Dosaggio DRI® Serum Tox per acetaminofene

Dosaggio DRI® Serum Tox per acetaminofene
Per uso diagnostico in vitro
1086 (kit da 25 mL, 8 mL)
1091 (1 x 5 mL, 5 x 2 mL)
Uso previsto
Procedura di analisi
Il dosaggio DRI® Serum Tox per acetaminofene è previsto per la determinazione quantitativa
dell’acetaminofene nel siero o nel plasma umano.
Ai fini del presente immunodosaggio enzimatico omogeneo è possibile utilizzare gli analizzatori
in grado di mantenere una temperatura costante, pipettare i campioni, miscelare i reagenti,
misurare i tassi enzimatici a 340 nm e regolare con precisione i tempi di reazione.
Sommario e spiegazione del metodo
L’acetaminofene è un analgesico che, negli esseri umani, ha anche un effetto antipiretico.
È uno degli antidolorifici da banco più diffusi disponibili per il pubblico. Gli effetti tossici associati
all’uso dell’acetaminofene comprendono nausea, sonnolenza e vomito. Una terapia cronica a
base di acetaminofene, o l’ingestione di grandi quantità di farmaco accidentale o in un tentativo
di suicidio, può dar luogo a epatotossicità.1 È stato dimostrato che esiste una correlazione
ben definita tra i livelli di acetaminofene nel siero e i conseguenti danni epatici.2 L’adeguato
trattamento dell’assunzione di dosi eccessive di acetaminofene richiede il monitoraggio
precoce dei livelli di acetaminofene nel siero per impedire la necrosi epatica, che si manifesta
clinicamente solo dodici o più ore dopo l’ingestione.3,4 La determinazione dell’acetaminofene nel
siero è l’indicatore più affidabile per la prognosi e ha importanza fondamentale per il trattamento
con antidoti.4,5
Prima di eseguire il dosaggio, consultare il foglio del protocollo applicativo specifico per
l’analizzatore in dotazione, contenente i parametri e/o ulteriori istruzioni per l’uso.
Controllo di qualità e calibrazione
Una buona prassi di laboratorio prevede l’analisi di campioni di controllo allo scopo di garantire
le corrette prestazioni del dosaggio. In commercio sono disponibili svariati controlli per la
verifica della qualità di questo dosaggio. Verificare che i risultati dei controlli rientrino nei
range prestabiliti dal laboratorio. Usare tutti i calibratori per calibrare il dosaggio. Ricalibrare
lo strumento quando viene usato un lotto di reagenti diverso. Tutti i requisiti di controllo della
qualità vanno soddisfatti in conformità alle normative vigenti o ai requisiti per l’accreditamento.
Risultati e valori attesi
Sono disponibili numerose tecniche per la determinazione della concentrazione di
acetaminofene nel siero tra cui la GC, la HPLC, l’immunodosaggio enzimatico, la spettrometria
UV e l’immunodosaggio a fluorescenza. Il dosaggio DRI® Serum Tox per acetaminofene
è un immunodosaggio enzimatico omogeneo6 che utilizza reagenti liquidi pronti per l’uso.
Il dosaggio si basa sulla competizione della sostanza contenuta nel campione di siero con la
sostanza marcata con enzima glucosio-6-fosfato deidrogenasi (G6PDH) per un numero fisso di
siti di legame anticorpale specifico. Se la sostanza non è presente nel campione, il coniugato
sostanza-G6PDH si lega all’anticorpo specifico e l’attività enzimatica risulta inibita. Questo
fenomeno crea una relazione diretta tra la concentrazione della sostanza nel campione e
l’attività enzimatica. L’attività dell’enzima G6PDH viene determinata spettrofotometricamente
a 340 nm misurando la sua capacità di convertire la nicotinamide adenina dinucleotide (NAD)
in NADH.
Reagenti
Reagente anticorpo/substrato. Contiene anticorpo monoclonale anti-acetaminofene, glucosio6-fosfato (G6P) e nicotinamide adenina dinucleotide (NAD) in tampone Tris con azoturo di sodio
come conservante.
Reagente coniugato enzimatico. Contiene acetaminofene marcato con glucosio6fosfato
deidrogenasi (G6PDH) in tampone Tris con azoturo di sodio come conservante.
Ulteriori materiali necessari (venduti separatamente)
1091
Descrizione del kit
Kit di calibratori per acetaminofene. Contiene 5 mL di calibratore
negativo e 2 mL ciascuno di calibratori per acetaminofene nelle
concentrazioni 10 μg/mL, 25 μg/mL, 50 μg/mL, 100 μg/mL e 200 μg/mL in
tampone Tris con azoturo di sodio come conservante.
Avvertenze e precauzioni
I reagenti sono nocivi se ingeriti.
AVVERTENZA: I reagenti del dosaggio contengono ≤0,09% azoturo di sodio. Evitarne il contatto
con la pelle e le mucose. In caso di contatto, sciacquare le aree interessate con abbondanti
quantità di acqua. Se i reagenti vengono ingeriti o vengono a contatto con gli occhi, rivolgersi
immediatamente ad un medico. Il sodio azide può reagire con il rame o il piombo delle tubature
di scarico generando azidi metalliche potenzialmente esplosive. Quando si gettano via tali
reagenti, sciacquare sempre con abbondanti quantità di acqua per impedire l’accumulo di azidi.
Pulire le superfici metalliche esposte con una soluzione di idrossido di sodio al 10%.
Non usare i reagenti scaduti.
Preparazione e conservazione dei reagenti
I reagenti sono pronti per l’uso e pertanto non richiedono alcuna preparazione. Tutti i
componenti del dosaggio, se conservati a 2 - 8 °C, sono stabili fino alla data di scadenza indicata
sull’etichetta.
Raccolta e trattamento del campione
L’immunodosaggio può essere eseguito su siero o plasma. Anticoagulanti come eparina, citrati,
ossalati ed EDTA non hanno provocato alcuna interferenza con il dosaggio. I campioni di
plasma prelevati con tali anticoagulanti possono quindi essere utilizzati per l’analisi, sebbene
sia preferibile un campione di siero fresco. Conservare il campione in.
Trattare tutti i campioni di siero come se fossero potenzialmente infettivi.
Gli analizzatori chimico-clinici determinano automaticamente la concentrazione di
acetaminofene nel siero o nel plasma. Non è necessario manipolare ulteriormente i dati.
Per l’analgesia negli adulti, vengono solitamente somministrate dosi di acetaminofene
comprese tra 325 e 650 mg ogni tre o quattro ore senza effetti collaterali. Per ottenere una
risposta analgesica, è generalmente necessaria una concentrazione sierica compresa tra 5 e
20 μg/mL.7 Tuttavia, l’ingestione di grandi quantità di farmaco può dar luogo a epatotossicità.
È stato dimostrato che esiste una correlazione ben definita tra i livelli di acetaminofene nel
siero e i conseguenti danni epatici.2 A quattro ore dall’ingestione, i pazienti con livelli inferiori a
120 μg/mL non sviluppano insufficienza epatica. Tra quelli con livelli compresi tra 120 e
300 μg/mL, il 50% sviluppa necrosi epatica, mentre livelli superiori a 300 μg/mL sono certamente
associati a necrosi epatica.
L’emivita dell’acetaminofene nel siero è probabilmente la migliore indicazione del livello di
compromissione epatica. È stato dimostrato che la necrosi epatica può verificarsi quando
l’emivita supera le quattro ore; se l’emivita supera le 12 ore, il coma epatico diventa alquanto
probabile.2,5,8
Limitazioni
1. Il dosaggio è previsto per essere eseguito unicamente su siero o plasma umano, non
su sangue intero.
2. I campioni di pazienti con una concentrazione di acetaminofene superiore a
200 μg/mL devono essere diluiti con il calibratore negativo e rianalizzati. La corretta
concentrazione di acetaminofene si ottiene moltiplicando il risultato del dosaggio per
il fattore di diluizione.
Caratteristiche di rendimento del test tipiche
I seguenti dati tipici sono stati ottenuti mediante un analizzatore chimico-clinico Hitachi 717.
Precisione
La precisione intra-analisi e tra analisi è stata valutata analizzando tre campioni di siero che
hanno dato i seguenti risultati:
Intra-analisi (n=20)
Tra analisi (n=12)
Sample
Mean ± SD
(μg/mL)
% CV
Mean ± SD
(μg/mL)
% CV
8,1
01
23 + 1,5
6,5
26 + 2,1
02
52 + 4,3
8,3
59 + 3,8
6,4
03
116 + 6,2
5,3
123 + 7,4
6,0
Sensibilità
La sensibilità, definita come la concentrazione più bassa differenziabile da 0 μg/mL con una
confidenza del 95%, è di 2,5 μg/mL.
Accuratezza e correlazione
Sono stati analizzati ottanta campioni di siero mediante il dosaggio DRI Serum Tox per
acetaminofene (y) e un dosaggio per acetaminofene commerciale (x). Si sono ottenuti
una correlazione con un’equazione di regressione lineare di y = 0,91 (x) + 3,5 e un
coefficiente di correlazione (r) pari a 0,99. La concentrazione media di acetaminofene nel
campione per il dosaggio DRI è stata di 35,9 μg/mL con un range compreso tra 0 e 139,
1 μg/mL. La concentrazione media di acetaminofene nel campione per il dosaggio commerciale
è stata di 35,5 μg/mL con un range compreso tra 0 e 138,5 μg/mL.
Bibliografia
Specificità
Sono stati analizzati composti strutturalmente simili all’acetaminofene e sostanze che possono
essere assunte unitamente all’acetaminofene per rilevare l’eventuale reattività crociata. La
tabella seguente riporta la concentrazione dei composti analizzati che hanno rivelato una
reattività crociata inferiore al limite di rilevazione del dosaggio.
Composto
(μg/mL)
Acetaminofene glucuronide
1.000
N-Acetilcisteina
1.000
Amitriptilina
Acido benzoico
Butalbitale
Caffeina
20
1.000
30
100
Clorofeniramina
1.000
Clorzoxazone
1.000
Codeina
2
Cisteamina
1.000
d-Cisteina
1.000
Dextrometorfano
5
Diazepam
20
Diflunisal
1.000
Efedrina
1.000
Fenoprofen
1.000
Acido gentisico
1.000
Etere guaiacol glicerico
1.000
Omatropina
1.000
Ibuprofene
1.000
Indometacina
1.000
Metionina
1.000
Naproxen
1.000
Fenacetina
30
Fenobarbitale
1.000
Fenilbutazone
1.000
Fenilefrina
1.000
Propossifene
Pirilamina
Acido salicilico
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Damage. Ann Intern Med, 87:299 (1977).
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8. Rumack BH and H Matthew: Acetaminophen Poisoning and Toxicity. Pediatrics for the
Clinician, 55:871 (1975).
2
1.000
300
Salicilammide
1.000
Secobarbitale
3
Non è stata rilevata alcuna interferenza con campioni emolizzati, lipemici e itterici a
concentrazioni di emoglobina, colesterolo e bilirubina rispettivamente fino a 800 mg/dL,
400 mg/dL e 30 mg/dL.
Microgenics Corporation
46500 Kato Road
Fremont, CA 94538 USA
Assistenza tecnica e assistenza
alla clientela negli USA:
1-800-232-3342
Per gli aggiornamenti del foglietto illustrativo, visitare:
www.thermoscientific.com/diagnostics
Altri Paesi:
Consultare il rappresentante Thermo Fisher Scientific di zona.
1090-5-IT
2015 08
2
Microgenics GmbH
Spitalhofstrasse 94
D-94032 Passau, Germany
Tel: +49 (0) 851 886 89 0
Fax: +49 (0) 851 886 89 10