Risultati della Ricerca Protocollo di valutazione della

Risultati della Ricerca
Titolo
Protocollo di valutazione della sensibilità agli antibiotici di batteri lattici di
interesse industriale.
Descrizione estesa del risultato
Il protocollo è stato messo a punto nella struttura del CRA-FLC di Lodi. Per lo studio della
sensibilità agli antibiotici, sono stati analizzati complessivamente ceppi di batteri appartenenti alle
specie L. rhamnosus L. fermentum, L. helveticus, L. reuteri, L. delbrueckii sp. lactis, Lactococcus
lactis, Lactobacillus paracasei, L. delbrueckii sp. bulgaricus, secondo le linee guida dell’EFSA.
Queste linee guida prevedono per i batteri lattici la valutazione della Minima Concentrazione
Inibente (MIC) di 9 diversi antibiotici (ampicillina, vancomicina, gentamicina, kanamicina,
streptomicina, eritromicina, clindamicina, tetraciclina, cloramfenicolo) secondo un protocollo
standardizzato
e
riconosciuto
a
livello
internazionale.
Il gruppo FEEDAP dell’EFSA, al fine di distinguere i livelli di resistenza per le varie specie di
batteri lattici, ha definito dei valori soglia di riferimento (cut-off) sulla base della distribuzione dei
valori medi di MIC per batteri appartenenti ad una determinata specie o genere microbico. I ceppi
vengono classificati come sensibili o resistenti agli antibiotici rispetto al cut-off stabilito per ogni
specie
considerata
(espresso
in
mg/L
di
antibiotico):
• ceppi sensibili (S): quando la MIC di uno specifico antibiotico è uguale o inferiore al valore di
cut-off;
• ceppi resistenti (R): quando la MIC di uno specifico antibiotico è maggiore del valore di cut-off.
Sui ceppi che presentano valori di MIC per alcuni antibiotici superiori ai valori di cut-off indicati
dall’EFSA si effettua la ricerca sia di alcuni geni di antibiotico resistenza sia quella relativa
all'elemento trasponibile, tramite tecnica PCR. La contemporanea assenza di geni specifici di
antibiotico resistenza (AR) e di uno dei possibili elementi trasponibili coinvolti, consentono di
ascrivere con maggior probabilità l’AR rilevata ad una resistenza intrinseca per possibile mutazione
dei
geni
che
codificano
per
“il
bersaglio”
cellulare
dell’antibiotico.
Per i ceppi che risultano positivi ad uno o a più geni di resistenza ascrivibili ai vari antibiotici
testati, si evidenzia una potenziale resistenza acquisita. L’assenza del gene int, può confermare che
questi ceppi non contengono uno degli elementi trasponibili maggiormente coinvolti nello scambio
di geni fra ospiti diversi, ma non consente comunque di escludere la possibile presenza di altri
sistemi di trasferimento di geni. Anche in caso di presenza di geni potenzialmente trasmissibili, sarà
comunque necessario dimostrarne la trasferibilità, ad esempio con test di coniugazione. In
particolare, la trasmissibilità di un gene dovrebbe essere dimostrata con test in vivo, ma studi di
questo
tipo
non
sono
ancora
reperibili
in
letteratura.
Il protocollo è utile a laboratori, enti di ricerca che sono interessati a valutare la sicurezza di ceppi
batterici isolati da matrici alimentari o che saranno utilizzati come fermenti per la produzione di
alimenti fermentati. Il risultato è prontamente trasferibile all'utilizzatore finale, purchè questo
possieda delle competenze microbiologiche e di biologia molecolare e abbia a disposizione un
laboratorio contenente le attrezzature rilevanti per queste due aree di ricerca. Per eventuali
chiarimenti sul protocollo descritto vedere la pubblicazione inserita o contattare il referente della
scheda
D.ssa
Zago.
Responsabile del risultato
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Consiglio per la Ricerca e la Sperimentazione in Agricoltura
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Miriam Zago
Via Antonio Lombardo, 11, 26900 – LODI ()
Tel.: +39-0371-45011
E-mail: [email protected]
Anno
2014
Classificazione del risultato
Comparto produttivo: Alimenti/bevande dell’industria alimentare (gelati, biscotti, birra, ecc.)
ALIMENTI/BEVANDE DELL'INDUSTRIA ALIMENTARE
Particolari categorie PRODOTTI TIPICI/TRADIZIONALI
di prodotti/comparti Prodotti tipici/tradizionali
produttivi:
Categorie di ambiti di TEMATICHE TECNICHE SU SPECIFICHE FASI DELLE FILIERE
ricerca:
PRODUTTIVE
Qualità dei prodotti
VALUTAZIONE PROPRIETÀ NUTRIZIONALI, QUALITATIVE E
SALUTISTICHE
Parole chiave
sicurezza alimentare, antibiotici, microbiologia
Trasferibilità del risultato
Si, trasferibilità immediata
Natura del risultato
di prodotto
Aree interessate
Aree a clima continentale
Aree a clima mediterraneo
Impatto dal punto di vista tecnico
miglioramento qualità e salubrità dei prodotti
Impatto dal punto di vista socioeconomico
valorizzazione prodotti tipici/tradizionali locali
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Consiglio per la Ricerca e la Sperimentazione in Agricoltura
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Impatto dal punto di vista ambientale
salute consumatori
altro
Presupposti di contesto
impianti/attrezzatura/laboratori specifici
Soggetti istituzionali da coinvolgere
Consorzi di produttori
Enti di ricerca
Potenziali utilizzatori
Laboratori pubblici per la qualità alimentare
Industrie di settore
Industrie di trasformazione
Enti di ricerca
Modalità di diffusione
Attraverso convenzioni operative per specifiche attività
Progetti comuni con consorzi di tutela
Progetti comuni con industrie di trasformazione
Pubblicazioni
Maietti, L.; Bonvini, B.; Huys, G.; Giraffa, G. (2007): Incidence of antibiotic resistance and
virulence determinants among Enterococcus italicus isolates from dairy products, Vol. 30 p.
509-517
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Progetto / Ricerca di riferimento
Titolo del progetto
Caratterizzazione di batteri lattici della ceppoteca CSL, studio della lisogenia e analisi di
antibiotico-resistenza su ceppi di interesse industriale - LISOCSL
Coordinatore del progetto
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Consiglio per la Ricerca e la Sperimentazione in Agricoltura
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Miriam Zago
Via Antonio Lombardo, 11, 26900 – LODI ()
Tel.: +39-0371-45011
E-mail: [email protected]
Ente finanziatore
Centro Sperimentale del Latte S.p.A.
Breve descrizione del progetto e dei suoi obiettivi
Caratterizzare ceppi di batteri lattici appartenenti alle specie Lactococcus della ceppoteca di CSL
mediante tecnica molecolare di genotipizzazione e valutazione dello stato di lisogenia tramite
metodica microbiologica e molecolare. Caratterizzare fenotipicamente gli eventuali fagi temperati
presenti tramite profilo di spettro d’ospite e purificazione dei fagi temperati in grado di replicare su
ceppo ospite.
Valutare la sensibilità agli antibiotici di 7-8 ceppi complessivi di batteri lattici determinando la
Minima Concentrazione Inibente (MIC) di 9 antibiotici.
U.O. / Partner coinvolti nella realizzazione del risultato
Non sono presenti Unità operative collegate al risultato
Referenti istituzionali già coinvolti nella ricerca
Non sono presenti Referenti già coinvolti per il risultato
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Consiglio per la Ricerca e la Sperimentazione in Agricoltura
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