gram
– immunofluorescenza
• Isolamento ed identificazione
• Ricerca antigene
• Ricerca prodotti metabolici
• PCR, sonde molecolari
Diagnostica di laboratorio delle infezioni
caratteristiche dei metodi
Quantità limite che il metodo evidenzia
• sensibilità sensibilità analitica
Accuratezza diagnostica (Predittività)
• sensibilità % veri positivi sensibilità diagnostica
• specificità % veri negativi
Diagnostica di laboratorio delle infezioni
indicazioni generali per la scelta Dx diretta/indiretta
incontroinfezionesegni/sintomimalattia
• Infezione endogena vs infezione esogena
• Infezione acuta
vs infezione cronica
• Infezione esogena, acuta
Diagnosi diretta
Fase precoce
++
Fase tardiva
+/-
D. indiretta
(-)
++
Diagnostica di laboratorio delle infezioni
Scelta del metodo in relazione a
informazioni che si richiedono
• antibiogramma
• valutazione precoce della infezione
disponibilità
• caratteristiche del laboratorio
– periferico, centrale, centro di riferimento
campione clinico
• prelievo invasivo/non invasivo
• da sede sterile o meno
agente
• virulenza e patogenicità
• coltivabilità
• disponibilità del metodo
c
o
s
t
i
I farmaci antibatterici
Antibiogramma
• saggio in vitro per guidare la terapia antibatterica
• il ceppo isolato viene saggiato contro un pannello
di antibiotici
– verranno non impiegati quello/quei farmaci verso i quali
si ha resistenza
– per gli altri si sceglierà quello più adatto
•
•
•
•
sede di infezione e farmacocinetica
condizioni del soggetto
costo
tossicità
Antibiogramma - M. diffusione in piastra
Sensibile
Multiresistente
Linee generali diagnostica di
laboratorio delle infezioni
Diagnosi diretta
Diagnosi indiretta
• Si ricerca l’agente
in questione
• Dalla risposta
immunitaria
dell’ospite si risale
all’incontro con
l’agente in
questione
Il fine è lo stesso
ma non sempre intercambiabili