Documento IZS Lombardia e Emilia Romagna

ISTITUTO ZOOPROFILATTICO SPERIMENTALE
DELLA LOMBARDIA E DELL'EMILIA ROMAGNA
“BRUNO UBERTINI”
(ENTE SANITARIO DI DIRITTO PUBBLICO)
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BRESCIA
Via Bianchi, 9
25124 BRESCIA
(Italy)
Tel. + 39 030-2290289
Fax: +39 030-2290535
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INFLUENZA SUINA: ATTIVITA’ DI SORVEGLIANZA ALL’IZSLER
INTRODUZIONE
Il virus dell’influenza suina (SIV) è endemico nella popolazione suina mondiale e rappresenta, in
tale specie, una causa frequente e primaria di patologia respiratoria.
Attualmente sono endemici nella popolazione suina in Europa i tre sottotipi virali H1N1 (classico ed
“avian like”), H3N2 (c.d. “human like”) ed H1N2 (“human avian reassortant”). In Italia si assiste alla
contemporanea circolazione dei tre sottotipi virali sopraccitati con una minore prevalenza del sottotipo
H1N2.
Le infezioni da SIV si manifestano comunemente sotto forma di focolai caratterizzati
-
da un quadro respiratorio acuto a rapida insorgenza ed evoluzione
-
da sintomi clinici quali febbre, anoressia, perdita di peso, letargia, scolo nasale ed oculare,
tosse e dispnea.
L’influenza suina può sfociare in importanti perdite economiche che non si misurano in relazione alla
mortalità, generalmente molto bassa (<1%), ma piuttosto in base alla perdita di produttività in
termini di riduzione dell’incremento ponderale, perdita di peso e costo dei trattamenti sostenuti.
SORVEGLIANZA EPIDEMIOLOGICA
Presso l’IZSLER è da anni attuato in modo sistematico un programma di screening per il monitoraggio
della presenza-assenza di ceppi SIV circolanti e delle loro caratteristiche antigeniche e genetiche, che
copre territorialmente la maggior parte delle aree nazionali con allevamento intensivo del suino.
I campioni pervenuti al laboratorio sono principalmente organi, quali polmoni e annessi linfonodi, con
lesioni anatomo-patologiche riferibili a patologie respiratorie, e tamponi nasali di suini con
sintomatologia respiratoria acuta.
Metodi utilizzati
Lo screening iniziale è effettuato tramite real-time RT-PCR impiegando primer specifici per amplificare
una porzione del gene M1, gene conservato degli Orthomyxovirus tipo A (Spackman et al., 2002). I
campioni risultati positivi alla PCR sono inoculati in uova embrionate SPF (UEP) di 9-11 giorni d’età
per via intra-allantoidea e su monostrato di cellule Madin Darby Canine Kidney (MDCK) in presenza di
tripsina, per l’isolamento e la successiva tipizzazione del virus. Il liquido allantoideo ed il surnatante
delle cellule sono analizzati sia con una metodica MAb-based antigen detection ELISA, che utilizza un
anticorpo monoclonale (MAb) specifico per la nucleoproteina A (Siebinga et al., 1988) sia con il test di
emoagglutinazione (HA).
La
sottotipizzazione
dei
virus
influenzali
isolati
è
determinata
attraverso
inibizione
dell’emoagglutinazione (HI) con antisieri sperimentali di pollo e mediante quattro differenti RT-PCR che
1
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utilizzano 8 primer specifici per amplificare porzioni dei geni codificanti per l’H3, l’H1, l’N1 e l’N2
(Chiapponi et al., 2003).
Risultati
Nel corso degli anni 2005-2008 sono stati isolati un totale di 219 ceppi di SIV, appartenenti ai tre
sottotipi principali come di seguito riportato
Sottotipo
H1N1
H3N2
H1N2
Totale
2005
30
24
13
67
2006
26
19
15
60
2007
14
15
9
38
2008
26
20
8
54
Totale
96
78
45
219
La provenienza dei ceppi di SIV divisi per origine geografica (Regione) è la seguente:
Regione
N. ceppi
Lombardia
148
Emilia Romagna
27
Veneto
16
Friuli Venezia Giulia
12
Piemonte
16
Umbria
1
Marche
1
Basilicata
1
Totale
219
La caratterizzazione genetica dei virus isolati nel corso del periodo considerato, nonché dei ceppi più
rappresentativi isolati a partire dal 1999, è stata eseguita tramite il sequenziamento parziale dei geni
HA e NA. Le sequenze sono analizzate in BLAST ed allineate utilizzando il metodo CLUSTAL W.
L’analisi filogenetica viene eseguita mediante il software MEGA 4, con il metodo della massima
parsimonia e comprende anche altri virus influenzali suini, umani ed aviari, le cui sequenze sono
presenti in GeneBank.
ALBERO HA
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sw/It/242578/04 H1N1
sw/It/53949/04 H1N1
sw/It/65296/04 H1N1
0
55
66568-7 04 H1 totale
sw/It/125746/05 H1N1
6
188539 H1HA1
44795 H1
8
80114 H1
0
sw/It/37460/07 H1N1
23 sw/It/290851/04 H1N1
sw/It/204931-2/05 H1N1
85 sw/It/45894-2/07 H1N1
80
45894-2 07 HA1
0
sw/It/19154/06 H1N1
39787 H1 (1469)
22
sw/It/39787/08 H1N1
46
39787 08 HA1
308869-5.seq
308869-7.seq
61
308869-6.seq
204931-2 05 HA1
0
58 sw/It/43145/08 H1N1
98
43145 H1 (1469)
6
43145 H1
196875 H1HA1
126348 5
78
126348 8
12
186798 H1HA1
126348 4
64
17
126348 7
0
138842
2929-2 05
19 270132-3-HAH1
12 2929-6 05
233608-34 04 HA1
44
126348 3 (1998)
sw/Sp/53207/04 H1N1
0
lineage euro-asiatico
256764
3
207871
10169 01 HA1
19
sw/It/10169/01 H1N1
sw/It/258654/04 H1N1
59
sw/It/110093/02 H1N1
36
sw/It/227234/03 H1N1
34
sw/It/90315/04 H1N1
47
0
sw/It/4443/00 H1N1
sw/IV/1455/99 H1N1
0
sw/Sp/51915/03 H1N1
99
72024-1 H1
23
73567 H1
37
308869-3.seq
308869-4.seq
99
36
14641.seq
2
67
94608 1-P1.seq
126348 1
73
sw/It/4320/02 H1N1
sw/It/207828/03 H1N1
97 68
4230 02 HA1
207828 02 HA1
sw/It/1302/06 H1N1
99
1302 06 HA1
19
308869-2.seq
308869-1.seq
97
3
32 11301.seq
sw/It/9212/99 H1N1
sw/It/1511/98 H1N1
45
sw/It/9328/98 H1N1
90
99 9328 98 HA1
34
sw/It/1390-5/95 H1N1
60
sw/It/1589/98 H1N1
sw/Ger/8533/91
H1N1
13
99
sw/UK/195852/92 H1N1
sw/CA/1482/99 H1N1
sw/Fin/2899/82 H1N1
86
sw/Fr/4203/85 H1N1
EPI176470 | HA | A/California/04/2009 lineage americano
sw/Iowa/15/30 H1N1
hu/Memphis/7/1980 H1N1 H1N2
99
H1N2 Italiani
94
32
6
56
20
3
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ALBERO MP
99
13
4
1
3
54
10
30
78
75
35
30
66568-46 04 M
92726-46 04 M
Sw CA 800 00 H1N2
Sw IV 1455 99 H1N1
52401-35 04 M
253025 03 M
75
73
1484 02 M
7680 01 M
2608 01 M
261517-3 04 M
Sw It 1081 00 H1N2
Sw It 2064 99 H1N2
4443 00 M
10169 01 M
4230 02 M
89
207828 02 M
96
66568-26 04 M
EPI176471 | MP | A/California/04/2009
63
48
6
227234 03 M
5433 01 M
110093 02 M
52244 02 M
52401-15 04 M
261517-58 04 M
66568-7 04 M
233608-34 04 M
Sw CA 1482 99 H1N1
62 98 M
Sw CA 790 97 H1N2
Sw It 1521 98 H1N2
44
Sw Ger 8533 91 H1N1
8
91
Sw/It/1589/98 H1N1
9212 99 M
87
568 99 M
15
6189 99 M
67
71
600 99 M
56
9328 98 M
3592 99 M
82
9264 98 M
40
Sw Scot 410440 94 H1N2
Sw/Fin/2899/82 H1N1
35
36
99
Sw/Iowa/15/30 H1N1
Memphis/7/1980 H1N1
10
Conclusioni
Sulla base di tali risultati si può affermare i tre ceppi SIV virali “classici” (H1N1, H3N2 ed H1N2)
circolano attivamente negli allevamenti suini nazionali.
La circolazione virale, in campioni analizzati provenivano da suini con forme respiratorie in generale
non sempre specifiche di influenza, è relativamente bassa e costante negli anni. Da sottolineare che
molti di questi campioni sono risultati positivi anche ad altri agenti eziologici responsabili di
sintomatologia respiratoria quali PRRS, PCV2, Mycoplasma hyopneumoniae ed Actinobacillus
pleuropneumoniae.
Il monitoraggio virologico dei virus influenzali negli allevamenti suini ha avuto ed avrà una notevole
importanza sia per l’interesse che l’argomento riveste nell’ambito della sanità animale sia in quello
della sanità pubblica. La necessità di un continuo monitoraggio sierologico e virologico sia negli
allevamenti suini sia in quelli avicoli, è necessario per meglio comprendere i meccanismi di
trasmissione interspecie, per valutare attivamente la diffusione e la circolazione dei ceppi virali
influenzali e per monitorare l’eventuale comparsa di ceppi riassortanti e/o di nuovi sottotipi.
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Bibliografia citata
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Suarez DL. Development of a real-time reverse transcriptase PCR assay for type A influenza
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Brescia, 27 Aprile 2009
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Letteratura di riferimento
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Genetic characterization of H1N1 and H1N2 swine influenza virus isolated in Italy in 1998-2007, abstract p.
99 in Second annual meeting EPIZONE, 4-6 June 2008; http://www.epizone.net
MORENO MARTIN A, BARBIERI I, SOZZI E, LUPPI A, CANELLI E, FONI E, ALBORALI L, CORDIOLI P
th
Genetic characterization of swine influenza H3N2 subtype in Italy. Abstract P1025, Proceedings of 20
international pig veterinary society congree, 22-26 june 2008, Durban, South Africa
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