Le cellule necessarie per il conteggio vengono

Principio del metodo
Le cellule necessarie per il conteggio vengono colorate/stabilizzate, quelle non desiderate vengono distrutte. Il prelievo di sangue venoso anticoagulato,
oppure di sangue capillare, viene miscelato con una soluzione in un recipiente apposito. Dopo aver lasciato riposare la miscela il tempo necessario, la
camera contaglobuli viene riempita.
Vantaggi e svantaggi sul conteggio di camera
Vantaggi
Svantaggi
Manegevolità
Precisione
- analisi semplice da eseguire in ambulatorio
- l’ unico apparecchio necessario è il microscopio
- nell’ effettuare il conteggio si possono manifestare molti errori e molte imprecisioni
- microscopia: il giudizio sugl’ elementi trovati nella camera (dipende dall’ impressione
dell’ osservatore) sottostà alle influenze soggettive dell’ osservatore
Uso
- veloce esaminazione del numero di cellule
- inadeguato per il conteggio di cellule in ambito patologico (p.e. leucemia, chemioterapia)
I risultati ottenuti con questo metodo possono variare del 10% - per controlli di decorso si consiglia dunque l’uso costante dello stesso metodo.
Usare sangue capillare solo in casi eccezionali, datosi che può aumentare la probabilità di errori. Se possibile usare sempre sangue venoso anticoagulato (EDTA).
Materiale
Materiale d’ uso
Provetta di reazione da 2,2 ml
Filtro di carta rotondo Æ 60mm
Pipette micro (capillari vetro), 10 μl + 50 μl*
Pipette micro (capillari vetro), 20 μl*
*incl. portapipetta
altro
-
No. Art.
confezione
M246
M247
M244
M245
da 200
da 100
da 250
da 250
Reattivi
Leucociti: Soluzione Türk
Eritrociti: Soluzione Dacie & Lewis
Trombociti: Soluzione Plaxan
No. Art.
Bottiglia
per test
M241
M242
M243
30 ml
30 ml
30 ml
75 (30)*
15
75 (30)*
*dipende dalla quantità di soluzione (a o b) vedi tabella sul retropagina (“Schema di pipettata e conteggio “)
I clienti del laboratorio team w ag hanno la possibilità di ordinare gli articoli con la caratteristica M direttamente attraverso il laboratorio -> vedi modulo richiesta di materiale labor team w ag
Pipettatrice monocanale da 100-1000μl per reattivi
Pipettatrice monocanale da 10-100 μl per sangue, alternativa: pipette micro (capillari vetro) 20 μl/ 50 μl/ 10 μl
Camera di conteggio Neubauer improved e vetrino copri-oggetto
Imbuto e filtro di carta per filtrare la soluzione
Metodica
EDTA
1
Filtrare soluzione colorante. 1 volta
a settimana oppure prima di uso.
2
Prelevare la soluzione colorata e
versarla nel recipiente apposito.
capillare
3
Prelevare con pipetta il sangue
EDTA, oppure con capillare
direttamente dal dito.
EDTA
capillare
4
Pulire il puntale o capillare con
batuffolo. Versare il sangue nella
soluzione e diluire. *
*Per vuotare e pulire il capillare, usare
l’ imboccatura che va appoggiata sopra
il capillare (dopo il prelievo di sangue).
Per tirare su ed emettere/eliminare di
nuovo la miscela, tenere chiusa l’
apertura con il dito indice.
EDTA
5
Chiudere il cappellino del recipiente
e capovolgere. Posare per 5 minute
sul miscelatore.
(Trombo.: aspettare 5 minuti, e poi
posare per 5 minuti sul miscelatore)
6
Agitare il recipiente.Prelevare ca.
20 μl di soluzione e riempire la
camera contaglobuli (non riempire
troppo e senza bolle d’aria)
7
Sedimentazione in camera cont.:
- leucociti/ eritrociti 2 min.
- trombociti 15 min.*
*camera umida
M098-I
Schema di pipettata e conteggio
Parametro
Reattivi
Diluzione
Leucociti
Türk
1:20
Eritrociti
Dacie +
Lewis
1:200
Trombociti
Plaxan
1:20
Variante
Sangue
in μl
Soluzione in μl
a)
20
380
b)
50
950
10
1990
a)
20
380
b)
50
950
Per campo di Cellule contate x Fattore
norma
Conteggio
normale
x 0.05
= G/l
x 50
lc/μl
4 quadrati esterni
normale
x 0.01
= T/l
x 10'000
ec/μl
4 linee (mezzo)
normale
x1
= G/l
x 1’000
tc/μl
4 linee (mezzo)
altri volumi di pipetta oppure di diluzione
Leucociti
„
Türk
1:100
20
1980
lc > 50.0 G/L
x 0.25
= G/l
x 250
lc/μl
4 quadrati esterni
„
1:10
20
180
lc < 4.0 G/L
x 0.025
= G/l
x 25
lc/μl
4 quadrati esterni
Eritrociti
Dacie &
Lewis
1:100
20
1980
ec < 3.0 T/L
x 0.005
= T/l
x 5'000
ec/μl
4 linee (mezzo)
Trombociti
Plaxan
1:100
20
1980
tc > 450 G/L
x5
= G/l
x 5’000
tc/μl
4 linee (mezzo)
„
1:10
20
180
tc < 100 G/L
x 0.5
= G/l
x 500
tc/μl
4 linee (mezzo)
„
Conteggio
Come?
Dove?
Fattori che influenzano
(riguardanti i pazienti)
il
conteggio
Conteggio di leucociti
Eritrociti in fase prematura contenenti dei semi
(Eritroblasti basofili) vengono scambiati
facilmente per lc , quindi contandoli portano a
valori alti, errati->conteggio alto.
Conteggio di eritrociti
Agglutinine a freddo: anticorpi specifici che
provocano l’agglutinazione degli eritrociti.
L’agglutinazione porta errori -> conteggio basso.
Leucociti – 4 quadrati
contare
Conteggio di trombociti
Aggregazione di trombociti: errori nel prelievo del
sangue; non viene miscelata bene la provetta
(EDTA), oppure raramente si verifica
un’intolleranza all’EDTA da parte del paziente.
L’aggregamento porta errori -> conteggio basso.
non contare
Eritrociti/ Trombociti 4 linee (80 quadratini)
Assicurarsi la qualità
- Svolgere ogni prova doppiamente
- La differenza tra le due prove dovrebbe essere < 10% . Calcolo vedi -> vedi grafica 1
- Partecipare regolarmente alla prova di qualità di laboratorio esterno (paragone diretto con altri ambulatori che usano il conteggio di camera)
- Rispettare numero minimo di cellule da contare (tenere bassa la variazione del coefficiente il più possibile) -> vedi grafica 2
( SA - SB ) x 100
SA
= distanza in %
- ec almeno 400 cellule (variazione del coefficiente 5%)
- lc almeno 100 cellule (variazione del coefficiente 10%)
- tc almeno 100 cellule (variazione del coefficiente 10%)
SA = Somma più alta / SB = Somma più bassa graf. 1
graf. 2
Fonti d’errore
Valori errati
Causa
tendenza á / â
á
Se il puntale/capillare non viene pulito si possono verificare errori per via
della quantità di sangue in più nella diluzione.
á
Assorbire il liquido in eccesso nella camera con un batuffolo o carta
provoca un dislivello nel rapporto soluzione-cellule.
á
Camera non sufficientemente detersa (resti di polvere, ecc. possono
sembrare Trombociti).
á
Il copri-ogetti non è applicato correttamente (mancanza dei cerchi di
Newton).
á
Il liquido nella camera inizia ad essiccare (i bordi del liquido si
riavvicinano).
á oppureâ
Prelevamento di sangue/soluzione con puntale/capillare non è stato
eseguito correttamente (bolle d’aria, ecc…).
á oppure â
Miscelazione incorretta della prova.
á oppure â
Il liquido nella camera di conteggio trabocca.
á oppure â
Fattore di calcolo incorretto.
Come evitare
Pulire il puntale/capillare con batuffolo. Attenzione a non aspirare sangue.
Riempire la camera in quantità giusta in modo pulito e veloce
Detergere la camera correttamente, ripassare con alcool 70% e asciugare
con Kleenex.
La profondità della camera non corrisponde al volume.
Appena si nota un ’essiccamento di liquido, è necessario riempire la
camera di nuovo.
Dopo la pipettata controllare bene che il puntale/capillare sia ben riempito.
Miscelare bene il recipiente.
Volume falso = valore falso
Vedi „schema di pipettata e calcolo“ sopra.