trattato italiano di medicina di laboratorio
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TRATTATO ITALIANO DI MEDICINA DI LABORATORIO Fondato da ANGELO BURLINA Volume V/1 TECNICHE DI LABORATORIO NELLA DIAGNOSTICA DELLE EMOPATIE Seconda edizione a cura di ANTONIO CUNEO, GIANLUIGI CASTOLDI e GIAN MATTEO RIGOLIN Dello stesso Editore Alescio/Buonomini/Dori – Biologia dinamica Amadori – Ematologia Arienti – Le basi molecolari della nutrizione Arienti – Un compendio di biochimica per le lauree triennali Bauer et al. – Analisi strumentale Bergmeyer – Principi di analisi enzimatica Betterle – Le malattie autoimmuni Betterle – Gli autoanticorpi Boari – Emocromo: guida rapida all’interpretazione ragionata Bolognani/Volpi – Tavole metaboliche Bozzetti – Idee direttive in medicina di laboratorio Cabras/Martelli – Chimica e tecnologia degli alimenti Cao/Dallapiccola/Notarangelo – Malattie genetiche. Molecole e geni Cevenini – Microbiologia clinica Cevenini/Sambri – Microbiologia e Microbiologia clinica per le lauree triennali Cifuentes Delatte – Il laboratorio dell’urologo Cooper/Hausman – La cellula: un approccio molecolare Crepaldi – Trattato di medicina interna d’Ischia – La chimica organica in laboratorio De la Maza/Pezzlo/Shigei/Peterson - Atlante a colori di batteriologia medica Dizionario Medico Enciclopedico Duarte – Tests di funzionalità renale Duranti/Pagani – Enzimologia Fontana/Cornaglia – L’antibiogramma Fradà – Semeiotica medica Galli/Corsini/Marinovich – Tossicologia Galzigna – Principi di enzimologia Galzigna – Introduzione alla biochimica patologica Ganong – Fisiologia medica Garrett – Principi di biochimica Giannetti – Trattato di Dermatologia Gombos – Immunopatologia orale Greenspan/Forsham – Endocrinologia clinica Gulletta/Bertiato – Le biotecnologie in microbiologia diagnostica/Le infezioni trasmesse da zecche Hage/Carr - Chimica analitica ed analisi quantitativa Ishikawa/Kawai/Miyai – Dosaggi immunoenzimatici Laposata – Medicina di laboratorio Lewis – Genetica umana Janeway/Travers/Walport/Shlomchik – Immunobiologia Jawetz/Melnick/Adelberg – Microbiologia medica Mader – Biologia: l’essenziale Mandell – Atlante basilare delle malattie infettive Mandell/Diamond – Atlante delle infezioni fungine Mariuzzi – Anatomia patologica e correlazioni anatomo-cliniche Mazzi – Tecniche istologiche e istochimiche McCann/Foà/Smith/Conneally – Casi clinici di ematologia McMurry – Chimica organica Meduri/Notario – Testo-Guida alla Diagnostica clinica interattiva su CD-Rom Mentasti/Saini – Analisi chimica cromatografica Milanesi/Tani/Ciapini – Immunofissazione nella diagnostica di laboratorio Milanesi/Tani/Ciapini/Spandrio – Principi e metodi di indagine immunoelettroforetica delle proteine urinarie Monesi – Istologia Pearse – Istochimica Petrucci – Chimica generale Pier/Lyczak/Wetzler – Immunologia, infezione, immunità Pizzoferrato – Ormoni e dosaggi ormonali Pontieri – Patologia generale Quaglino/Cavallo/Forni – Le difese immunitarie Ravetto/Boccato – Atlante di citodiagnostica per aspirazione con ago sottile Regueiro – Immunologia Rizzotti/Pradella – I reticolociti Rhoades/Pflanzer – Fisiologia generale e umana Samaja – Biochimica per le lauree sanitarie Siliprandi/Tettamanti – Biochimica medica Spandrio – Principi e tecniche di chimica clinica Spandrio – Manuale di laboratorio Tietz – Guida clinica alle analisi di laboratorio Tozzoli/Bizzaro – La diagnostica di laboratorio nelle malattie autoimmuni sistemiche Vaira/Menegatti/Miglioli – Testo-Atlante a colori di diagnostica di laboratorio dell’infezione da Helicobacter Pylori Vaira/Menegatti/Miglioli – Testo-Atlante a colori di patologia da Helicobacter Pylori Verna – Diagnostica di laboratorio con i metodi della biologia molecolare Ziegler – Nutrizione TRATTATO ITALIANO DI MEDICINA DI LABORATORIO Fondato da A. Burlina Vol. I: Galzigna/Plebani – Biochimica clinica generale (N. Ed.) Vol. II: Spandrio – Biochimica clinica speciale (N. Ed.) Vol. III: Eyquem – Microbiologia clinica (aggiornato) Vol. IV: Dammacco – Immunologia clinica (N. Ed.) Vol. V: Cuneo/Castoldi/Rigolin/D’Onofrio/Zini – Diagnostica ematologica (N. Ed.) Vol. VI: Di Minno/Reali – Emocoagulazione ed emostasi – Immunoematologia e trasfusione (N. Ed.) Vol. VII: Panteghini – Interpretazione degli esami di laboratorio (N. Ed.) Vol. VIII: Boccato – Citopatologia diagnostica (N. Ed.) Vol. IX: Balestrieri/D’Amora/Giordano/Napoli/Pavan – Diagnostica molecolare nella medicina di laboratorio (N. Ed.) TRATTATO DI MEDICINA INTERNA Fondato da P. Larizza Vol. I: Tomo I – Generalità – Malattie del sangue e degli organi emopoietici Vol. I: Tomo II – Malattie del sangue, degli organi emopoietici e della milza – Coagulopatie – Immunologia clinica Vol. II: Malattie infettive Vol. III: Malattie delle ghiandole endocrine, del metabolismo e della nutrizione Vol. IV: Malattie osteoarticolari e del connettivo – Malattie da agenti fisici, chimici e ambientali Vol. V: Malattie dell’apparato respiratorio Vol. VI: Malattie del cuore e dei vasi Vol. VII: Malattie del rene, delle vie urinarie e dell’apparato genitale maschile Vol. VIII: Malattie del canale digerente Vol. IX: Malattie del fegato, delle vie biliari e del pancreas Vol. X: Malattie del sistema nervoso TRATTATO ITALIANO DI MEDICINA DI LABORATORIO Fondato da ANGELO BURLINA Volume V/1 TECNICHE DI LABORATORIO NELLA DIAGNOSTICA DELLE EMOPATIE Seconda edizione a cura di ANTONIO CUNEO GIANLUIGI CASTOLDI Professore Ordinario di Ematologia Dipartimento di Scienze Biomediche e Terapie Avanzate Azienda Ospedaliero Universitaria Arcispedale S. Anna - Ferrara Professore Ordinario di Ematologia Dipartimento di Scienze Biomediche e Terapie Avanzate Azienda Ospedaliero Universitaria Arcispedale S. Anna - Ferrara GIAN MATTEO RIGOLIN Ricercatore Universitario di Ematologia Dipartimento di Scienze Biomediche e Terapie Avanzate Azienda Ospedaliero Universitaria Arcispedale S. Anna - Ferrara Tutti i diritti sono riservati È VIETATA PER LEGGE LA RIPRODUZIONE IN FOTOCOPIA E IN QUALSIASI ALTRA FORMA È vietato riprodurre, archiviare in un sistema di riproduzione o trasmettere sotto qualsiasi forma o con qualsiasi mezzo elettronico, meccanico, per fotocopia, registrazione o altro, qualsiasi parte di questa pubblicazione senza autorizzazione scritta dell’Editore. Ogni violazione sarà perseguita secondo le leggi civili e penali. ISBN 978-88-299-2054-9 Stampato in Italia © 2012, by Piccin Nuova Libraria S.p.A. - Padova www.piccin.it PREFAZIONE Dopo la stesura della 1a edizione del V volume della Collana di Medicina di Laboratorio fondata da Angelo Burlina a cura di G.L. Castoldi e D. Quaglino e dedicata alle tecniche laboratoristiche in campo ematologico, è parso opportuno, nella nuova edizione a distanza di circa 10 anni, introdurre nuovi capitoli o aggiornarne alcuni di base. Ne sono scaturiti due volumi (l’uno a cura di Cuneo, Castoldi e Rigolin, dedicato alla diagnostica del midollo osseo, l’altro a cura di D’Onofrio, Zini e Rigolin, dedicato allo studio del sangue periferico), pressoché totalmente rinnovati e comprendenti numerose nuove tecniche di laboratorio applicate alla diagnostica delle emopatie anche in accordo con i criteri delle recenti classificazioni internazionali. Ci riferiamo in particolare, per quanto riguarda il I volume, alla citogenetica molecolare di numerose emopatie sistemiche, ai principali aspetti istopatologici, corredati dall’uso di anticorpi monoclonali, alla applicazione di microarrays o alle tecniche di valutazione dei riarrangiamenti delle Immunoglobuline, ai vari aspetti del processo infiammatorio, ai nuovi concetti sui quadri iporigenerativi ed in particolare sulla anemia aplastica. Questi capitoli completamente nuovi sono frutto della esperienza maturata lungo diversi anni da ricercatori che hanno acquisito prestigio e rilevanza nei singoli campi, anche con prolungati soggiorni presso istituzioni estere. L’aspetto più significativo di questo volume riguarda la diagnostica integrata delle singole emopatie che, partendo dai classici aspetti morfologici, introduce progressivamente aspetti di citochimica, cromosomici, molecolari, del fenotipo e della microscopia elettronica. Sebbene non tutte queste metodiche siano di immediata applicabilità, tuttavia l’analisi in sequenza delle stesse consente una valorizzazione di numerosi dettagli utili alla diagnosi. Sono stati mantenuti ovviamente alcuni capitoli quali quello dedicato all’agoaspirato midollare ed alla biopsia midollare o alla composizione classica del midollo osseo, anche se opportunamente aggiornati, mentre la gran parte dei capitoli è di nuova introduzione in rapporto alle mutate esigenze diagnostiche maturate negli ultimi anni. A questo riguardo si è fatto ricorso a numerose nuove figure e schemi interpretativi che integrano il testo in modo da dare al lettore una immediata comprensione degli argomenti. Non va dimenticata da ultimo la particolare dedizione della casa editrice Piccin alla composizione di questo volume che non ha risparmiato energie nella risoluzione di numerosi problemi legati alla stampa di un volume così complesso. A. Cuneo G.L.Castoldi G.M. Rigolin AUTORI Dott. Andrea Bacigalupo Reparto di Ematologia Ospedale San Martino - Genova Dott. Maurizio Bergami Dirigente I Livello U.O. di Nefrologia Arcispedale S. Anna di Ferrara Prof. Gianluigi Castoldi già Direttore Cattedra Ematologia Dipartimento Scienze Biomediche e Terapie Avanzate Sezione di Ematologia e Fisiopatologia dell’Emostasi Università degli Studi di Ferrara Dott. Luigi Catizone Direttore U.O. di Nefrologia Arcispedale S. Anna di Ferrara Dott. Francesco Cavazzini Ricercatore Sezione Ematologia Arcispedale S. Anna Università degli Studi di Ferrara Prof. Francesco Di Virgilio P.O. Patologia Clinica Dipartimento di Medicina Sperimentale e Diagnostica Sezione di Paologia Generale Università degli Studi di Ferrara Prof. Giuseppe D’Onofrio P.A. Patologia Clinica Università Cattolica del Sacro Cuore di Roma Prof. Vincenzo Liso Presidente C.d.L. in Medicina e Chirurgia P.O. Ematologia Dipartimento di Anatomia Patologica Università degli Studi di Bari Cattedra e Servizio di Ematologia Azienda Policlinico di Bari Prof. Shaun Mc Cann P.E. di Ematologia, FRCPath, FRCPI Haematology Department Trinity College University di Dublino Prof. Luigi Cavazzini P.O. Anatomia Patologica Dipartimento di Medicina Sperimentale e Diagnostica Sezione di Anatomia, Istologia e Citologia Patologica Università degli Studi di Ferrara Dott. Massimo Negrini Ricercatore Dipartimento di Medicina Sperimentale e Diagnostica Università degli Studi di Ferrara Dott.ssa Maria Ciccone Assegnista di Ricerca Sezione di Ematologia Arcispedale S. Anna Università degli Studi di Ferrara Dott. Andrea Piccin Specialista in Ematologia, MD, PhD Reparto di Ematologia e Centro Trapianti di Midollo Osseo Ospedale S. Maurizio di Bolzano Prof. Antonio Cuneo P.O. Ematologia Direttore Sezione di Ematologia Arcispedale S. Anna Università degli Studi di Ferrara Dott. Giorgio Ricci Ricercatore Segretario UNIGASTRO Arcispedale S. Anna Università degli Studi di Ferrara Dott.ssa Melissa Dabusti Contrattista Sezione di Ematologia Arcispedale S. Anna Università degli Studi di Ferrara Prof. Franco Rigolin già Direttore del Laboratorio di Analisi Arcispedale S. Anna Università degli Studi di Ferrara VIII AUTORI Dott. Gian Matteo Rigolin Ricercatore Dipartimento Scienze Biomediche e Terapie Avanzate Sezione di Ematologia e Fisiopatologia dell’Emostasi Università degli Studi di Ferrara Dott. Paolo Tomasi Dirigente I Livello Sezione Ematologia Arcispedale S. Anna Università degli Studi di Ferrara Dott.ssa Gloria Russo Dirigente I Livello U.O. di Nefrologia Arcispedale S. Anna di Ferrara Prof.ssa Gina Zini P.A. Patologia Clinica Università Cattolica del Sacro Cuore di Roma Prof.ssa Giorgina Specchia P.O. Ematologia Cattedra e Servizio di Ematologia Azienda Policlinico Bari Università degli Studi di Bari Vol. V/1 INDICE GENERALE PARTE PRIMA L’esame del midollo osseo. Tecniche di laboratorio 1. Metodi di prelievo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .3 G.M. Rigolin, R. Spanedda, G.L. Castoldi Agoaspirato midollare . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .3 Indicazioni all’agobiopsia midollare . . . . . . . . . . .3 Tecnica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .3 Principio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .3 Strumentazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .3 Sede del prelievo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .4 Modalità del prelievo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .4 Esame dell’aspirato midollare . . . . . . . . . . . . . . . .6 Biopsia ossea . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .8 Tecnica del prelievo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .8 Sede del prelievo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .8 Strumentazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .8 Procedimento . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .9 Preparazione delle sezioni . . . . . . . . . . . . . . . . . . .9 Esame della biopsia ossea . . . . . . . . . . . . . . . . . .11 Bibliografia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .12 2. Composizione cellulare del midollo osseo . . . .13 G.L. Castoldi, V. Liso, G.M. Rigolin Introduzione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .13 Compartimento stromale midollare (microambiente osteo-midollare) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .14 Compartimento emopoietico . . . . . . . . . . . . . . . . . .14 Serie eritroide . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .17 Proeritroblasto . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .17 Eritroblasto basofilo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .18 Eritroblasto policromatofilo . . . . . . . . . . . . . .18 Eritroblasto ortocromatico . . . . . . . . . . . . . . . .18 Reticolocito . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .18 Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .18 Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .20 Immunologia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .20 Eritrocito . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .20 Serie granulocitaria . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .21 Mieloblasto . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .21 Promielocito . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .22 Mielocito . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .22 Metamielocito . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .22 Granulocito neutrofilo . . . . . . . . . . . . . . . . . . .22 Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .22 Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .22 Immunologia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .23 Principali anomalie morfologiche dei granulociti neutrofili . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .23 Serie eosinofila . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .24 Promielocito eosinofilo . . . . . . . . . . . . . . . . . . .24 Mielocito e metamielocito eosinofilo . . . . . . . .24 Eosinofilo maturo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .24 Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .24 Serie basofila e mastcellule . . . . . . . . . . . . . . . . . . .24 Promielocito, mielocito e metamielocito basofilo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .25 Polimorfonucleato basofilo . . . . . . . . . . . . . . . .25 Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .25 Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .25 Mastcellule . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .25 Serie monocito-macrofagica . . . . . . . . . . . . . . . . . .25 Monoblasto . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .26 Promonocito . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .26 Monocito . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .26 Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .26 Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .26 Immunofenotipo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .26 Macrofago e cellula di Langerhans . . . . . . . . .26 Serie megacariocitaria . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .27 Megacarioblasto . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .27 Promegacariocito . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .28 Megacariocito . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .28 Piastrine . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .28 Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .30 Immunologia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .30 Serie linfoide . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .30 Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .30 Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .30 Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .30 Immunologia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .30 Linfociti B . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .30 Linfociti T . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .31 Terza popolazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .31 Microscopia ottica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .31 Immunologia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .32 Plasmacellula . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .32 Microscopia ottica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .32 Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . . .32 Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .34 Immunologia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .34 Cellule non emopoietiche . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .34 Osteoblasti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .34 Adipociti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .34 Osteoclasti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .34 Strutture vascolari . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .34 Bibliografia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .34 X INDICE GENERALE 3. Tecniche d’indagine del midollo osseo . . . . .35 A. Tecniche citochimiche . . . . . . . . . . . . . . . . . .35 P. Tomasi Mieloperossidasi . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .35 Principio del metodo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .35 Reagenti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .36 Metodo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .36 Risultati . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .36 Interpretazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .37 Esterasi leucocitarie . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .37 α-Naftil acetato esterasi . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .37 Reagenti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .37 Metodo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .38 Risultati . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .38 Naftol ASD-acetato: metodo con il fast blue bb .39 Reagenti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .39 Procedura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .39 α-Naftil-acetato esterasi acida: metodo con la pararosanilina esazotizzata . . . . . . . . . . . . . . . .40 Reagenti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .40 Procedura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .40 α-Naftil-butirrato . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .40 Reagenti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .40 Procedura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .40 Naftol AS-D cloroacetato esterasi (chlor e) . . . . .40 Reagenti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .40 Metodo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .40 Risultati . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .40 Metodo con il Fast Garnet per strisci e sezioni . .41 Reagenti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .41 Procedura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .41 Colorazione con il Sudan black B . . . . . . . . . . . .41 Principio del test . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .41 Sudan Nero B . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .42 Reagenti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .42 Metodo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .42 Interpretazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .42 Colorazione con l’Acido Periodico Schiff (PAS) 42 Principio del test . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .42 Reagenti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .43 Tecnica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .43 Interpretazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .43 Fosfatasi Alcalina Leucocitaria . . . . . . . . . . . . . .44 Principio del metodo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .44 Reagenti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .44 Preparazione delle soluzioni . . . . . . . . . . . . . . .44 Soluzioni tampone . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .44 Procedure . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .44 Risultati . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .44 Calcolo dei risultati . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .45 Commenti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .45 Metodo del Colorante Azoico; Naftol AS-MX Fosfato . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .45 Principio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .45 Reagenti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .45 Preparazione delle soluzioni . . . . . . . . . . . . . . .45 Procedura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .46 Risultati . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .46 Vol. V/1 Calcolo del punteggio ed interpretazione . . . . .46 Commenti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .46 Fosfatasi acida . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .46 Principio del metodo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .47 Fast Garnet GBC Method . . . . . . . . . . . . . . . . . . .47 Reagenti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .47 Procedura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .47 Fast Red ITR method . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .47 Reattivi . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .47 Procedura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .48 Metodo con la Pararosanilina . . . . . . . . . . . . . . . .48 Reagenti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .48 Procedura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .48 Interpretazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .48 Quadri interpretativi delle principali rezioni citochimiche . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .48 Reazione al Blue di Prussia . . . . . . . . . . . . . . . . .49 Finalità del test . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .49 Principio del test . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .49 Reagenti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .50 Procedura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .50 Interpretazione dei risultati . . . . . . . . . . . . . . . .50 Blue di Toluidina . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .50 Finalità del test . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .50 Principio del metodo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .50 Metacromasia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .50 Preparazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .50 Procedura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .50 Risultato . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .51 Bibliografia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .51 B. Tecniche immunocitochimiche ed immunoistochimiche in ematologia. L’immunoperossidasi e l’immunofosfatasi alcalina . . . . . . . . . . . . . .53 P. Tomasi Trattamenti dei campioni citologici . . . . . . . . . . .53 Fase di preparazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .53 Fissazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .53 Metodi con coniugati anticorpo-enzima . . . . . .54 Metodi indiretti con complessi immuni anticorpo-enzima . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .54 Metodi indiretti con coniugati non anticorpali . . .55 Sistema con complessi avidina-enzima . . . . . .55 Sistemi con complessi ABC . . . . . . . . . . . . . . .55 Doppia colorazione immunoenzimatica . . . . . . . .55 Sviluppo della reazione colorimetrica . . . . . . . . .56 Rivelazione della perossidasi . . . . . . . . . . . . . .56 Rivelazione della fosfatasi alcalina . . . . . . . . .56 Colorazione immunoenzimatica degli strisci e delle sezioni istologiche secondo la procedura APAAP . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .56 Preparazione degli strisci cellulari . . . . . . . . . .56 Fissazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .57 Preparazione delle sezioni tissutali . . . . . . . . . .57 Fissazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .57 Colorazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .57 Reagenti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .58 Bibliografia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .58 Vol. V/1 XI INDICE GENERALE C. Allestimento di campioni cellulari per l’osservazione in microscopia elettronica a trasmissione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .59 P. Tomasi Fissazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .59 Post-fissazione, deidratazione, impregnazione, inclusione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .60 Metodi di preparazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .60 Sezione e colorazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .61 Contrasto . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .61 Citochimica ultrastrutturale . . . . . . . . . . . . . . . . .61 Fosfatasi acida . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .62 Esterasi . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .62 Metodo dell’azo-indoxyl per la dimostrazione dell’esterasi . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .62 Alpha naphtyl acetate esterase (ANAE) . . . . . .62 Citocromo ossidasi (con il metodo DAB) . . . .63 Perossidasi endogene . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .63 5’-nucleotidasi (Naidoo e Pratt-1954, Uusitalo-1981) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .64 Immunoelettronmicroscopia . . . . . . . . . . . . . . . . .64 D. Metodiche di pre-embedding su cellule isolate. Marcatura di antigeni di superficie su cellule isolate . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .66 P. Tomasi Metodica di singola marcatura con perossidasi . .66 Metodica di singola marcatura con particelle di oro colloidale . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .66 Metodica di doppia marcatura con particelle di oro colloidale di diametro diverso (metodo indiretto e metodo diretto) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .67 Metodica di doppia marcatura oro colloidaleperossidasi (due metodi indiretti anticorpi della stessa specie ma di classe diversa) . . . . . . . . . . . .67 Metodica di doppia marcatura con particelle di oro colloidale di diverso diametro (metodo indiretto e metodo streptavidina-biotina) . . . . . . . .67 Tecnica di immunomarcatura in post embedding 68 Immunocitochimica immunostrutturale . . . . . . . .68 Immuno-tem-mieloperossidasi (MPPO) . . . . . . .68 Microscopia a scansione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .69 Tecniche di preparazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . .69 Immunoelettronmicroscopia a scansione . . . . . . .70 Immunocitochimica a scansione . . . . . . . . . . . . .71 Procedura per il rilievo della fosfatasi acida . .71 Procedura per il rilievo della mieloperossidasi 71 Bibliografia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .71 E. Biopsia osteomidollare . . . . . . . . . . . . . . . . . .73 L. Cavazzini Processazione e colorazione della biopsia osteomidollare . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .73 Adeguatezza della biopsia osteo-midollare . . . . .75 Cellularità e popolazioni emopoietiche . . . . . . . .78 Alterazioni di significato patologico . . . . . . . . . .87 Esame della biopsia osteomidollare . . . . . . . . . .102 Bibliografia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .105 F. Diagnostica molecolare . . . . . . . . . . . . . . . .106 M. Negrini Introduzione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .106 Metodiche molecolari nella diagnosi di leucemie e linfomi . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .106 Southern Blot . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .106 Reazione polimerasica a catena (PCR) . . . . . .107 Nested PCR . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .109 Analisi dei frammenti . . . . . . . . . . . . . . . . . . .109 Analisi del chimerismo con microsatelliti . . .110 PCR real time . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .110 Analisi di sequenza . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .110 Screening di mutazioni . . . . . . . . . . . . . . . . . .110 Uso delle tecniche molecolari in diagnostica e nel follow-up . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .111 Tecniche molecolari in diagnostica . . . . . . . . .111 Controlli di remissione con diverse tecniche PCR . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .113 Campionamento del materiale . . . . . . . . . . . .113 Diagnostica molecolare nella leucemia mieloide acuta (AML) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .114 Rilevazione di geni di fusione . . . . . . . . . . . .114 Mutazioni molecolari nella leucemia mieloide acuta (AML) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .114 Controlli di remissione della AML . . . . . . . . .115 Diagnostica molecolare nella sindrome mielodisplastica (MDS) . . . . . . . . . . . . . . . . . . .115 Rilevazione di delezioni nella MDS . . . . . . . .115 Rilevazione di geni di fusione nella MDS . . .116 Marcatori di follow up della MDS . . . . . . . . .116 Diagnostica molecolare nella leucemia mieloide cronica (CML) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .116 Resistenza all’Imatinib nelle leucemie positive a BCR-ABL . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .117 Controlli di follow-up nella CML . . . . . . . . .117 Altre patologie mieloproliferative . . . . . . . . .117 Diagnostica molecolare nella leucemia linfatica acuta (LLA) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .117 Diagnostica molecolare della LLA . . . . . . . . .117 Mutazioni molecolari nella LLA . . . . . . . . . .118 Controlli di follow-up nella LLA . . . . . . . . . .118 Diagnostica molecolare nella leucemia linfatica cronica (LLC) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .119 Delezioni cromosomiche nella LLC . . . . . . . .119 Riarrangiamento di geni nella LLC . . . . . . . .119 Iper-mutazione dei geni VH nella LLC . . . . .119 Leucemia a cellule pelose (HCL) . . . . . . . . . .119 Diagnostica molecolare nei linfomi . . . . . . . . . .119 Linfoma mantellare (MCL) . . . . . . . . . . . . . .119 Linfoma follicolare (FL) . . . . . . . . . . . . . . . . .119 Linfoma MALT . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .120 Linfoma linfoplasmocitico/immunocitoma (LPL) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .120 Linfoma di Burkitt (BL) . . . . . . . . . . . . . . . . .120 Mieloma multiplo (MM) . . . . . . . . . . . . . . . . . .120 Bibliografia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .121 XII G. INDICE GENERALE Impiego di microarray per l’analisi dell’espressione genica . . . . . . . . . . . . . . . . .123 M. Negrini Caratteristiche principali nella tecnologia microarray 123 Tipologie di Array . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .123 Caratteristiche delle sonde . . . . . . . . . . . . . . . . .123 Marcatura degli acidi nucleici . . . . . . . . . . . . . .124 Protocollo per analisi dell’espressione di mRNA .125 Marcatura a cRNA diretta - Un colore (Cy3) Oligonucleotide High density microarray . . . . .125 Sintesi del cDNA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .126 Amplificazione a cRNA . . . . . . . . . . . . . . . . . . .126 Purificazione del cRNA marcato . . . . . . . . . . . .127 Quantificazione del cRNA marcato . . . . . . . . . .127 Frammentazione del cRNA . . . . . . . . . . . . . . . .127 Ibridizzazione e lavaggi . . . . . . . . . . . . . . . . . . .128 Acquisizione immagine ibridazione mediante scanner confocale a fluorescenza . . . . . . . . . . . .128 Protocollo per l’analisi dell’espressione di microRNA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .128 Marcatura del campione di RNA . . . . . . . . . . . .130 Defosforilazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .130 Ligazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .130 Purificazione e concentrazione del marcato . . . .130 Ibridazione, lavaggi e acquisizione dell’immagine 130 Bibliografia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .131 H. Analisi del riarrangiamento clonale VDJ e mutazioni somatiche della regione IGVH nella leucemia linfatica cromatica . . . . . . . .132 M. Negrini Diversità Anticorpale . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .133 Analisi della clonalità dei linfociti B . . . . . . . . .134 Procedura sperimentale basata su PCR per l’analisi della regione VDJ in campioni LLC . .135 PARTE SECONDA Diagnosi integrata nelle principali emopatie 1. Anemie . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .143 G.L. Castoldi, V. Liso, L. Cavazzini, A. Cuneo, G. Specchia, P. Tomasi, G.M. Rigolin Definizione e classificazione . . . . . . . . . . . . . . .143 Anemia aplastica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .143 Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .143 Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .143 Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .145 Immunologia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .145 Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .145 Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .145 Anemia delle malattie croniche . . . . . . . . . . . . .146 Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .146 Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .146 Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .146 Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .146 Vol. V/1 Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .146 Anemie diseritropoietiche (CDA) . . . . . . . . . . .146 Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .146 Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .146 Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .147 Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .147 Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .147 Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .147 CDA I . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .147 Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .147 Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .147 Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . .147 CDA II (HEMPAS) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .148 Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .148 Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . .148 Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .148 CDA III . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .148 Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .148 Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .148 Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . .148 Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .148 Altri tipi di CDA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .148 Anemia megaloblastica . . . . . . . . . . . . . . . . . . .148 Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .148 Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .149 Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .150 Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .150 Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . .152 Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .152 Anemia sideropenica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .152 Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .152 Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .152 Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .154 Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .155 Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .155 Diagnosi differenziale . . . . . . . . . . . . . . . . . . .155 Talassemia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .155 Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .155 Genetica molecolare . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .155 Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .156 Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .156 Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .157 Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . .157 Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .157 Anemia drepanocitica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .157 Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .157 Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .158 Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .158 Sferocitosi ereditaria . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .158 Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .158 Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .159 Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .159 Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .159 Fisiopatologia della sferocitosi . . . . . . . . . . . .160 Ellissocitosi ereditaria comune . . . . . . . . . . . . . .160 Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .160 Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .160 Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .160 Piropoichilocitosi ereditaria . . . . . . . . . . . . . . . .160 Ellissocitosi sferocitica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .160 Vol. V/1 XIII INDICE GENERALE Alterazioni citogenetiche e Biologia molecolare . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .175 Policitemia vera (PV) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .176 Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .176 Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .176 Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .176 Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .177 Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .177 Biologia molecolare . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .178 Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .180 Criteri WHO per la diagnosi di PV . . . . . . . .180 Criteri maggiori . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .180 Criteri minori . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .180 Trombocitemia essenziale . . . . . . . . . . . . . . . . .180 Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .180 Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .180 Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .180 Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .181 Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .181 Biologia molecolare . . . . . . . . . . . . . . . . . . .181 Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .181 Criteri WHO per la diagnosi di TE . . . . . . .182 Mielofibrosi idiopatica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .182 Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .182 Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .182 Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .182 Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .183 Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .183 Biologia molecolare . . . . . . . . . . . . . . . . . . .183 Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .184 Criteri WHO per la diagnosi di MI . . . . . . .184 Criteri maggiori . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .184 Criteri minori . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .184 Ovalocitosi del Sud-Est Asiatico . . . . . . . . . . . .160 Anemie emolitiche da difetto enzimatico . . . . .161 Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .161 Anemia emolitica da carenza di glucoso-6-fosfato deidrogenasi (Shunt dei pentoso-fosfati) . . . . . .161 Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .161 Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .161 Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .161 Anemia emolitica da carenza di piruvato chinasi (glicolisi anaerobia) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .162 Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .162 Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .162 Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .162 Emoglobinuria parossistica notturna (EPN) . . . .162 Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .162 Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .162 Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .162 Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .162 Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .163 Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .163 Anemia mieloftisica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .163 Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .163 Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .164 Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .164 2. Neoplasie mieloproliferative . . . . . . . . . . . .165 G.L. Castoldi, V. Liso, L. Cavazzini, A. Cuneo, G. Specchia, P. Tomasi, G.M. Rigolin Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .165 Leucemia mieloide cronica (LMC) . . . . . . . . . .165 Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .165 Fase florida . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .165 Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .165 Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .165 Midollo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .165 Fase accelerata . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .166 Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .166 Midollo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .166 Criteri WHO per la definizione di LMC in fase accelerata . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .166 Crisi blastica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .167 Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .167 Midollo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .167 Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .167 Immunologia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .167 Criteri WHO per la definizione di LMC in fase blastica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .168 Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .168 Mutazioni di bcr-abl . . . . . . . . . . . . . . . . . . .172 Test biochimici . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .172 Disordini eosinofili . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .172 Leucemia cronica eosinofila . . . . . . . . . . . . . .172 Sindrome ipereosinofila idiopatica (HES) . . .173 Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .174 Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .174 Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .175 Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . .175 3. Neoplasie mielodisplastiche/ mieloproliferative . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .185 G.L. Castoldi, V. Liso, L. Cavazzini, A. Cuneo, G. Specchia, P. Tomasi, G.M. Rigolin Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .185 Leucemia mielomonocitica cronica (CMML) . .185 RARS-T . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .186 4. Sindromi mielodisplastiche (MDS) . . . . . .187 G.L. Castoldi, V. Liso, L. Cavazzini, A. Cuneo, G. Specchia, P. Tomasi, G.M. Rigolin Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .187 Diagnosi . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .188 Sangue periferico e midollo osseo . . . . . . . . .188 Blasti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .190 Sideroblasti ad anello . . . . . . . . . . . . . . . . . . .191 Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .191 Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . .193 Sindrome 5q- . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .193 Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .193 SMD e prognosi . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .198 XIV 5. INDICE GENERALE LAM mielomonocitica con eosinofilia (corrisponde a M4 Eos FAB) . . . . . . . . . . . . . . .224 Sangue periferico e midollo . . . . . . . . . . . . . .224 Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .224 Immunofenotipo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .224 Citogenetica e biologia molecolare . . . . . . . .224 LAM monocitica/monoblastica (M5) . . . . . . . . .225 Sangue periferico e midollo . . . . . . . . . . . . . .225 Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .226 Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . .226 Immunofenotipo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .227 Forme varianti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .227 Test biochimici . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .227 Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .227 LAM monoblastica con eritrofagocitosi . . . . . .228 Sangue periferico e midollo . . . . . . . . . . . . . .228 Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .228 Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . .233 Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .233 Leucemia acuta eritroide (corrisponde a M6 AFB) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .233 Sangue periferico e midollo . . . . . . . . . . . . . .233 Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .234 Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . .234 Immunofenotipo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .236 Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .236 Leucemia acuta megacarioblastica (corrisponde a M7 FAB) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .236 Sangue periferico e midollo . . . . . . . . . . . . . .236 Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .238 Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . .239 Immunofenotipo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .239 Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .239 LAM con alterazioni di tipo mielodisplastico . .240 Neoplasie mieloidi correlate a terapie . . . . . . . .244 Leucemie bifenotipiche . . . . . . . . . . . . . . . . . . .244 Leucemie bilineari . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .245 Leucemia di origine ambigua e WHO 2008 . . .245 Leucemie acute mieloidi (LAM) . . . . . . . . .199 G.L. Castoldi, V. Liso, L. Cavazzini, A. Cuneo, G. Specchia, P. Tomasi, G.M. Rigolin Proposte della WHO per la classificazione delle LAM . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .199 Diagnosi di LAM . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .200 Campioni richiesti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .200 Valutazione dei blasti . . . . . . . . . . . . . . . . . . .200 Valutazione della filiera di appartenenza dei blasti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .201 Valutazione delle caratteristiche genetiche . . .201 Refertazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .201 LAM con anomalie citogenetiche ricorrenti . . .201 LAM con minima differenziazione (corrisponde a M0 FAB) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .202 Sangue periferico e midollo osseo . . . . . . . . .202 Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .202 Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . .202 Immunofenotipo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .203 Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .203 LAM senza maturazione (corrisponde a M1 FAB) 204 Sangue periferico e midollo osseo . . . . . . . . .204 Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .204 Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . .205 Immunofenotipo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .205 Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .205 LAM con maturazione (corrisponde a M2 FAB) .206 Sangue periferico e midollo . . . . . . . . . . . . . .206 Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .206 Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . .206 Immunofenotipo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .206 LAM con t(8;21)(q22;q22); RUNX1RUNX1T1 (AML1-ETO) . . . . . . . . . . . . . . . .206 LAM con basofilia (corrisponde a M2 baso FAB) .207 Sangue periferico e midollo osseo . . . . . . . . .207 Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .211 Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . . .211 Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .211 Leucemia acuta promielocitica (LAP) (corrisponde a M3) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .214 Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .214 Sangue periferico e midollo . . . . . . . . . . . . . .214 Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .216 Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . .217 Immunofenotipo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .217 Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .217 Test biochimici . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .218 Leucemia acuta a cellule mieloidi/Natural killer . .218 Sangue periferico e midollo . . . . . . . . . . . . . .218 Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .219 Immunofenotipo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .219 Citogenetica e biologia molecolare . . . . . . . .219 LAM mielomonocitica (corrisponde a M4 FAB)219 Sangue periferico e midollo . . . . . . . . . . . . . .219 Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .222 Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . .222 Immunofenotipo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .222 Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .222 Test biochimici . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .224 Vol. V/1 6. Malattie del sistema monocito-macrofagico 247 G.L. Castoldi, V. Liso, L. Cavazzini, A. Cuneo, G. Specchia, P. Tomasi, G.M. Rigolin Granuloma da corpo estraneo . . . . . . . . . . . . . . .247 Da processi infettivi e parassitari . . . . . . . . . . . .247 Sindromi emofagocitiche . . . . . . . . . . . . . . . . . .247 Malattia di Rosai-Dorfman . . . . . . . . . . . . . . . . .247 Tesaurismosi . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .248 Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .248 Malattia di Gaucher . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .248 Malattia di Niemann-Pick . . . . . . . . . . . . . . . .249 Istiocitosi blu mare . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .249 Sarcoma istiocitico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .250 Istiocitosi a cellule di Langerhans (Istiocitosi X) .250 7. Disordini reattivi della filiera linfoide (linfoadenopatie reattive) . . . . . . . . . . . . . .251 G.L. Castoldi, V. Liso, L. Cavazzini, A. Cuneo, G. Specchia, P. Tomasi, G.M. Rigolin Mononucleosi e sindromi mononucleosiche . . .251 Vol. V/1 INDICE GENERALE Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .251 Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .251 Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . .251 Immunologia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .251 Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .251 Sarcoidosi . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .252 Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .252 Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .252 Diagnosi . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .252 8. Disordini neoplastici linfoproliferativi . . . .253 G.L. Castoldi, V. Liso, L. Cavazzini, A. Cuneo, G. Specchia, P. Tomasi, G.M. Rigolin Introduzione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .253 Disordini ematologici linfoproliferativi cronici ad interessamento periferico . . . . . . . . . . . . . . . .254 Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .254 Leucemia linfatica cronica a cellule B (LLC) . .255 Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .255 Stadiazione della LLC . . . . . . . . . . . . . . . . . .255 Stadiazione di Rai . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .255 Stadiazione di Binet . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .255 Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .255 Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .256 Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . .256 Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .256 Immunologia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .258 Citogenetica e biologia molecolare . . . . . . . .258 Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .259 Evoluzione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .259 Leucemia prolinfocitica a cellule B (LPL-B) . .260 Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .260 Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .260 Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .260 Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .261 Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . .261 Immunologia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .261 Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .261 Hairy cell leukemia (HCL) . . . . . . . . . . . . . . . . .261 Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .261 Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .262 Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .263 Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .263 Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . .263 Immunologia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .264 Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .264 Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .264 Variante di Cawley (tipo II) . . . . . . . . . . . . . .265 Variante di Katayama . . . . . . . . . . . . . . . . . . .265 9. Gammapatie monoclonali . . . . . . . . . . . . . .266 G.L. Castoldi, V. Liso, L. Cavazzini, A. Cuneo, G. Specchia, P. Tomasi, G.M. Rigolin Mieloma multiplo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .266 Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .266 Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .268 Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .270 Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .270 XV Immunofenotipo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .270 Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . .271 Istologia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .271 Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .271 Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .278 Leucemia plasmacellulare . . . . . . . . . . . . . . . . .279 Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .279 Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .279 Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . .280 Macroglobulinemia di Waldenström (MW) . . . .280 Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .280 Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .280 Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .281 Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .281 Immunologia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .281 Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .281 Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .281 Diagnosi differenziale . . . . . . . . . . . . . . . . . . .282 10. Linfomi non Hodgkin a possibile componente leucemica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .283 G.L. Castoldi, V. Liso, L. Cavazzini, A. Cuneo, G. Specchia, P. Tomasi, G.M. Rigolin Linfoma follicolare . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .285 Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .285 Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .285 Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .285 Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .286 Linfoma mantellare . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .286 Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .286 Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .288 Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .288 Istopatologia linfonodi . . . . . . . . . . . . . . . . . .289 Immunofenotipo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .289 Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .289 Linfoma diffuso a grandi cellule B . . . . . . . . . .291 Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .291 Immunofenotipo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .291 Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .291 Linfoma anaplastico CD30+ a grandi cellule (T o null) sistemico primitivo . . . . . . . . . . . . . .291 Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .291 Immunofenotipo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .291 Linfoma di Burkitt . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .293 Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .293 Istopatologia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .293 Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .293 Linfoma splenico della zona marginale . . . . . . .293 Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .293 Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .296 Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .296 Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .296 Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . .296 Immunologia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .296 Citogenetica e indagini molecolari . . . . . . . . .298 11. Linfoma di Hodgkin (LH) . . . . . . . . . . . . . .299 G.L. Castoldi, V. Liso, L. Cavazzini, A. Cuneo, G. Specchia, P. Tomasi, G.M. Rigolin Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .299 XVI INDICE GENERALE Inquadramento anatomopatologico: classificazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .299 LH a predominanza linfocitaria nodulare . .299 LH classico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .299 Istopatologia midollare . . . . . . . . . . . . . . . . . .302 Esami di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .302 Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .302 14. Piastrinopenie . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .322 G.L. Castoldi, V. Liso, L. Cavazzini, A. Cuneo, G. Specchia, P. Tomasi, G.M. Rigolin Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .322 Porpora trombocitopenica idiopatica cronica (malattia di Werlhof) (PTI) . . . . . . . . . . . . . . . .322 Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .322 Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .322 Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .323 Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . .324 Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .324 Porpora trombotica trombocitopenica (sindrome di Moschowitz) (TTP) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .324 Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .324 Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .325 Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .325 Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .325 Diagnosi differenziale . . . . . . . . . . . . . . . . . . .325 Bibliografia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .326 12. Neoplasie a cellule t mature . . . . . . . . . . . .303 G.L. Castoldi, V. Liso, L. Cavazzini, A. Cuneo, G. Specchia, P. Tomasi, G.M. Rigolin Leucemia prolinfocitica T (LPL-T) . . . . . . . . . .303 Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .303 Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .303 Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .303 Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . .303 Immunologia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .303 Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .304 Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .304 Leucemia a grandi linfociti granulari (LGLG) .305 Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .305 Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .305 Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .305 Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . .305 Immunologia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .305 Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .305 Citogenetica e biologia molecolare . . . . . . . .306 Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .306 Adult T-cell leukemia-lymphoma (A-TLL) . . . .306 Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .306 Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .306 Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .307 Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .307 Immunologia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .307 Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .307 Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .307 Micosi fungoide (MF) e sindrome di Sézary (SS) 307 Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .307 Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .307 Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .308 Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . .308 Immunologia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .308 Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .308 Interessamento cutaneo . . . . . . . . . . . . . . . . . .308 13. Leucemia linfoblastica acuta . . . . . . . . . . .310 G.L. Castoldi, V. Liso, L. Cavazzini, A. Cuneo, G. Specchia, P. Tomasi, G.M. Rigolin Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .310 Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .310 Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .310 Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .310 Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . .313 Immunofenotipo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .313 Citogenetica e Genetica Molecolare . . . . . . . .313 Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .321 Vol. V/1 PARTE TERZA Disordini dell’emoglobina 1. Le emoglobinopatie . . . . . . . . . . . . . . . . . . .331 F. Rigolin Inquadramento generale delle emoglobinopatie . .331 Introduzione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .331 Emoglobine con ridotta solubilità . . . . . . . . . . .332 Hb S . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .332 Trait falcemico eterozigote (β genotipo AS) 333 Anemia falciforme o stato omozigote (β genotipo SS) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .333 Emoglobine instabili . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .333 Emoglobine con alterata affinità per l’O2 . . . . .333 Emoglobine M . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .334 Metaemoglobinemia congenita . . . . . . . . . . . . .334 Anomalie acquisite . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .334 Intossicazioni da CO . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .334 Metaemoglobinemia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .334 Solfoemoglobinemia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .334 Sindromi talassemiche . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .335 β-talassemie . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .335 β-talassemie complesse . . . . . . . . . . . . . . . . . .336 α-talassemie . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .336 Indagini per lo screening e la diagnosi delle emoglobinopatie . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .336 Parametri ematologici . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .337 Prelievo di sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . .337 Striscio periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .337 Emolisati . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .337 Sicurezza di qualità . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .337 Elettroforesi dell’emoglobina . . . . . . . . . . . . . . .338 Acetato di cellulosa a pH alcalino . . . . . . . . .338 Procedimento . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .338 Interpretazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .338 Elettroforesi su agar citrato pH 6,0-6,2 . . . . .339 Reagenti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .339 Procedimento . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .339 Vol. V/1 Elettroforesi in gel di agarosio . . . . . . . . . . . .339 Cromatografia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .339 Automated high performance liquid chromatography (HPLC) . . . . . . . . . . . . . . . .340 Principio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .340 Interpretazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .340 Isoelettrofocalizzazione (IEF) . . . . . . . . . . . . . .341 Separazione delle catene globiniche . . . . . . . . .341 Elettroforesi . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .341 HPLC . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .341 Sintesi in vitro delle catene globiniche . . . . . . .341 Esami speciali . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .342 Esami per evidenziare la presenza di Hb S . .342 Test di falcizzazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .342 Test di solubilità . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .342 Reagenti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .342 Procedimento . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .342 Test per evidenziare le emoglobine instabili . . .342 Test di stabilità al calore . . . . . . . . . . . . . . . . .342 Principio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .342 Procedimento . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .343 Interpretazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .343 Test di precipitazione con isopropanolo . . . . .343 Principio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .343 Reagenti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .343 Procedimento . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .343 Dosaggio della metaemoglobina . . . . . . . . . . . .343 Procedimento . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .343 Determinazione della percentuale di carbossiemoglobina . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .343 Determinazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .344 Derivati emoglobinici . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .344 Corpi di Heinz . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .344 Test per la ricerca dei corpi di Heinz . . . . . .344 Inclusioni da Hb H . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .344 Screening neonatale . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .344 Screening e diagnosi delle emoglobinopatie .344 Metodi . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .345 Tecniche di biologia molecolare . . . . . . . . . . . .345 Analisi strutturali del DNA . . . . . . . . . . . . . . .345 Principi fondamentali degli acidi nucleici . . .345 Reazione a catena della polimerasi PCR . . . .346 Trascrizione inversa con PCR (RT-PCR) . . . .348 Analisi del DNA amplificato . . . . . . . . . . . . .348 Bibliografia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .348 PARTE QUARTA Il processo infiammatorio 1. XVII INDICE GENERALE Il processo infiammatorio . . . . . . . . . . . . . .351 F. Di Virgilio, D. Cavagna, A.L. Giuliani Caratteristiche generali del processo infiammatorio 351 Cenni storici . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .352 Mediatori chimici . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .356 Citochine . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .356 Interleuchine . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .358 L’inflammasoma . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .360 Fattori di crescita . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .360 Interferoni . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .361 Il TNF . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .362 Chemiochine . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .364 Funzioni delle chemiochine . . . . . . . . . . . . . .364 Fattori stimolanti le colonie (CSF) . . . . . . . . . . .364 Molecole di adesione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .364 Introduzione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .364 Classificazione delle molecole di adesione cellulare (CAMs) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .365 Le cellule infiammatorie . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .365 Granulociti neutrofili . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .365 Cellule endoteliali . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .366 Monociti/macrofagi . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .366 Mastociti e granulociti basofili . . . . . . . . . . . . . .366 Granulociti eosinofili . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .367 Linfociti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .367 Piastrine . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .367 Infiammazione acuta . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .367 Evoluzione della flogosi acuta . . . . . . . . . . . .371 Infiammazione cronica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .374 Caratteristiche generali del processo infiammatorio cronico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .374 Cellule della infiammazione cronica . . . . . . . . .375 Monociti/macrofagi . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .375 Linfociti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .375 Plasmacellule . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .375 Cellule dendritiche . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .375 Fibroblasti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .375 Infiammazione granulomatosa . . . . . . . . . . . . . .375 Risposte sistemiche al processo infiammatorio . . .376 Studio dei leucociti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .377 Conteggio cellulare . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .377 Metodi di separazione delle frazioni leucocitarie .379 Metodi di separazione dei granulociti neutrofili . .381 Metodi di separazione dei granulociti eosinofili . .382 Metodi di separazione dei granulociti basofili . . .384 Metodi di separazione dei linfociti . . . . . . . . . . . .385 Metodi di separazione dei monociti . . . . . . . . . . . .385 Bibliografia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .386 PARTE QUINTA Anemia aplastica e mielopatie autoimmuni 1. L’anemia aplastica ereditaria e acquisita e l’emoglobinuria parossistica notturna . . . . . .391 A. Piccin, S. Mc Cann, A. Bacigalupo Introduzione e cenni storici . . . . . . . . . . . . . . . .391 Le sidromi congenite da insufficienza midollare .391 L’Anemia di Fanconi . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .391 Discheratosi Congenita . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .392 Trombocitopenia amegacariocitaria . . . . . . . . . .392 La Sindrome di Schwachmann Diamond . . . . . .392 Anemia aplastica acquisita . . . . . . . . . . . . . . . . . . .392 Diagnosi . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .392 Classificazione dell’AA . . . . . . . . . . . . . . . . .392 Caratteristiche cliniche dell’Anemia Aplastica393 Epidemiologia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .393 Patogenesi . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .393 XVIII INDICE GENERALE Le cellule staminali e lo stroma nell’AA . . . .393 L’ipotesi autoimmune . . . . . . . . . . . . . . . . . . .393 Sostanze chimiche, farmaci e radiazioni . . . .394 Virus . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .394 Diagnosi e test diagnostici . . . . . . . . . . . . . . . . .394 Esame emocromocitometrico . . . . . . . . . . . . .394 Osservazione dello striscio periferico . . . . . . .394 Biopsia osteomidollare . . . . . . . . . . . . . . . . . .394 Dosaggio dell’emoglobina fetale . . . . . . . . . .395 Conteggio dei reticolociti . . . . . . . . . . . . . . . .395 Analisi citogenetiche . . . . . . . . . . . . . . . . . . .395 Test specifici per la diagnosi di Anemia di Fanconi (FA) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .395 Vol. V/1 Test al Diepossibutano (DEB), descrizione della metodica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .395 Analisi dei telomeri . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .396 Diagnosi differenziale . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .396 Anemia Aplastica Idiopatica ed Emoglobinuria parossistica notturna . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .396 Etiopatogenesi . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .397 Sintomatologia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .398 La diagnosi di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . .398 Test di Ham o test dell’emolisi acida . . . . . . . . .400 Bibliografia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .401 Indice analitico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .403
