La Sclerosi Laterale Amiotrofica
Nuovi geni e nuovi meccanismi per capire e curare la malattia
Caterina Bendotti
Dipartimento Neuroscienze
Uni-ATENeO ® "Ivana Torretta” - Anno Accademico 2014-2015
Nerviano, 30 ott 1956
SLA
upper
Motoneuroni
motor neuron
primari
bulbar lower
Motoneuroni
motor neuron
bulbari
tongue
lingua
axon
bundles
Nervi
motori
Muscoli
arm
muscle
arti sup
Sclerosi Laterale Amiotrofica
(Malattia del motoneuroneMalattia di Lou Gehrig)
•Degenerazione selettiva dei
motoneuroni primari (corticali) e
secondari (bulbari e spinali)
ribMuscoli
muscles
intercostali
spinal lower
Motoneuroni
motor neuron
spinali
Normale
SLA
leg muscle
Muscoli
arti inf
Midollo spinale
MOTONEURONE
DNA
RNA
proteine
>1 metro
Muscolo
Schwann Cell
Interneuroni
SINTOMI DELLA MALATTIA
•Debolezza agli arti
•Crampi muscolari
•Fascicolazioni muscolari
•Ipotonia muscolare
•Atrofia muscolare
CONSEGUENZE DELLA MALATTIA
•perdita della normale capacità di
deglutizione (disfagia)
•perdita dell’articolazione della parola
(disartria)
•perdita del controllo dei muscoli scheletrici
(paralisi)
•perdita della capacità respiratoria
•morte ( ipossia, infezioni respiratorie)
Stefano Borgonovo
•non altera le funzioni cognitive, sensoriali,
sfinteriali e sessuali
EPIDEMIOLOGIA
INCIDENZA: 2-3 nuovi casi/100.000 ab./anno
PREVALENZA: 6-8 casi/100.000 ab. (circa 4000 casi in Italia)
Frequenza leggermente superiore nei maschi (rapporto M/F 1.4-2.5)
DISTRIBUZIONE: ubiquitaria e uniforme
ORIGINE: 10% familiare, 90% sporadica ( pressochè indistinguibili)
ETA’ MEDIA DI INSORGENZA: 60-70 anni
DURATA MEDIA: 2-5 anni (20% vive >5 anni e il 10% vive >10 anni)
TEMPO DI DIAGNOSI DAI PRIMI SINTOMI: 17 mesi
FATTORI DI RISCHIO PER LA SLA
DIFETTI GENETICI
•13 geni associati alla forma familiare (SOD1, Alsin, TDP43…..
•7-10 geni/loci associati alla forma sporadica (VEGF,NF…..
AMBIENTALI
•Esposizione a metalli (Pb,Al)
•Esposizione a tossine ambientali
-(cyanobacteria neurotoxin, erbicidi, pesticidi)
•Infezioni virali (HIV; HTLV-1)
STILE DI VITA
•Calcio professionistico ( rischio 8 volte maggiore)
•Intensa attività fisica
•Traumi ripetuti ( testa, muscoli degli arti)
•Fumo
TERAPIA
Riluzolo (Rilutek) prolunga la sopravvivenza di 3-6 mesi
GENETICA DELLA SLA
% delle mutazioni genetiche individuate dal 1992
Familiare
4%
4%
20%
40%
SLA
Familiare
10%
MATR3
30%
Sporadica
SLA
Sporadica
2%
7%
90%
(Modificato da Renton, et al. 2014)
Anno
84%
Tipo di
SLA
Cromosom
a
Gene
Proteina
Funzione fisiologica
ALS1
21q22.1
SOD1
Cu/Zn superoxide
dismutase
protegge dallo stress ossidativo
ALS2
2q33-35
ALS2
Alsin
regola il trasporto di vescicole
ALS4
9q34
SETX
senataxin
regola la funzione del DNA e RNA
ALS5
15q15-21
SPG11
spatacsin
regola il trasporto negli assoni
ALS6-FTD
16p11.2
FUS
Fused in Sarcoma
regola la funzione del DNA e RNA
ALS8
20p13.33
VAPB
VAMP-associated
protein
regola il trasporto di vescicole
ALS9
14q11
ANG
Angiogenin
regola il tRNA
ALS10-FTD
1q36
TARDBP
TAR-DNA binding
protein
regola la funzione del DNA e RNA
ALS11
6q21
FIG4
PI(3,5)P(2)5
phosphatase
regola il trasporto delle proteine
ALS12
10p15-p14
OPTN
Optineurin
regola la degradazione delle proteine
ALS13
Xp11.23
UBQLN2
Ubiquitin like
protein ubiquilin 2
regola la degradazione delle proteine
ALS14-FTD
9p21
C9ORF72
unknown
regola la degradazione delle proteine ?
ALS
5q31.2
MATR3
Matrin 3
regola la funzione del DNA e RNA
Il gene C9orf72 mutato nella SLA
n= 2-23 nei controlli , n=100-1000 nei pazienti SLA
Neurone sano
SLA: perdita di funzione
SLA: guadagno di funzione
SLA: guadagno di funzione
SL-TDP43 (sALS)
TDP43 Glial (sALS)
HI+SL-TDP43 (sALS)
LBI-SOD1 (fALS)
SL-OPTN (sALS)
SLA, una
proteinopatia?
HI-OPTN (sALS)
LBI-VCP (sALS)
UBQL2(fALS)
SL-FUS (fALS)
Modelli sperimentali per lo studio della SLA
Cellulari
Animali
Drosophila
Zebrafish embryo
Linee cellulari MN(NSC34)
C.Elegans
Topi geneticamente
modificati
Primary motor neurons
and co-coltures
Staminali umane pluripotenti indotte (iPSC)
Motoneuroni
differenziati
Fibroblasti
-SMAD Differenziamento
+RA
+SH
cellulare
Cellule staminali
pluripotenti indotte
cellulare
Oct4, Sox2,
Klf4 cMyc
I motoneuroni ottenuti da iPSC di pazienti
SLA con mutazione C9ORF72 sono più deboli
La SLA è una malattia multicellulare
Midollo spinale
Monociti
Microglia
T cells
MOTONEURONE
DNA
RNA
proteine
>1 metro
Muscolo
Schwann Cell
Interneuroni
Astrociti
Topo transgenico per la SOD1G93A: modello di SLA familiare
Cortex (layer V) Purkinje cells
Topo SODG93A
Ub-SLi
hSOD1
Subiculum
hSOD1
Motoneuron
Paziente SLA
Ub-SLi
hSOD1
hSOD1
PROGRESSIONE DELLA MALATTIA NEI TOPI SOD
Stadi PRE-SINTOMATICO
Età(m)
1
SINTOMATICO
3
3
4
2
Profilo
Clinico
Tremori
FINALE
5
Defict motorio Paralisi
Paresi
Perdita di peso
Caratteristiche
neuropatologiche
Perdita
motoneuronale (%)
8
44
54
Gliosi reattiva
+
++
+++
Inclusioni proteiche
+
++
Alterazioni
mitocondriali
+
++
Bendotti & Carri,Trends Mol.Med.,2004
+++
+++
++
6
compl.
EZIOLOGIA: la complessità della SLA
Malattia MULTIFATTORIALE
Eccitotossicità
Aggregazione proteica
Alterata degradazione proteica
Disifunzione mitocondriale
Omeostasi del Ca2+
Alterazioni trasporto assonale
Gliosi reattiva
DANNO MOTONEURONALE
Test preclinici nei topi transgenici SOD1 in 20 anni
Totale studi : 234
Effetto positivo sulla sopravvivenza:154 (66%)
Meccanismo d’azione :
•Antiossidante : 52
•Anti-eccitotossicità: 20
•Anti-aggregazione: 25
•Anti-infiammazione /immunomodulatori : 33
•Anti-apoptotici: 14
•Neurotrofici: 35
•Combinazione: 20
•Cellule staminali: 25
•Altri: 10
Variabilità di sopravvivenza nei pazienti SLA
Pupillo et al. Ann Neurol 75:287-297
Variabilità nella progressione della malattia in due topi
transegnici per SOD1
SOD1G93A
Ntg
X
♂ C57Ol
SOD1G93A
>15 generations
129Sv
129Sv
a
Pizzasegola et al. ALS 2009; Nardo, 2013, Marino 2014
La differenza nella progressione della malattia non
dipende dalla perdita dei motoneuroni ma dalla
denervazione dei muscoli
Spinal motor neuron
Neuromuscular junction
C57
129Sv
onset
Pre-symptomatic
Birth
Weeks
5
Pre-symptomatic
Birth
Weeks
5
16
10
10
symptomatic
20
24 Death
onset sympt
14
18 Death
Cheroni et al Human Mol. Gen. 2009
Bendotti et al. Progress Neurobiol,2012
Marino et al. Neurobiol Aging 2014
METHODS 1
Laser Capture Microdissection
Lobsiger et al. 2007
1
2
3
LUMBAR VENTRAL SPINAL CORD
(1000 MN each mouse)
RNA EXTRACTION AND
PURIFICATION
cDNA AMPLIFICATION
Hybridization to Gene
hybridizaton signal
Mouse Genome 430 2.0
detection
Affymetrix GenChip System By Gene Chip Scanner 300
Microarray Analysis
System Biology
Analysis
SYSTEM BIOLOGY ANALYSIS
C57G93A
129SvG93A
Malattia a progressione lenta
Malattia a progressione rapida
Conclusioni
La SLA è una malattia complessa che dipende nelle
forme familiari dalla mutazione di vari geni con funzioni
diverse
Sono implicati diversi meccanismi che coinvolgono non
solo il motoneurone ma anche le cellule che gli stanno
intorno nel sistema nervoso e nel sangue.
Data tale complessità occorre agire con terapie
farmacologiche ad azione multipla e non mediante
interventi su singoli meccanismi
