IMMUNOFLUORESCENZA
INDIRETTA
QUADRI FLUOROSCOPICI NELLE
MALATTIE AUTOIMMUNI D’
D’ORGANO
Brunetta Porcelli
Dipartimento di Medicina Interna,
Scienze EndocrinoEndocrino-Metaboliche e
Biochimica
Università
Università degli Studi di Siena
Rappresenta a tutt’oggi un metodo analitico
di fondamentale importanza nella ricerca di
autoanticorpi correlati alla presenza di
patologie autoimmuni d’ organo
Bassano del Grappa, 7 ottobre 2009
PRINCIPALI SUBSTRATI
UTILIZZATI PER GLI
AUTOANTICORPI ORGANO
SPECIFICI
TRIPLO TESSUTO
(FEGATO, RENE, STOMACO)
Triplo tessuto (fegato, rene, stomaco)
LKS: LIVERLIVER-KIDNEYKIDNEY-STOMACH
Terzo inferiore di esofago scimmia
Altri substrati
ISTOLOGIA DEL FEGATO…
FEGATO…..
ISTOLOGIA DEL RENE…
RENE…..
Lobulo epatico
Dotticino biliare
Fessura di
Kiernan
Vena
Arteriola
Dotticino biliare
E REAZIONE FLUORESCENTE
Dotticino biliare
Vena
Vena centrale del lobulo
Trabecole
Remak
di
E REAZIONE FLUORESCENTE
ISTOLOGIA DELLO STOMACO…
STOMACO…..
E REAZIONE FLUORESCENTE
ANTICORPI ANTI-MUSCOLO LISCIO
(ASMA)
Autoantigeni:
actina,
tubulina,
vimentina,
desmina, citocheratine.
Si riscontrano nel 7085% delle EAI 1.
La positività ASMA
dovuta alla presenza di
anticorpi diretti verso
la forma filamentosa
dell’actina
(F-actina)
sembra essere quella
maggiormente specifica
per EAI.
ASMA-V
ASMA G
Pattern di tipo glomerulare
Stomaco
Rene
Stomaco
Rene
ASMA T
Stomaco
Rene
ANTICORPI ANTI-LKM
Autoantigeni:
citocromo
P4502D6/P4502C9/UDPglucorosiltransferasi.
Sono diretti contro i
microsomi del fegato e del
rene. In base all’antigene
bersaglio sono classificati in
tre tipi chiamati antiLKM1, 2 e 3.
Gli anti-LKM1, associati
nel 90% dei casi alla EAI 2,
ne
rappresentano
il
marcatore caratteristico.
Fegato: fluorescenza
intensa, fine e omogenea
degli epatociti
Stomaco: le cellule parietali
gastriche risultano negative
Rene:
fluorescenza non
uniforme
ma
marcata solo a
livello dei tubuli
prossimali
ANTICORPI ANTI-CITOSOL
EPATICO TIPO 1 (LC-1)
Autoantigene:
formiminotransferasiciclodeaminasi.
Riscontrati in circa il
50% dei pazienti con
EAI-2.
Nella maggior parte dei
casi sono in genere
associati a LKM1 che
nella maggior parte dei
casi copre la positività
all’ IFI dell’LC-1.
Fegato:
fluorescenza più
intensa nella zona
periportale e meno
intensa nella zona
centro-lobulare.
Il rene e lo
stomaco
sono
negativi.
A
Fegato
B
ANTICORPI ANTILKM E ANTI-LC1
Gli anticorpi antiLKM mostrano una
fluorescenza intensa,
fine e omogenea
degli epatociti (A).
Gli anticorpi antiLC1 mostrano una
fluorescenza intensa
nella
zona
periportale (B).
La zona centrolobulare
è
scarsamente o per
nulla colorata.
Rene
ANTICORPI ANTI-MITOCONDRIO
(AMA)
Autoantigeni: localizzati sulla
membrana
mitocondriale,
classificati in diversi tipi
indicati con le sigle da M1 a
M9. Solo gli anticorpi antiM2, anti-M4, anti-M8 e antiM9 sono specifici per PBC e
tra questi solo gli anti-M2
hanno rilevanza diagnostica
essendo presenti ad alto titolo
in quasi tutti i pazienti.
Rene:
fluorescenza
citoplasmatica di aspetto
granulare
interessante
tutte le cellule tubulari
ma più intensa a livello
dell’epitelio dei tubuli
renali distali (più piccoli e
di forma regolare rispetto
a quelli prossimali).
Stomaco: fluorescenza
diffusa interessante sia le
cellule parietali che le
principali
ANTICORPI ANTI MITOCONDRI E ANTI- LKM
Fegato:
Fluorescenza di
aspetto granulare
AMA: fluorescenza citoplasmatica
di aspetto granulare interessante
tutte le cellule tubulari ma più
intensa a livello dell’epitelio dei
tubuli renali distali (A).
LKM: fluorescenza non uniforme
ma marcata solo a livello dei tubuli
prossimali (B).
Solo gli AMA sono in grado di
colorare anche le cellule parietali e
principali dello stomaco. (A).
ANTICORPI ANTI-CELLULE
PARIETALI GASTRICHE (PCA)
Stomaco:
omogenea e
diffusa
colorazione del
citoplasma delle
cellule parietali.
Autoantigene: H+/K+-ATPasi
gastrica
presente
sulla
membrana
delle
cellule
parietali gastriche.
La presenza di PCA è
altamente
indicativa
di
anemia perniciosa.
Sono inoltre rilevati in circa il
90% dei pazienti affetti da
gastrite cronica autoimmune
ANTICORPI ANTI-MITOCONDRI E ANTI-PCA
I nuclei e le cellule
principali sono
completamente
negativi.
Il rene il fegato
sono negativi.
TERZO INFERIORE DI
ESOFAGO SCIMMIA
ISTOLOGIA DELL’
DELL’ESOFAGO
AMA: fluorescenza diffusa interessante
sia le cellule parietali che le principali
PCA: omogenea e diffusa
colorazione del citoplasma
solo delle cellule parietali
ANTICORPI ANTI-ENDOMISIO
(EmA)
Autoantigene:
l’enzima
transglutaminasi.
Sono
anticorpi
estremamente
sensibili e specifici
(95-100%) per la
malattia celiaca.
Pattern reticolare a nido d’ape identificabile nella
muscolaris mucosae. Ab: IgA
ALTRI SUBSTRATI
ANTICORPI ANTI-CELLULE
INSULARI PANCREATICHE
(ICA)
Autoantigeni:
Pancreas
(anticorpi
anti-cellule
insulari
pancreatiche, ICA)
Surrene (anticorpi anti-corticale del surrene, ACA)
Ipofisi di scimmia o di babbuino (anticorpi antiipofisi, APA)
Esofago e vescica di scimmia (anticorpi anti-cute)
Nervo di scimmia (anticorpi anti-MAG)
Cellule Hep-2 (AMA, anti-gp210, anti-Sp100, anticentromero, anti-F actina )
Cellule intestinali di ratto/fibroblasti (anti-F-actina)
VSM47 (F-actina)
HEK-239 (anticorpi anti-acquaporina-4, AQP-4)
Neutrofili (P-ANCA)
Substrato:
Pancreas
scimmia
di
Ab:
Ab: IgAGM
Pattern:
Fluorescenza
da omogenea a
granulare nel
citoplasma di
tutte le cellule
delle isole di
Langerhans.
Substrato: Surrene di scimmia
Zona Reticolata
Ab:
Ab: IgAGM
Zona
Fascicolata
Pattern:
Fluorescenza da granulare
a omogenea nel citoplasma
delle cellule di tutti e tre
gli strati della corteccia del
surrene
Zona Midollare
Zona
Glomerulare
componenti
citoplasmatiche
delle
isole
di
Langerhans.
Presenti nell’
nell’80%
dei pazienti con
diabete di tipo 1
Marker
predittivo.
Alto titolo =
Elevato rischio di
malattia
ANTICORPI ANTICORTICALE DEL
SURRENE (ACA)
Autoantigene
principale:
21idrossilasi (21-OH).
Specificità elevata
per la diagnosi di
MA autoimmune.
Marker predittivo.
ANTICORPI ANTIGLICORPOTEINA MIELINICA
(ANTI-MAG)
Antigeni: proteine
della
membrana
della
guaina
mielinica.
Sono
associati
prevalentemente a
neuropatie
demielinizzanti,
croniche, lentamente
progressive.
ANTICORPI ANTI-F ACTINA
Substrato:
Nervo Suralis di scimmia
Pattern:
Fluorescenza striata
Substrato:cellule
embrionali di aorta
di ratto VSM47
Ab:
Ab: IgG
ASMA rappresentano un gruppo
eterogeneo di anticorpi che possono
riconoscere diversi antigeni nel
citoscheletro:
actina,
tubulina,
vimentina, desmina, citocheratine.
La positività ASMA dovuta alla
presenza di anticorpi diretti verso
la forma filamentosa dell’actina (Factina) sembra essere quella
maggiormente specifica per EAI.
