Modulo di Genetica Batterica e Biochimica

Dipartimento diMedicina
Molecolare eTraslazionale
Modulo di Genetica Batterica e Biochimica: TRASFORMAZIONE
BATTERICA con il PLASMIDE pGLO e PURIFICAZIONE della PROTEINA
GFP (Green Fluorescent Protein)
La trasformazione batterica è un processo attraverso il quale i batteri possono acquisire
materiale genetico direttamente dall’ambiente extracellulare. Si tratta di un fenomeno che si
manifesta in natura in alcune specie di batteri per poter acquisire un vantaggio
nell’adattamento all’ambiente (adattamento evolutivo). Questa caratteristica ha consentito lo
sviluppo di tecniche di biologia molecolare basate sulla trasformazione per introdurre nei
batteri piccole sequenze di DNA chiamate plasmidi contenenti un gene d’interesse. Nella nostra
esperienza di laboratorio trasformeremo dei batteri (Escherichia coli) con il plasmide pGLO
contenente il gene che codifica per la proteina fluorescente GFP (Green Fluorescent Protein),
presente in natura nella medusa bioluminescente Aequorea victoria. Saremo inoltre in grado di
indurre l’espressione genica della proteina GFP nei batteri ottenendo quindi colonie di
Escherichia coli fluorescenti e, con tecniche cromatografiche, purificheremo la proteina stessa a
partire dal lisato dei batteri esprimenti GFP. Le caratteristiche di bioluminescenza della proteina
in esame ci permetteranno di seguire la sua presenza semplicemente utilizzando un lampada a
luce ultravioletta.
Durata del modulo: giorno 1: circa 4 ore (mattino); giorno 2: circa 2-3 ore (pomeriggio)
Costo: € 10 a studente.
Numero massimo di studenti per incontro: 36
Tipo di preparazione consigliata: struttura e funzione del DNA, struttura delle proteine,
regolazione dell’espressione genica, comportamento delle sostanze idrofobe e idrofile,
interazioni intermolecolari.
Attività riservata a studenti iscritti alle classi quarta e quinta superiore