profiling leukemia

DMK02-06 V08 Juillet 2008
Prodotto validato dal programma
Europe Against Cancer
AML1-ETO e CBFβ-MYH11 tipo A FusionQuant® Kit
PROFILING LEUKEMIA
Kit molecolari unici sviluppati per standardizzare e quantificare in maniera accurata
i trascritti di fusione.
AML1-ETO e CBFβ-MYH11 tipo A
La traslocazione reciproca t(8;21)(q22q22) e
l’inversione pericentrica del cromosoma 16, inv
(16)(p13q22) sono tra le più frequenti lesioni
genomiche nella leucemia mieloide acuta (AML).
I corrispondenti trascritti leucemici dei geni di
fusione AML1-ETO e CBFβ– MYH11, sono rilevati
rispettivamente nel 2-12% e nell’1-5% di AML e
sono associati a prognosi favorevole. Questi due
specifici trascritti di fusione possono essere rilevati
per la diagnosi attraverso metodi basati sulla
reazione a catena della polimerasi (PCR) e possono
essere utilizzati per quantificare la malattia minima
residua (MRD).
La t(8;21) fonde l’ esone 5 del gene AML1 (Acute
Myeloid Leukemia 1 gene) identificato anche come
CBFA2 (Core Binding Subunit A2) all’esone 2 del
gene ETO (Eight Twenty One gene), originando
l’mRNA chimerico AML1-ETO.
L’ inv(16) fonde il gene CBFβ (Core Binding Protein
Factor β subunit) al gene MYH11 (Myosin Heavy
Chain 11 gene) originando l’mRNA chimerico
CBFβ– MYH11. Sono stati descritti dieci diversi
trascritti di fusione CBFβ– MYH11 (tipi dalla A alla J).
Oltre l’85% dei pazienti positivi presentano il
trascritto di tipo A; altri due trascritti (D e E)
rappresentano circa il 5% ciascuno, mentre gli altri
tipi rappresentano casi praticamente unici.
Poiché entrambe le aberrazioni AML1-ETO e inv(16)
riguardano i geni del complesso del fattore di
trascrizione CBF (Core Binding Factor), sono anche
chiamati Leucemie CBF. I pazienti con questi
particolari tipi di leucemie hanno di solito meno
di 60 anni. Il trascritto della fusione AML1-ETO è
spesso associato con il sottotipo M2, mentre i
pazienti con inv(16) normalmente presentano una
leucemia mielomonocitica con eosinofili anormali.
Entrambi i trascritti di fusione (AML1-ETO e
CBFβ– MYH11) necessitano di essere identificati
accuratamente in quanto sono marcatori di buona
prognosi e di conseguenza permettono di scegliere
interventi terapeutici meno tossici rispetto ad altri
tipi di AML. E’ inoltre generalmente accettato che
i pazienti con leucemie CBF possono andare
incontro a rapide e complete remissioni
ematologiche dopo un trattamento chemioterapico
standard con citarabina e antracicline.
Tuttavia anche dopo tali terapie, alcuni pazienti
possono avere delle ricadute. In questi casi gli
mRNA di fusione, rilevati con alta sensibilità
attraverso RQ-PCR e l’analisi della MRD potrebbero
dare informazioni aggiuntive sulla risposta al
trattamento.
Tecnologia standardizzata e normalizzata
La tecnologia FusionQuant® utilizza la Real Time
PCR quantitativa (RQ-PCR) che combina in
un’unica provetta l’amplificazione del DNA con
l’analisi dell’ espressione genica e mediante una
tecnologia con plasmidi validati consente di
normalizzare i risultati di RQ-PCR.
La tecnologia FusionQuant® di Ipsogen consente
di quantificare il numero di copie del gene di
controllo ABL e dei trascritti del gene di interesse
nei pazienti, utilizzando curve standard con
diluizioni seriali di plasmidi di entrambi i geni.
Di rilievo è che il calcolo del rapporto fra la
concentrazione del trascritto dello specifico gene
di fusione rispetto alla concentrazione del trascritto
endogeno ABL, fornisce una quantificazione
normalizzata dello specifico gene di fusione in
ciascun campione analizzato nel saggio.
I FusionQuant® standard sono plasmidi a DNA
estremamente stabili. La tecnologia standardizzata
Ipsogen FusionQuant® si è dimostrata altamente
riproducibile negli studi multicentrici e costituisce un
sistema per normalizzare e standardizzare le analisi
di RQ-PCR inter e intralaboratorio.
RUO
Questi prodotti sono solamente per ricerca,
non per uso diagnostico.
ETO (8Q22)
AML1 (21q22)
Trascritti genici di fusione AML1-ETO
e CBFβ-MYH11 riportante il set di
primer e probe per la RQ-PCR
2
3
503
503 542
4
5
796
953
5
1057
3
275
5’ Forward
Primer
655
415
5
745
3’ Forward
Primer
CBFβ (16q22)
4
4
5
5’ Forward
Primer
MYH11 (16p13)
12
13
14
3’ Forward
Primer
Trascritto genico di ABL riportante il
set di primer e probe per la RQ-PCR
Perchè scegliere i kit FusionQuant ®?
• Misurazione sensibile e quantitativa dei trascritti
di fusione
• Quantificazione del trascritto di fusione relativa
al gene di controllo ABL
• Compatibilità su molti strumenti
• Reagenti conformi all’ISO 13485
• Soluzioni prediluite pronte all’uso
• Ridotti rischi di contaminazione
• Standard validati per i trascritti di fusione e per
il gene di controllo
• Procedure standardizzate di RQ-PCR dalla
“Europe Against Cancer”
Informazioni per gli ordini:
FusionQuant®
Kit
Numero di campioni
testati in duplicato
Numero d’ordine
AML1-ETO
24-30*
504FQPP01
CBFB-MYH11 A
24-30*
504FQPP02
* Dipende dallo strumento di Real Time PCR utilizzato
• Sistema di estrazione, retrotrascrizione e Taq polimerasi non sono
inclusi nel kit
Copyright 2008, FusionQuant Ipsogen® è un marchio di fabbrica Ipsogen. E’ in corso richiesta di brevetto
internazionale No WO 02/074949 e WO 2004/078020. L’acquisto di questo prodotto non comporta alcun
diritto per l’utilizzo del prodotto a scopo di diagnostica clinica. Non sono altresi’ conferiti diritti per la tecnologia TaqMan® sotto brevetto U.S. 5,210,015, 5,487,972 e 5,538,848 o similari. Questi prodotti sono
ottimizzati per l’utilizzo con la Reazione a Catena della Polimerasi (PCR) coperta da brevetto di Roche
Molecular Systems Inc e F. Hoffman-La Roche Ltd (“Roche”). Nessuna autorizzazione sotto questo brevetto all’utilizzo della PCR deriva espressamente o implicitamente mediante l’acquisto di questi prodotti.
IPSOGEN SA,
MARSEILLE, FRANCE Tel: +33 (0)4 91 29 30 90 -Fax:+33 (0)4 91 29 30 99 - e-mail: [email protected]
Bibliografia
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reverse transcriptase polymerase chain reaction of fusion gene transcripts for residual
disease detection in leukemia - A Europe against Cancer Program.
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3. J. Krauter et al. Prognosis value of minimal Residual Disease Quantification by
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Prodotti distribuiti in esclusiva da
Instrumentation Laboratory SpA - Viale Monza 338 - 20128 Milano, Italy - Informazioni: Tel. 02/2522344-264 - e-mail: [email protected] - Ordini: Tel. 02/2522804 - Fax 02/2522809
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p/n 98091-38 Rev. 1 - 09/08 - © Copyright 2008, Ipsogen. FusionQuant® is a registered trademark of Ipsogen
Ciascun Kit contiene:
• 1 provetta di mix con primer e probe specifici
per il gene di fusione di interesse
• 1 provetta di mix con primer e probe specifici
per il gene di controllo ABL
• 1 set di standard specifici per il profile gene di
fusione (5 provette contenenti le diverse
diluizioni: 10, 102, 103, 105, 106)
• 1 set di standard specifici per il gene di
controllo ABL (3 provette contenenti le diverse
diluizioni: 103, 104, 105).