Ministero per le politiche agricole PROGETTO finalizzato Prodotti e tecnologie innovative su piante ornamentali con particolare riguardo alle aree del meridione SOTTOPROGETTO Innovazione colturale per la valorizzazione di specie adatte al clima mediterraneo (Germoplasma) Selezione, risanamento e valutazioni bio-agronomiche di specie di Citrus adatte per scopi ornamentali Aree agrumicole e vivaistiche • Messina: – Costa ionica e tirrenica • Bari • Palermo: – Giardini pubblici Genotipi selezionati •limone ‘Lunario’, limone ‘Lunario Compatto’ • Fortunella japonica, F. obovata, F. margarita, F. hindsii, kumquat Meiwa •clementine rifiorente •calamondin (7 cloni di diversa origine) •Citrus tardiva •Citrus myrtifolia a frutto piccolo •Citrus aurantium ‘Consolei’, Citrus aurantium ‘Fasciata’ •Limetta Taithi, Limetta Romana •Citrus sinensis Tarocco gianduia Osservazioni morfo-fisiologiche in situ • Fasi fenologiche della pianta • Caratteri morfo-fisiologici della pianta • Caratteri morfologici e qualitativi dei frutti D.M. 14 Aprile 1997 • Il materiale vegetale agrumicolo per la produzione di piante deve essere sano da virus, viroidi e micoplasmi, ritenuti patogeni di qualità. Punti critici Per i vivaisti: prelevare semi, marze e talee da piante madri sane. Per gli agricoltori: utilizzare piante garantite esenti da virus, viroidi e micoplasmi “certificate”. Diagnosi dei virus presenti in situ • Per via sierologica • Per via biologica • Per ibridazione molecolare Virus e virus simili presenti • Esocortite “CEVd” • Fam. Pospiviroidae, genere Pospiviroid, specie Citrus exocortis viroid • Cachessia-Xiloporosi “HSVd” • Fam. Pospiviroidae, genere Hostuviroid, specie Hop stunt viroid • Variegatura Infettiva “CIVV” • Fam. Bromoviridae, genere Ilarvirus, specie Citrus infections variegation virus • Tristeza “CTV” • Fam. Closteroviridae, genere Closterovirus, specie Citrus tristeza virus Germoplasma: trasferimento in exsitu • Propagazione per innesto dei cloni selezionati (escluso quello affetto da Tristeza) su semenzali di Arancio amaro nel campo sperimentale di Lascari Metodi di risanamento • Microinnesto validato per tutti i viroidi e parzialmente per i virus. • Microinnesto abbinato a termoterapia, validato per tutti i virus e non per i viroidi. • Embriogenesi somatica validata per tutti i virus e viroidi. Boccioli fiorali in preantesi di W. Navel Embriogenesi somatica • Prelevamento di fiori in preantesi. • Coltura in vitro di stili e stigmi su mezzo MS con aggiunta di BAP 3mg/L, incubati a 26-27°C e a un fotoperiodo di 16 ore. • Formazione di callo embriogenico. • Differenziamento di embrioni somatici. • Coltura in vitro di embrioni su mezzo MS. • Formazione di plantule. • Trasferimento dal vitro al vivo. Preparazione dell’espianto per l’embriogenesi somatica Coltura di stilo e stigma dopo 20 giorni Callo embriogenetico di Citrus lemon Embriogenesi somatica a 50 giorni dall’inizio della coltura Plantule di Citrus lemon provenienti da embriogenesi somatica Particolare della tecnica del mini innesto per acclimatare il materiale vegetale proveniente da embriogenesi somatica Piante bimembri ottenute con la tecnica del mini innesto Camera umida con base riscaldata Plantule provenienti dalla radicazione di talee di Citrus lemon Plantule provenienti dalla radicazione di talee di Citrus lemon in contenitore alveolato Plantule provenienti dalla radicazione di talee di Citrus lemon e di Poncirus trifoliata in Jiffy Plantule provenienti dalla radicazione di talee di Citrus aurantium in Jiffy Frutto di Navelina proveniente da pianta ottenuta da embriogenesi somatica Controllo stato sanitario e rispondenza varietale • Conservazione in serra con doppia rete a prova di insetto “screenhouse” delle piante rigenerate in vitro. • Controllo sanitario sierologico, biologico e per ibridazione molecolare. • Controllo per la rispondenza varietale. • Utilizzazione del genotipo risanato e possibile clonazione. Risultati • Identificazione di 22 genotipi autoctoni, di cui 17 riferiti al genere Citrus e 5 al genere Fortunella. • Costituzione del germoplasma di agrumi ornamentali nel campo sperimentale dell’Istituto di Ricerca per la Genetica degli Agrumi. • Risanamento di detti genotipi da virus e viroidi. • Messa a punto dei protocolli “mininnesto” e “ micropropagazione” utilizzati per il trasferimento dei Citrus dal vitro al vivo. • Probabile disponibilità di nuove varietà da inserire nei programmi nazionali di certificazione e da utilizzare nei programmi di miglioramento genetico. • Validazione, su nuovi genotipi, di un sistema di rigenerazione (embriogenesi somatica) utile per preparare materiale vegetale da conservare e/o scambiare con altri ricercatori. Programmi per il futuro •Avviare un progetto per la costituzione di fonti di approvvigionamento primarie di agrumi ornamentali •Avviare un nuovo progetto organico redatto e sviluppato da Istituzioni Pubbliche e da associazioni di vivaisti al fine di riordinare il comparto produttivo Valutazione Bio-agronomica • Valutazione della capacità rizogena di alcuni genotipi: Limone ”LCNR 12”e Calamondin “CNR P9” con diversi trattamenti ormonali: 0, 3, 6 g/l IBA e su diversi substrati di radicazione: Jiffy, torba bionda e terriccio a pH 5.5 • I migliori risultati sono stati ottenuti nelle tesi con 6 g/l di IBA e su Jiffy o su terriccio a pH 5.5 • Standard produttivo del vivaismo siciliano Piante di Citrus pronte per la commercializzazione Piante di Citrus pronte per la commercializzazione Frutto di Citrus digitata Il responsabile: dott. Fabio De Pasquale Collaboratori: dott. Francesco Carimi dott.ssa Anna Maria D’Onghia1 dott.ssa Stefania Fiore2 dott.ssa Giovanna Lombardo3 1 Istituto Agronomico Mediterraneo (Bari) 2 Dip. Colture Arboree (Palermo) 3 Dip. Scienze Botaniche (Palermo)