Citoarchitettura e corredo neurochimico dell`ippocampo di cane

DOTTORATO DI RICERCA - XVII CICLO
Dott.ssa Anna Gardini - Tutor: Dott. Cristiano Bombardi
CITOARCHITETTURA E CORREDO NEUROCHIMICO DELL’IPPOCAMPO DI CANE
Calbindina D-28k
Scopo della ricerca:
Studiare la citoarchitettura dell’ippocampo di cane , la distribuzione della popolazione
neuronale e l’espressione di alcune proteine leganti il calcio (calbindina D-28k,
parvalbumina e calretinina) a livello di giro dentato (GD) e nelle aree dell’ippocampo
propriamente detto (CA3, CA2 e CA1).
Osservare eventuali modificazioni correlate all’età nell’espressione delle suddette proteine.
CA3
GD
Materiali e metodi:
- campioni di ippocampo di sei cani (deceduti/soppressi per problemi non neurologici)
- tre giovani (< 3 anni) e tre anziani (>12 anni)
- tecniche istologiche (colorazione con tionina)
- reazioni di immunoperossidasi mediante anticorpi primari monoclonali diretti verso:
parvalbumina (PV), calbindina-D28k (CB-D28k) e calretinina (CR).
2.5X
5X
CA2
CA1
Risultati:
5X
CALBINDINA D-28k
Giro dentato:
-Plexiform layer: neuroni CB-ir multipolari con dendriti che si estendono allo str. dei granuli
e raramente allo str. molecolare.
-Granule cell layer: immunoraettività alla CB nelle cellule dei granuli e a livello di mossy
fiber (assoni delle cellule dei granuli che proiettano all’area CA3 dell’ippocampo p.d.).
Ippocampo p.d. (area CA3, CA2 e CA1):
-Stratum oriens: neuroni CB-ir multipolari o bipolari.
-Stratum pyramidale: Differenza nelle aree CA3-CA1 riguardo ai neuroni piramidali:
Area CA3: neuroni piramidali CB-ir assenti;
Area CA2: neuroni piramidali CB-ir, soprattutto verso lo str. oriens;
Area CA1: neuroni piramidali CB-ir disposti su due file.
Alcuni cellule non-piramidali (principalmente neuroni multipolari) presenti in tutte le aree
dell’ippocampo p.d. (CA3-CA1) con dendriti diretti in tutte le direzioni.
-Stratum radiatum: pochi neuroni fusiformi.
-Stratum lacunosum-moleculare: rari neuroni fusiformi.
PARVALBUMINA
Giro dentato:
-Plexiform layer: neuroni PV-ir multipolari e alcune cellule ovoidali.
-Granule cell layer: occasionali cellule ovoidali o fusiformi. Immunreattività assente nelle cellule
dei granuli.
-Molecular layer: neuroni fusiformi in prossimità dello str. dei granuli e cellule bipolari
al confine con lo str. lac-molecolare.
10X
Parvalbumina
GD
GD
2.5X
10X
Hu
A
β2
A
CA1
CA1
SMP
B
SMP
2.5X
β2
B
TH
10X
Calretinina
Ippocampo p.d. (area CA3, CA2 e CA1):
-Stratum oriens: neuroni PV-ir fusiformi con lunghi dendriti paralleli alla superficie piale.
-Stratum pyramidale: neuroni PV-ir multipolari o bitufted con dendriti che si estendono
gli altri strati dell’ippocampo p.d.; IR assente nei neuroni piramidali. Nessuna differenza
tra le aree CA3-CA1.
-Stratum radiatum: alcuni neuroni fusiformi, piramidali e piramidali invertiti con dendriti
diretti sia verso lo str. pyramidale sia verso lo str. lac-moleculare.
-Stratum lacunosum-moleculare: piccoli neuroni fusiformi con il loro asse maggiore
parallelo alle cellule dello str. pyramidale.
GD
GD
SMP
SMP
5X
2.5X
CALRETININA
Giro dentato:
-Granule cell layer: assenza di cellule CR-ir.
-Molecular layer: pochi neuroni CR-ir multipolari e ovoidali; neuropilo CR-ir.
CA1
Ippocampo p.d. (area CA3, CA2 e CA1):
Pochi neuroni CR-ir bipolari, bitufted o multipolari osservati in tutti gli strati dell’ippocampo p.d.
10X
Discussione
Immunoreattività verso la PV assente nelle cellule dei granuli (GD) e nei neuroni piramidali dell’ippocampo p.d.
Presenza di interneuroni PV-ir sia a livello di GD che di ippocampo p.d.
Immunoreattività verso la CB-D28k osservata nelle cellule dei granuli e nei neuroni piramidali delle aree CA 1 e CA2, assente nell’area CA3.
Presenza di interneuroni CB-D28k a livello di tutti gli strati del GD e dell’ dell’ippocampo p.d.
Immunoreattività verso la CR presente a livello di GD (neuropilo marcatamente CR-ir nello str. molecolare) e di ippocampo p.d., con rilevante network neuronale
nello str. lacunosum moleculare.