Indagini citofluorimetriche, sierologiche e determinazione di

AIPVet
Associazione Italiana di Patologia Veterinaria
ATTI III Congresso Nazionale
ISSN 1825-2265
con la partecipazione
della Società Italiana di Patologia Tossicologica e Sperimentale
del Gruppo di Patologia Clinica Veterinaria
Pisa, 11-13 Maggio 2006
Associazione Italiana di Patologia Veterinaria – Italian Association of Veterinary Pathologists
www.aipvet.it
INDAGINI CITOFLUORIMETRICHE, SIEROLOGICHE E DETERMINAZIONE DI
CITOCHINE IN SUINI VACCINATI CONTRO LA MALATTIA DI AUJESZKY
Ferrari Luca(1), De Angelis Elena(1), Corradi Attilio(1), Saleri Roberta(2), Cavalli Valeria(2),
Smeets Jos(3), Blanchaert Andrè(4), Gozio Stefano(3), Martelli Paolo(1), Borghetti Paolo(1).
(1)
Dip. di Salute Animale, Università degli Studi di Parma; (2)Dip. di Produzioni Animali,
Biotecnologie Veterinarie, Qualità e Sicurezza degli Alimenti, Università degli Studi di
Parma;(3)Intervet International, Boxmeer, The Netherlands; (4)Intervet Italia, Milano.
L’immunità specifica è stata valutata in suini di un allevamento convenzionale vaccinati per via intradermica
contro il virus della Malattia di Aujeszky (ADV). 10 animali sono stati vaccinati a 60 giorni di età e dopo 4
settimane (88 giorni) e sottoposti a prelievo di sangue in litio-eparina al momento della prima somministrazione
e successivamente dopo 2, 4, 5, 6, 7 settimane. Per valutare la risposta cellulo-mediata sono stati determinati i
livelli di cellule secernenti IFN-γ ADV-specifiche mediante saggio ELISpot ed i cambiamenti dei livelli delle
sottopopolazioni di linfociti nel sangue periferico mediante citofluorimetria. I livelli di espressione di IFN-γ nei
leucociti mononucleati sono stati determinati mediante Real Time PCR; la risposta umorale è stata valutata
mediante saggio di virus neutralizzazione (VN). La risposta IFN-γ-mediata ADV-specifica ha evidenziato un
incremento dopo la prima vaccinazione ed il raggiungimento di valori oltre due volte superiori dopo la seconda
vaccinazione. I livelli di espressione di IFN-γ sono aumentati in modo sensibile ed uniforme tra gli animali dopo
la seconda vaccinazione. Si è inoltre evidenziato un incremento dei livelli di cellule CD4+CD25+ e CD4-CD25+
(linfociti T attivati) dopo la seconda vaccinazione ed elevati livelli di cellule CD8β+ (linfociti T citotossici) per
tutto il periodo di osservazione. I livelli di anticorpi neutralizzanti, aumentati già dopo la prima vaccinazione,
hanno manifestato un effetto booster dopo la seconda vaccinazione. Tale studio ha permesso di caratterizzare
parametri immunitari fondamentali la cui utilizzazione in campo rappresenta un utile metodo di valutazione della
risposta immunitaria in termini di attivazione e di efficienza protettiva che può trovare applicazione nello studio
di nuove modalità di vaccinazione e di formule vaccinali innovative.
Parole chiave: suino, vaccinazione, malattia di Aujeszky, IFN-γ, immunità specifica
FLOW CYTOMETRIC, SEROLOGICAL INVESTIGATIONS AND CYTOKINE
DETERMINATION IN PIGS VACCINATED AGAINST AUJESZKY’S DISEASE
Specific immunity has been evaluated in pigs intradermally vaccinated against Aujeszky’s Disease Virus (ADV)
in a conventional herd. 10 animals were vaccinated at 60 days of age and 4 weeks apart (88 days); samples were
collected at the 1st administration and 2, 4, 5, 6, 7 weeks post-vaccination. To evaluate the cell-mediated immune
response, the levels of ADV-specific IFN-γ secreting cells were determined by an ELISpot assay and the
changes of lymphocyte subpopulations in peripheral blood by flow cytometry. IFN-γ expression levels in
mononuclear leucocytes were determined by Real Time PCR; humoral immune response was evaluated by a
virus neutralization (VN) assay. ADV-specific IFN-γ response showed an increase after the 1st vaccination; 2fold higher values have been detected after the 2nd vaccination. IFN-γ expression levels showed the same high
increase in all the animals after the 2nd vaccination. Indeed an increase of CD4+CD25+ and CD4-CD25+ cells
(activated T lymphocytes) after the 2nd vaccination and high levels of CD8β+ cells (cytotoxic T lymphocytes)
during the whole analysis period were evident. The levels of neutralizing antibodies increased after the 1st
vaccination and boosted after the 2nd injection. This study allowed to characterize fundamental immune
parameters whose employment on field conditions represents an useful method to analyse the immune response
in terms of activation and protection, particularly to investigate new routes of vaccine administration and
innovative vaccines.
Key words: pig, vaccination, Aujeszky’s Disease, IFN-γ, specific immunity
III Convegno Nazionale AIPVet
Poster
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