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artus® EBV QS-RGQ Kit
Prestazioni caratteristiche
artus EBV QS-RGQ Kit, Version 1,
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4501363
availability
of
new
electronic
labeling
revisions
at
www.qiagen.com/products/artusebvpcrkitce.aspx before test execution.
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month/year).
Sensibilità analitica — plasma
Il limite di rilevazione analitica, tenendo conto della purificazione (limite di sensibilità), è stato
determinato per il kit artus EBV QS-RGQ utilizzando campioni clinici EBV-positivi in combinazione
con l’estrazione sul QIAsymphony SP.
Per il plasma, la sensibilità analitica (tenendo conto della purificazione) del kit artus EBV QSRGQ è stata determinata utilizzando una serie di diluizioni del virus EBV da 3160 copie al valore
nominale di 1 EBV/ml, aggiunte ai campioni clinici di plasma. I campioni sono stati poi sottoposti
ad estrazione del DNA con il kit QIAsymphony DSP Virus/Pathogen Midi in combinazione con il
protocollo Cellfree1000 (volume di estrazione: 1 ml, volume di eluizione: 60 µl). Ciascuna delle 10
diluizioni è stata analizzata con il kit artus EBV QS-RGQ in 4 giorni diversi nell’ambito di 4 sedute
con 8 replicati ciascuna. I risultati sono stati determinati mediante un’analisi probit. La Figura 1
illustra
graficamente
l’analisi
probit.
Il
limite
di
rilevazione
analitica
del
kit
artus EBV QS-RGQ (tenendo conto della purificazione) in combinazione con il Rotor-Gene Q è pari
a 157 copie/ml (p = 0,05). Ciò significa che esiste una probabilità del 95% che vengano rilevati
157 copie/ml.
Maggio 2012
Sample & Assay Technologies
1.0
95%
Proportions
Proporzioni
0.8
2,20~~157
157copies/ml
copie/ml (95%)
2.20
(95%)
(109–260
copie/ml)
(109–260 copies/ml)
0.6
0.4
0.2
0.0
-1
0
1
2
3
4
log (dose)
Figura 1. Analisi probit: plasma, EBV (Rotor-Gene Q). Sensibilità analitica, tenendo conto
della purificazione, (plasma, utilizzando il kit QIAsymphony DSP Virus/Pathogen Midi) del kit artus
EBV QS-RGQ sul Rotor-Gene Q.
Specificità — plasma
La specificità del kit artus EBV QS-RGQ è garantita in primo luogo dalla selezione dei primer e
delle sonde, nonché dalla selezione di condizioni di reazione stringenti. I primer e le sonde sono
stati controllati per accertare eventuali omologie con tutte le sequenze pubblicate nelle banche
genetiche mediante analisi comparativa delle sequenze. La rilevabilità di tutti i genotipi importanti è
stata così assicurata.
Inoltre, la specificità è stata convalidata con 30 diversi campioni di plasma EBV-negativi. Questi
campioni non hanno generato segnali con i primer e le sonde di EBV inclusi nell’EBV RG Master.
Una potenziale cross-reattività del kit artus EBV QS-RGQ è stata rilevata con il gruppo di controllo
elencato nella Tabella 1 (sotto riportata). Nessuno dei patogeni testati è risultato reattivo. Non sono
state riscontrate cross-reattività con infezioni miste.
Prestazioni caratteristiche: Kit artus EBV QS-RGQ
pagina 2 di 8
Tabella 1. Analisi della specificità del kit con patogeni potenzialmente cross-reattivi
Gruppo di controllo
EBV
Controllo interno
(Cycling Green)
(Cycling Yellow)
–
+
–
+
–
+
–
+
–
+
–
+
Herpes virus umano tipo 1
(virus herpes simplex tipo 1)
Herpes virus umano tipo 2
(virus herpes simplex virus 2)
Herpes virus umano tipo 3
(virus varicella-zoster)
Herpes virus umano tipo 5
(citomegalovirus)
Virus umano della leucemia a cellule T
tipo 1
Virus umano della leucemia a cellule T
tipo 2
Range lineare — plasma
Il range lineare del kit artus EBV QS-RGQ (tenendo conto della purificazione) è stato determinato
analizzando una serie di diluizioni del materiale EBV in un intervallo da 1,00 x 107 copie/ml a 1,00
x 102 copie/ml nel plasma. La purificazione è stata eseguita in replicati (n = 4 per concentrazioni
≥1,00 x 106 copie/ml; n = 8 per concentrazioni <1,00 x 106 copie/ml) utilizzando il kit
QIAsymphony DSP Virus/Pathogen Midi in combinazione con il protocollo Cellfree1000 (volume di
estrazione: 1 ml, volume di eluizione: 60 µl). Ogni campione è stato analizzato con il kit
artus EBV QS-RGQ. Il range lineare del kit artus EBV QS-RGQ (tenendo conto della purificazione) è
stato determinato per coprire le concentrazioni da 3,16 x 102 copie/ml a 1,00 x 107 copie/ml per
il plasma (Figura 2).
Prestazioni caratteristiche: Kit artus EBV QS-RGQ
pagina 3 di 8
log10 della concentrazione stimata
(copie/ml)
log10 estimated concentration (copies/ml)
10
8
6
y = 1,0528x – 0,1729
y = 1.0528x – 0.1729
R20.9991
= 0,9991
R2 =
4
2
0
0
2
4
6
8
10
10 nominal concentration (copies/ml)
loglog
10 della concentrazione nominale (copie/ml)
Figura 2. Range lineare del kit artus EBV QS-RGQ (plasma). Calcolo del range lineare. La
linea retta è stata determinata mediante una regressione lineare del log10 delle concentrazioni
calcolate con il log10 delle concentrazioni nominali. La figura mostra l'equazione della linea di
regressione.
Robustezza — plasma
La verifica della robustezza consente la determinazione del tasso globale d’errore del kit
artus EBV QS-RGQ. Per verificare la robustezza, 30 campioni di plasma EBV-negativi sono stati
arricchiti con 500 copie/ml di EBV (concentrazione pari all’incirca tre volte il limite di sensibilità
analitica). In seguito ad estrazione con il kit QIAsymphony DSP Virus/Pathogen Midi in
combinazione con il protocollo Cellfree1000_DSP (volume di estrazione: 1 ml, volume di eluizione:
60 µl), i campioni sono stati analizzati con il kit artus EBV QS-RGQ. Inoltre, la robustezza del
controllo interno è stata valutata mediante purificazione e analisi dei 30 campioni di plasma
arricchiti. Non sono state osservate inibizioni. La robustezza del kit artus EBV QS-RGQ è risultata
≥99%.
Sensibilità analitica — sangue intero
Per il sangue intero, la sensibilità analitica (tenendo conto della purificazione) del kit artus EBV QSRGQ è stata determinata utilizzando una serie di diluizioni del virus EBV da 3160 copie al valore
nominale di 3,16 copie di EBV /ml, aggiunte ai campioni di sangue intero umano. I campioni
sono stati poi sottoposti ad estrazione del DNA con il kit QIAsymphony DNA Mini in combinazione
con il protocollo VirusBlood200 (volume di estrazione: 200 µl, volume di eluizione: 60 µl).
Ciascuna delle 10 diluizioni è stata analizzata con il kit artus EBV QS-RGQ in 3 giorni diversi
nell’ambito di 3 sedute con 11 replicati ciascuna. I risultati sono stati determinati mediante
Prestazioni caratteristiche: Kit artus EBV QS-RGQ
pagina 4 di 8
un’analisi probit. La Fig. 3 illustra graficamente l'analisi probit. Il limite di rilevazione analitica
(tenendo conto della purificazione) del kit artus EBV QS-RGQ in combinazione con il Rotor-Gene
Q, è pari a 288,42 copie/ml (p = 0,05). Ciò significa che esiste una probabilità del 95% che
vengano rilevate 288,42 copie/ml..
1.0
95%
Proportions
Proporzioni
0.8
0.6
2,46002~~288.42
288,42copies/ml
copie/ml (95%)
(95%)
2.46002
(169,53–710,95
copie/ml)
(169.53–710.95 copies/ml)
0.4
0.2
0.0
-1
0
1
2
3
4
log (dose)
Figura 3. Analisi probit: sangue intero, EBV (Rotor-Gene Q). Sensibilità analitica, tenendo
conto della purificazione, (sangue intero, utilizzando il kit QIAsymphony DNA Mini) del kit artus EBV
QS-RGQ sul Rotor-Gene Q.
Specificità — sangue intero
La specificità del kit artus EBV QS-RGQ è garantita in primo luogo dalla selezione dei primer e
delle sonde, nonché dalla selezione di condizioni di reazione stringenti. I primer e le sonde sono
stati controllati per accertare eventuali omologie con tutte le sequenze pubblicate nelle banche
genetiche mediante analisi comparativa delle sequenze. La rilevabilità di tutti i genotipi importanti è
stata così assicurata.
Inoltre, la specificità è stata convalidata con 30 diversi campioni di sangue intero EBV-negativi.
Questi campioni non hanno generato segnali con i primer e le sonde di EBV inclusi
nell’EBV RG Master.
Una potenziale cross-reattività del kit artus EBV QS-RGQ è stata rilevata con il gruppo di controllo
elencato nella Tabella 1 (pag. 3). Nessuno dei patogeni testati è risultato reattivo. Non sono state
riscontrate cross-reattività con infezioni miste.
Prestazioni caratteristiche: Kit artus EBV QS-RGQ
pagina 5 di 8
Range lineare — sangue intero
Il range lineare del kit artus EBV QS-RGQ (tenendo conto della purificazione) è stato determinato
analizzando una serie di diluizioni del materiale EBV in un intervallo da 5,00 x 107 copie/ml a 1,00
x 102 copie/ml nel sangue intero. La purificazione è stata eseguita in replicati (n = 4 per
concentrazioni ≥1,00 x 107 copie/ml; n = 8 per concentrazioni <1,00 x 107 copie/ml) utilizzando
il kit QIAsymphony DNA Mini in combinazione con il protocollo VirusBlood200 (volume di
estrazione: 200 µl, volume di eluizione: 60 µl). Ogni campione è stato analizzato con il kit
artus EBV QS-RGQ. È stato determinato il range lineare (tenendo conto della purificazione) del kit
artus EBV QS-RGQ per coprire le concentrazioni da 1,00 x 103 copie/ml a 5,00 x 107 copie/ml per
il sangue intero (Figura 4).
log10 della concentrazione stimata
(copie/ml)
log10 estimated concentration (copies/ml)
10
8
6
y = 1.0261x – 0.0477
R2 = 0.9993
4
2
0
0
2
4
6
8
10
log10concentrazione
nominal concentration
(copies/ml)
log10 della
nominale
(copie/ml)
Figura 4. Range lineare del kit artus EBV QS-RGQ (sangue intero). Calcolo del range lineare.
La linea retta è stata determinata mediante una regressione lineare del log10 delle concentrazioni
calcolate con il log10 delle concentrazioni nominali. La figura mostra l’equazione della linea di
regressione.
Robustezza — sangue intero
La verifica della robustezza consente la determinazione del tasso globale d'errore del kit
artus EBV QS-RGQ. Per verificare la robustezza, 30 campioni di sangue intero EBV-negativi sono
stati arricchiti con 750 copie/ml di EBV (concentrazione pari all’incirca a tre volte il limite di
sensibilità analitica). In seguito ad estrazione con il kit QIAsymphony DNA Mini in combinazione
con il protocollo VirusBlood200 (volume di estrazione: 200 µl, volume di eluizione: 60 µl), i
campioni sono stati analizzati con il kit artus EBV QS-RGQ. Inoltre, la robustezza del controllo
Prestazioni caratteristiche: Kit artus EBV QS-RGQ
pagina 6 di 8
interno è stata valutata mediante purificazione e analisi dei 30 campioni di sangue intero arricchiti.
Non sono state osservate inibizioni. La robustezza del kit artus EBV QS-RGQ è risultata del ≥99%.
Riproducibilità
I dati di riproducibilità consentono una regolare valutazione delle prestazioni del kit artus EBV QSRGQ, nonché un confronto di efficacia con altri prodotti. Questi dati sono ottenuti dalla
partecipazione a programmi di performance consolidati.
Cross-contaminazione
L’assenza di cross-contaminazione fra i campioni per l’intero flusso di lavoro è stata dimostrata
dalla corretta rilevazione di tutti i campioni positivi e negativi in posizioni alternate (modello a
scacchiera) per un sistema artus QS-RGQ rappresentativo.
Prestazioni caratteristiche: Kit artus EBV QS-RGQ
pagina 7 di 8
Per le informazioni di licenza aggiornate e i disclaimer specifici dei prodotti consultare il manuale
specifico del kit QIAGEN. I manuali dei kit QIAGEN sono disponibili nel sito www.qiagen.com
oppure possono essere richiesti al servizio di assistenza tecnica QIAGEN o al proprio distributore
locale.
Marchi commerciali: QIAGEN®, QIAsymphony®, artus®, Rotor-Gene® (QIAGEN Group); ATCC® (American Type Culture
Collection); Acrometrix® (Life Technologies).
Maggio-12 © 2012 QIAGEN, tutti i diritti riservati.
www.qiagen.com
France  01-60-920-930
The Netherlands  0800 0229592
Australia  1-800-243-800
Germany  02103-29-12000
Norway  800-18859
Austria  0800/281010
Hong Kong  800 933 965
Singapore  65-67775366
Belgium  0800-79612
Ireland  1800 555 049
Spain  91-630-7050
Canada  800-572-9613
Italy  800 787980
Sweden  020-790282
China  021-51345678
Japan  03-5547-0811
Switzerland  055-254-22-11
Denmark  80-885945
Korea (South)  1544 7145
UK  01293-422-911
Finland  0800-914416
Luxembourg  8002 2076
USA  800-426-8157
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