TA Odo ANAILiSi DEi CALCOLI Reattivi, pronti all'uso, p e r la determinazione semiquantitativa dei principali c o m p o n e n t i i calcoli urinari. Carbonati, Calcio, Ossalati, Fosfati, Magnesio, A m m o n i o , A c i d o Urico, Cistina. SOMMARIO I calcoli unnan (o renali) sono costituiti da sostanze organiche od inorganiche insolubili: ossalati e/o fosfati di calcio, cistina, acido urico, etc.. Le origini di queste condizioni possono essere: disfunzioni metaboliche, ostruzioni, infezioni, ipersaturazioni, perdite/mancanze di inibitori. La quasi totalità dei Calcoli urinari (o renali) è costituita da più componenti, dovuti a fenomeni di coprecipitazione o di precipitazioni successive. PROCEDIMENTO PROCEDURA PRELIMINARE - DETERMINAZIONE DEI CARBONATI Dopo un esame organoiettico accurato (forma, colore, etc.) frantumare in un mortaio il calcolo urinario (renale) e ridurlo in polvere. Prelevare 15 mg (o 1 misurino raso della spatola blu) di polvere del calcolo da analizzare e trasferirli nella piastra petri fornita o in altro contenitore in polistirolo trasparente. Aggiungere 5 gocce d i Reattivo 1 direttamente sulla polvere. L o sviluppo di effervescenza indica presenza di carbonati. Il Reattivo I è Acido Solforico fortemente corrosivo, evitare accuratamente il contatto con la pelle. PRINCIPIO DEL TEST Su u n campione di calcolo, i l più omogeneo possibile, s i determinano semi quantitativamente il Calcio, gli Ossalati, i Fosfati, il Magnesio, l'Ammonio, l'acido Urico e la Cistina. La percentuale di ogni componente s i ricava, per confronto visivo, dalle scale cromatiche contenute nel kit. La composizione del calcolo si può ricavare dai valori ottenuti mediante il regolo allegato. Al termine della eventuale effervescenza agitare con un bastoncino di plastica fornito sino a completa dissoluzione. Trasferire nella provetta da 50 mL. Portare a volume finale di 50 mL con acqua distillata avendo cura di sciacquare la piastra. Mescolare bene. Per ogni parametro da determinare prelevare 5 mL della soluzione ottenuta ed effettuare i test utilizzando le provette in plastica fornite. CAMPIONI Calcolo renale o urinario. Raccolta dei campioni in accordo con CLSI (NCCLS) 17 REAGENTI / CONTENUTO DELLA CONFEZIONE CODICE C C 0 4 1 0 0 ( 5 0 TEST x 7 parametri) Reattivo 1 A c . Solforico concentrato 1 x 11 mL DETERMINAZIONE DEL CALCIO Il Calcio si determina per via complessometrica con Acido Calconcarbossilico che funge da indicatore. -ProcedimentoAggiungere alla provetta del campione 2 gocce di Reattivo 2 e 15 mg (o 1 misurino raso della spatola blu) di Reattivo 3, agitare bene. Possibilmente mantenendo l'agitazione (anche manualmente) aggiungere, goccia a goccia, il Reattivo 4 fino a quando non si ottiene il viraggio del colore da rosso a blu, contando contemporaneamente il numero di gocce aggiunte. La percentuale di Calcio contenuta nel calcolo si ottiene moltiplicando il numero delle gocce per 5. Corrosivo. R35 Provoca gravi ustioni Reattivo 2 S o d i o idrossido 1 x 13 mi_ Corrosivo. R35 Provoca gravi ustioni Reattivo 3 Reattivo 4 Ac. Calconcarbossilico EDTA 1 Reattivo 5 Tampone Barato 1 1 x 2,2 g x 28 mL x13 mL DETERMINAZIONE DEGLI OSSALATI Gli Ossalati decolorano il composto costituito da Ferro e Acido Solfosalicilico. R36/37/38 Irritante per gli occhi, le vie respiratorie e la pelle Reattivo 6 Ferro cloruro Reattivo 7 Ac. Solfosalicilico Reattivo 8 Reagente di Nessler 1 x 10 mL 1 x 10 mL 1 -ProcedimentoAlla provetta del campione aggiungere, rispettando questa successione, 2 gocce di Reattivo 5, 3 gocce di Reattivo 6 e 3 gocce di Reattivo 7. Lasciare riposare per 2 minuti quindi confrontare con la relativa scala cromatica leggendo la percentuale di Ossalati. x10 mL R26/27/28 Molto tossico per inalatone, contatto con la pelle e per ingestione. R50 Molto tossico per gli organismi acquatici 1 x 13 mi Reattivo 9 A m m o n i o Molibdato Irritante Reattivo 10 Sodio Metabisolfito Reattivo 11 x13 mL x13 mL Tampone Barato 2 Tossico. R35 Provoca gravi ustioni Reattivo 12 Xilidil Blue 1x 26 mL Reattivo 13 A c . Fosfomolibdico 1 x 10 mL Infiammabile. R l i C o Ammoniaca 1 x 26 mL R36/37/38 Irritante porgli occhi, le vie respiratorie ala pelle Reattivo 15 Sodio Soifito 1x 25 g Reattivo 16 Sodio Nitroprussiato 1x 25 g Controllo Standard di controllo in polvere 1 x 0,15 g Valori attesi sulla scheda allegata R36 Irritante per gli occhi Stirrer Gocciolatori Provette riutilizzabill DETERMINAZIONE DELL'AMMONIO il Reattivo di Nessler lo ione Ammonio forma soluzioni colorate in giallo-bruno. -ProcedimentoAlla provetta del campione aggiungere, rispettando questa successione, 3 gocce di R e a t t i v o 8 e 3 gocce di Reattivo 2, confrontare il colore della soluzione ottenuta con la relativa scala cromatica leggendo la percentuale di Ammonio. Comburente Reattivo 14 n DETERMINAZIONE DEI FOSFATI L'acido Fosfomolibdico formato viene ridotto a blu di Molibdeno. -ProcedimentoAlla provetta del campione aggiungere, rispettando questa successione, 5 gocce di Reattivo 9 e 5 gocce di Reattivo 10. Lasciare riposare per 5 minuti e quindi confrontare il colore della soluzione ottenuta con la relativa scala cromatica leggendo la percentuale di Fosfati. DETERMINAZIONE DEL MAGNESIO li Magnesio reagisce con i componenti formando un complesso colorato in rosso. 2 x 25 pezzi 10 pezzi 4 x 10 mL / 1 x 50 mL Piastra petri riutilizzabile 1pezzo Spatola 225 mg di colore bianco 2 pezzi Spatola 15 mg di colore blu Scala Cromatica 3 pezzi Regolo calcolatore MATERIALI NECESSARI NON FORNITI Mortaio e pestello in porcellana chiara, pipetta da 5 mi, acqua distillata. PRECAUZIONI Si raccomanda di manipolare i reagenti con cautela, evitandone l'ingestione ed il contatto con gli occhi, la pelle e le mucose. Utilizzare le normali precauzioni previste per il comportamento in laboratorio. PREPARAZIONE DEI REAGENTI I reattivi sono pronti all'uso e sono stabili, conservati a 15-25C, fino alla data di scadenza indicata sulla confezione anche dopo l'apertura. Mescolare gentilmente e portare i Reagenti alla temperatura di lavoro prima dell'uso. Eventuale precipitato presente nel Reattivo 8 deve essere riportato in sospensione per inversione. Fare attenzione a non contaminare i reagenti una volta aperti i flaconi. -Procedimentoin una provetta per analisi pipettare i mL di campione ed aggiungere 4 mL di acqua distillata. Agitando aggiungere, rispettando questa successione, 1 gocce di Reattivo 11 e 5 gocce di Reattivo 12. Lasciare riposare per 1 minuto e quindi confrontare il colore della soluzione ottenuta con la relativa scala cromatica leggendo la percentuale di Magnesio. DETERMINAZIONE DELL'ACIDO LIRICO L'acido Urico riduce l'acido Fosfomolibdico a blu di Molibdeno. -ProcedimentoAlla provetta del campione aggiungere 3 gocce di Reattivo 13. Agitare e lasciare riposare per 2 minuti quindi aggiungere 2 gocce di Reattivo 5. Confrontare, il più velocemente possibile, il colore della soluzione ottenuta con la relativa scala cromatica leggendo la percentuale di Acido Lirico. Il confronto va effettuato immediatamente in quanto il colore ottenuto non è stabile e tende a virare verso il blu. DETERMINAZIONE DELLA CISTINA La Cistina, in presenza di Sodio Solfito si riduce a Cisteina che in presenza di Nitroprussiato forma una colorazione rossa. -ProcedimentoAlla provetta del campione aggiungere 10 gocce di Reattivo 14 e 450 mg (o 2 misurini rasi della spatola bianca) di Reattivo 15. Agitare sino a completa dissoluzione. ITA Attendere 1 minuto quindi aggiungere 450 mg (o 2 misurini rasi della spatola bianca) di Reattivo 16. Agitare sino a completa dissoluzione. Dopo 30 secondi confrontare il colore della soluzione ottenuta con la relativa scala cromatica leggendo la percentuale di Cistina. NB: per motivi tecnici di metodica la somma delle componenti non da un valore uguale al 100% NOTE NON miscelare tra loro reagenti da diversi lotti di produzione. Come per qualunque procedimento diagnostico, se i risultati sono incompatibili con la cartella clinica, il medico dovrebbe valutare i dati ottenuti usando questo test alla luce di altre informazioni cliniche. Solo per uso diagnostico in vitro. Come parte di un C O I . , si raccomanda di utilizzare lo standard di controllo contenuto nel kit come un campione nella procedura di lavoro. I valori attesi dei vari componenti sono riportati nell'allegato foglio di controllo. ELABORAZIONE MATEMATICA DEI RISULTATI Gli elementi e/o complessi individuati con questo kit e contenuti nel calcolo in esame, in genere fanno parte dei seguenti composti: -Calcio Ossalato (Whewellite) -Magnesio Ammonio Solfato (Struvite) -Calcio Fosfato secondario (Brushite) -Calcio Fosfato terziario (Apatite) -Ammonio Urato -Acido Lirico -Cistina CONSIDERAZIONI SULLO SMALTIMENTO Il prodotto e destinato all'utilizzo all'interno di laboratori di analisi professionali. Per un corretto smaltimento dei rifiuti fare riferimento alla normativa vigente e alle schede informative in materia di sicurezza. B1BLIOGRAFIA Tali composti sono stati utilizzati come base per la costruzione del regolo calcolatore allegato. Dalle percentuali dei singoli componenti determinate con i l k i t s i risale alla composizione del calcolo con l'ausilio del regolo stesso. Nell'elaborazione matematica si procede come segue: 1) P e r ogni catione si ipotizzano, in base agli anioni effettivamente presenti, i possibili composti dedotti dall'elenco precedente 2) S i ricavano poi, con il regolo calcolatore, le quantità dei singoli componenti probabilmente presenti. 1. Calcio Ossalato a) Impostare, sulla scala Ossalati del regolo, la percentuale di ossalato determinata sperimentalmente e leggere la corrispondente percentuale di Calcio Ossalato. b) Risalire alla quantità percentuale di Calcio leggendo la scala sottostante relativa all'elemento Calcio. Se la quantità di Calcio determinata sperimentalmente è superiore a quella calcolata come descritto, ricavare per sottrazione la quantità di Calcio che probabilmente non è combinata come Ossalato (es. Fosfati di Calcio). 2. Magnesio Ammonio Solfato a) Impostare, sulla scala Magnesio del regolo, l a percentuale d i Magnesio determinata sperimentalmente e leggere la corrispondente percentuale di Struvite. b) Risalire alle corrispondenti quantità di Ammonio e Fosfato sulle rispettive scale. Se le concentrazioni di Ammonio e Fosfato determinate sperimentalmente sono superiori a quelle calcolate come descritto, ricavare per sottrazione le quantità di Ammonio e Fosfato che probabilmente non è combinata come Magnesio Ammonio Fosfato (es. Urato di Ammonio e Fosfato di Calcio). 3, tirato di Ammonio a) Impostare, sulla scala Ammonio del regolo, l a percentuale d i Ammonio determinata sperimentalmente o quella ottenuta per sottrazione come descritto al punto 21. Leggere sulla scala dell'Urato di Ammonio il valore corrispondente. b) Risalire alle corrispondenti quantità di Acido urico dalla rispettiva scala. Se la concentrazione in Acido urico determinata sperimentalmente è superiore a quella calcolata come descritto, ricavare per sottrazione le quantità residua di Acido Urlo°. 4. Fosfati di Calcio a) Impostare, sulla scala Calcio del regolo, la percentuale di Calcio determinata sperimentalmente o quella ottenuta per sottrazione come descritto al punto 1.a. Controllare contemporaneamente sulle scale dei Fosfati (Brushite e Apatite) quali dei valori ricavati per elaborazione matematica corrispondono meglio a quello determinato sperimentalmente od a quello ricavato per sottrazione come descritto al punto 2.11 b) Infine ricavare, dalle rispettive scale, le concentrazioni in Brushite. ESEMPIO DI VALUTAZIONE DEI RISULTATI OTTENUTI Dall'analisi di un calcolo qualsiasi è stato determinato che lo stesso contiene solo i seguenti componenti: Calcio 35% O s s a l a t i 15% Fosfati 40% 1Coltele J, Kochis E, Galli B, Munver R. Lirolithiasis/Nephrolithiasis: What's It all about? Urologic Nursing.2005; 25(6): 427-48 2. Vinay K, K. Abul A.N Fausto and N.R. Mitchell, 2007. Renal stones in: Robbins Basic Pathology. 8th Edition. Saunders Company, pp 571-572. 3. Abbagani S. Gundimeda SD, Varre S, Ponnala D, Mundluru HP. Kidney Stone Disease: Etiology and Evaluation. IJABPT. May-July 2010; 1(1) : 175-182. 4. Buchhloz NPN, Abbas F, Afzal M, Khan R, Rizvi I, Taiati J. The prevalence of silent kidney stones-An ultrasonographic screening study. JPMA. 2003; 53(1): 24-5 5. Shokouhi B, Gasemi K, Norizadeh E. Chemical composition and epidemiological risk factors of urolithiasis in Ardabil Iran. Research Journal of Biological Sciences 2008; 3(6): 620-626, 6. Khan A S, Rai M E, Gandapur, Parvaiz A, Shah A H, Hussain A A e t al. Epidemiological risk factors and composition o f urinary stones in Riyadh Saudi Arabia. J Ayub Medical Coli Abbotabad. 2004 Jul-Sep; 16(3): 56-8. 7. Siddique EH, Abdul Munim, Siddiqui S and Shah N. Urolithiasis. Presentation and ultrasonographic evaluation. Professional Med J July-Sep 2011; 18 (3): 380-385 8. Joual A, H Rais, R. Rabii, M. El Mrini and S. Benjelloun. Epidemiology of urinary lithiasis. Ann. Lirol. 1997, 31(2): 80-83. 9. Rayhan ZH,Y. Ogavwa, S. Hokama, M. Morozumi and T. Hatano. Urolithiasis in Okinawa, Japan: A relatively high prevalence of uric acid stones. Int. J. Urol. 2003; 10: 411. 10. Rafique M, Bhutta RA, Rauf A, Chaudhry IA. Chemical composition of upper urinary tract calculi in Multati. J Pak Med Assoc 2000; 50: 145-8 11. Pandeya A,Prajapati R, Panta P and Regmi A. Assessment of kidney stone and prevalence of its chemical compositions. Nepal Med Coli J 2010; 12(3): 190-192 12. Holmes RP, Goodman HO, Assimos DG. Contribution o f dietary oxalate t o urinary oxalate excretion. Kidney i n t .13. Baxmann AC, Mendonca CD, Heilberg IP. Effect of vitamin C supplements on urinary 1 2 0 0 oxalate 1 ; 5 and 9 :pH in calcium stone-forming patients. Kidney Int'l 2003; 63: 1066-71. 2 7 0 - 6 . 14. Curhan GC, Willet WC, Knight EL, Stampfer MJ. Dietary Factors and the Risk of incident Kidney Stones in Younger Women, Nurses' Health Study li. Arch intern Med. 2004; 164: 885- 91. 15. Hashmi ZA, Bashir G and Nawaz HA. Composition of Renal Stones: Calcium Oxalate are more common in the North West of Pakistan. JPMI. 2001; 15(2): 199201. 16. Khalil NY, Nawaz H, Ahmed S, et al. Urinary calculi: prevalence , types and distribution i n urinary t r a c t i n Ouetta v a l i e y a n d adjacent areas. T h e professional.1998; 2: 197-202. 17. CLSI (NCCLS) C49-NH56-A: Collection, Handling, Transport and Storage for Body Fluids. Quick Guide. PRODUTTORE LTA s.r.l. Via Milano 15/F 20060 B u s s e r o (Milano) tel. + + 3 9 02 95409034 fax. + + 3 9 02 95334185 e-mail. info©Itaonline.it website. http://www.ltaonline.it LEGENDA SIMBOLI IVD Si può ipotizzare che il calcolo in esame contenga Ossalato di Calcio e Fosfati di Calcio, quindi andremo a verificare le diverse percentuali di calcio legati agli ossalati ed ai fosfati: 'LOTI IREF il 15% di Ossalato, sul regolo, corrisponde al 25% di Ossalato di Calcio il 25% di Ossalato di Calcio corrisponde, sul regolo, al 7% di Calcio (legato all'ossalato) non combinato c o m e Ossalato rimane quindi i l 2 8 % d i Calcio (presumibilmente legato ai fosfati) come risulta dal seguente calcolo: 35% - 7% ,= 28% sul regolo il 28% di Calcio corrisponde al 40% di Fosfati ed al 70% di Apatite Possiamo quindi concludere che il calcolo in esame è composto per il 25% da Ossalato di calcio e per il 70% da Apatite Per esclusivo uso diagnostico in vitro Lotto di fabbricazione Codice di catalogo Intervallo di temperatura per la conservazione 2 A Data di scadenza (anno - mese) Consultare i documenti allegati Consultare le istruzioni operative Rischio biologico Mod. 01.06 (ver. 1.4 - 17/09/2014 I
