UNIVERSITÀ DI PISA Dipartimento di Ricerca Traslazionale e Delle Nuove Tecnologie In Medicina E Chirurgia Corso di Laurea Magistrale a Ciclo Unico in Medicina e Chirurgia Tesi di Laurea “Caratterizzazione della tiroidite cronica autoimmune giovanile” Relatore: Candidata: Prof. Francesco Latrofa Valentina Verdiani Anno Accademico 2014-2015 INDICE 1. RIASSUNTO..................................................................................................... 4 2. INTRODUZIONE............................................................................................ 7 Tiroidite cronica autoimmune ................................................................................... 7 Epidemiologia ........................................................................................................... 7 Eziologia.................................................................................................................... 8 Patogenesi ............................................................................................................... 11 Meccanismi umorali .......................................................................................... 11 Meccanismi cellulo mediati ............................................................................... 16 Clinica ..................................................................................................................... 20 Diagnosi .................................................................................................................. 23 Autoanticorpi ..................................................................................................... 24 Ecografia ............................................................................................................. 26 Terapia .................................................................................................................... 28 3. SCOPO DELLA TESI .................................................................................. 30 4. MATERIALI E METODI ............................................................................ 31 Gruppo di studio ..................................................................................................... 31 Dosaggi di laboratorio ............................................................................................ 31 Ecografia ................................................................................................................. 32 Analisi statistica ...................................................................................................... 32 5. RISULTATI ..................................................................................................... 33 Autoanticorpi .......................................................................................................... 33 Ecogenicità.............................................................................................................. 33 TSH ......................................................................................................................... 33 2 Valore del TSH, ecogenicità e autoanticorpi ......................................................... 34 Stratificazione per età ............................................................................................. 35 7. CONCLUSIONI ............................................................................................. 46 8. INDICE FIGURE .......................................................................................... 47 9. BIBLIOGRAFIA............................................................................................ 48 RINGRAZIAMENTI ............................................................................................... 59 3 1. RIASSUNTO La TCA giovanile è la principale causa di ipotiroidismo acquisito nei bambini e negli adolescenti che risiedono nelle zone non iodio carenti ed è la forma più comune di tiroidite, con una prevalenza dell’1.2%. Le ragazze sono interessate più frequentemente dei ragazzi, anche prima della pubertà. L’età di presentazione più comune è l’adolescenza, ma la TCA giovanile può presentarsi a qualsiasi età, anche se è molto rara nel primo anno di vita, e aumenta dopo i 5 anni. Il nostro studio retrospettivo aveva lo scopo di caratterizzare meglio la TCA giovanile. Abbiamo valutato l’età di insorgenza, la presenza degli autoanticorpi anti-tiroide, l’ipoecogenicità della tiroide e abbiamo cercato di identificare la prima alterazione clinica a manifestarsi. Abbiamo selezionato tutti i pazienti di età inferiore ai 14 anni che avevano eseguito un prelievo per la valutazione degli AbTg e/o degli AbTPO presso il laboratorio di Endocrinologia dal 2003 al 2013 nel sospetto di una tireopatia autoimmune. Dopo aver escluso i soggetti con altre tireopatie e quelli che avevano valori normali del TSH, tiroide normoecogena e autoanticorpi negativi venivano selezionati 205 pazienti (M=81; F=124; anni 8,4 ± 3,3). In ognuno di questi soggetti venivano valutati TSH, FT4, AbTg, AbTPO, ecografia tiroidea ed eventuale terapia con levo-tiroxina. Gli autoanticorpi erano entrambi negativi nel 54,6% dei soggetti e entrambi positivi nel 30,7%. La positività isolata degli AbTg era presente nel 12,7% dei soggetti e quella degli AbTPO nel 2%. La ghiandola era 4 ipoecogena nel 53,3% dei bambini. Un valore di TSH superiore alla norma, al momento della visita o all’anamnesi, era presente nel 53,2% dei soggetti. In poco più della metà dei casi la negatività degli AbTg e degli AbTPO si correlava con una ghiandola normoecogena. Al contrario la positività degli autoanticorpi, più degli AbTPO che degli AbTg, si correlava con una ghiandola ipoecogena, p<0,001 e p=0,024 rispettivamente. Poco più del 50% dei soggetti con AbTg o AbTPO positivi avevano il valore del TSH superiore alla norma. Allo stesso modo la metà dei soggetti con ghiandola ipoecogena presentavano il TSH superiore alla norma. Nessuno di questi parametri (positività degli AbTg, positività degli AbTPO e ipoecogenicità) correlava più dell’altro con il valore superiore alla norma del TSH. Fino a 4 anni di età la percentuale di soggetti con TSH superiore alla norma (“ipertireotropinemia isolata”) era elevata (>70%), mentre gli autoanticorpi erano assenti in tutti e la ghiandola ipoecogena in pochi soggetti. La percentuale dei soggetti con TSH superiore alla norma si riduceva progressivamente nelle successive fasce di età. Gli autoanticorpi cominciavano a comparire a partire dai 4 anni di età. Soprattutto nel gruppo tra 4 e 6 anni la percentuale di bambini con AbTg positivi era maggiore di quella con AbTPO positivi e anche se la percentuale di positività degli AbTPO saliva progressivamente nelle fasce di età successive non superava mai quella degli AbTg. Per quanto riguarda l’aspetto ipoecogeno della tiroide questo compariva precocemente, nel gruppo tra 2 e 4 anni di età, anche se in un numero molto limitato di soggetti, per poi aumentare progressivamente nelle successive fasce di età. Dall’analisi di questi dati emergeva una differenza significativa nella distribuzione per età sia del valore del TSH superiore alla norma, sia della positività degli AbTg, sia di 5 quella degli AbTPO, come pure della ipoecogenicità: TSH (p=0,003), AbTg (p<0,001), AbTPO (p<0,001), ipoecogenicità (p<0,001). Questi risultati confermano che la TCA giovanile è estremamente rara prima dei 4 anni di età. Quindi un rilievo del TSH superiore alla norma in questa fascia d’età riconosce una causa diversa dalla TCA giovanile (“ipertireotropinemia isolata”). Nella TCA giovanile gli AbTg si positivizzano prima degli AbTPO, e una buona percentuale di soggetti presenta positività solo per i primi. Pertanto, a differenza degli adulti, per la diagnosi è essenziale il dosaggio degli AbTg in aggiunta a quello degli AbTPO. Inoltre questi dati sostengono l’ipotesi che nello sviluppo dell’autoimmunità tiroidea la risposta alla Tg preceda quella alla TPO. Il valore dell’ecografia per la diagnosi di TCA giovanile resta dubbio. 6 2. INTRODUZIONE Tiroidite cronica autoimmune L’ ipotiroidismo autoimmune identifica quelle condizione nelle quali si ha una perdita di funzione della tiroide causata dalla distruzione su base autoimmune della ghiandola. La forma più comune di patologia autoimmune della tiroide è la tiroidite cronica linfocitaria nelle sue varianti: con gozzo, subatrofica, atrofica. Altre forme sono la tiroidite postpartum, la tiroidite silente (o indolore), la tiroidite focale e la tiroidite di Riedel3. Con il termine tiroidite di Hashimoto, in accordo con la definizione data da Hashimoto Hakaru nel 19124, veniva indentificata la forma con gozzo, anche se attualmente questo termine viene utilizzato come sinonimo di tiroidite cronica autoimmune in tutte le sue varianti. Il processo autoimmune alla base è simile nelle due varianti, con gozzo e atrofica, ed è ancora incerto se esse siano due entità distinte oppure rappresentino i due estremi dello spettro di distruzione autoimmune della tiroide. Epidemiologia La tiroidite cronica autoimmune (TCA) è la patologia autoimmune organo-specifica più frequente ed è la più comune causa di ipotiroidismo spontaneo sia negli adulti che nei bambini5 (TCA giovanile) nelle aree non iodio carenti. Nell’adulto la sua incidenza è di 0,3-1,5 casi/1000/anno6 ed è influenzata dall’età, dal sesso e dall’ambiente. È più comune nelle donne7-9 e la sua prevalenza aumenta con l’età7. La popolazione giapponese è 7 maggiormente colpita, probabilmente come conseguenza di fattori genetici e dell’esposizione cronica a una dieta ad alto contenuto di iodio. Nei bambini e adolescenti la TCA giovanile è ritenuta la causa di circa la metà dei casi di “gozzo eutiroideo”10 ed è la tiroidite più comune nell’infanzia11. La sua prevalenza è dell’1,2%10. Sembra essere più frequente in Nord America e in Giappone, con una netta prevalenza nel sesso femminile12, anche prima della pubertà13. Il rapporto femmine maschi è di circa 5:114-16. L’età di presentazione più comune è l’adolescenza, ma la TCA può presentarsi a qualsiasi età, anche se è molto rara nei bambini al di sotto di un anno17, e l’incidenza aumenta dopo i 5 anni3. Ci sono ancora numerose controversie sulla evoluzione della TCA giovanile18. Va sottolineato come la definizione di “giovanile” per la TCA non è univoca. Infatti alcuni studi includono soggetti fino a 18 anni10,19, altri da 12 a 19 anni8, altri fino a 22 anni5, mentre negli studi di Radetti et al20,21, così come in altri12,14, l’età media dei soggetti studiati era di circa 10 anni. Eziologia L’ eziopatogenesi è sicuramente multifattoriale con il contributo di fattori genetici, costituzionali e ambientali22 . La genetica sembra essere il fattore eziopatogenetico predominante nella TCA giovanile. Infatti nelle famiglie dei bambini e adolescenti affetti c’è un’alta percentuale di soggetti con titolo elevato degli AbTPO23,24, e la prevalenza degli AbTPO è elevata tanto nelle femmine quanto nei maschi25. La predisposizione genetica alla sviluppo della TCA è stata confermata da studi epidemiologici che mostrano che la prevalenza della TCA è più alta in alcune famiglie, che la prevalenza degli autoanticorpi è più 8 alta nei parenti di primo grado dei pazienti con TCA, e che c’è un alto tasso di correlazione nei gemelli26. Un’ aumentata frequenza di HLA-DR3, di DR4 e di DR5 è stata segnalata nei pazienti con TCA di razza caucasica27. È stato dimostrato che la sostituzione di aminoacidi nel gene della Tg può interferire con l’HLA-DR3 conferendo la suscettibilità allo sviluppo della patologia autoimmune tiroidea sia nei topi che negli uomini28. Questi polimorfismi genetici della Tg possono predisporre allo sviluppo della TCA in vario modo, ad esempio rendendo la molecola più immunogenica o favorendo l’interazione con l’HLA di classe II28. Anche polimorfismi di CTLA-4, proteina coinvolta nell’arresto della risposta immunitaria, sono stati associati alla TCA29. I geni finora identificati conferiscono un basso livello di rischio di sviluppo della TCA, pertanto è stato ipotizzato che la predisposizione genetica è complessa e coinvolge numerosi geni con bassa penetranza30. Inoltre diversi background genetici, probabilmente con meccanismi ereditari diversi, possono determinare lo stesso fenotipo31. Una maggiore prevalenza della TCA è stata segnalata anche in alcune anomalie cromosomiche, come la sindrome di Turner32 e la sindrome di Down33,34. Tra i fattori endogeni, non genetici, che svolgono un ruolo nella TCA ci sono gli ormoni sessuali35,36, i glucocorticoidi37 ed il basso peso alla nascita38. Per quanto riguarda i fattori ambientali coinvolti nella patogenesi della TCA quelli più importanti sono gli agenti infettivi, lo iodio, il trattamento con alcuni farmaci (amiodarone, interferone(IFN) - α, interleuchina(IL) -2, e GM-CSF) e le radiazione ionizzanti3. Lo iodio svolge un ruolo particolare nello sviluppo della TCA. Dopo l’introduzione dei programmi di iodio profilassi nelle regioni iodio carenti, è stato segnalato un aumento della prevalenza degli autoanticorpi, soprattutto 9 degli AbTg39, dell’infiltrato linfocitario della tiroide e delle patologie autoimmuni tiroidee in generale40. Questi dati sono stati confermati nello studio che ha valutato il follow up degli abitanti di Pescopagano 15 anni dopo l’introduzione della iodio profilassi. Questo studio ha dimostrato che l’aumento dell’escrezione urinaria di iodio è associato ad un aumento degli autoanticorpi circolanti e dell’ipotiroidismo, in particolare della forma subclinica.41 È stato inoltre dimostrato che i pazienti con TCA che vengono trattati con iodio hanno una maggior probabilità di sviluppare un ipotiroidismo clinico. L’assunzione di iodio modifica l’incidenza dell’ipotiroidismo come conseguenza sia di un’azione diretta sulla funzione tiroidea, sia di uno stimolo all’autoimmunità42. Il meccanismo con cui lo iodio determina una caduta della tolleranza immunologica nei confronti degli antigeni tiroidei, in particolare della tireoglobulina, sono stati spiegati in un recente studio in cui si dimostra che lo iodio smaschera degli epitopi criptici della Tg aumentandone l’antigenicità. Questo evento, in soggetti geneticamente predisposti, potrebbe indurre l’autoimmunità tiroidea. L’effetto dello iodio è correlato con le caratteristiche intrinseche della Tg, pertanto ogni livello di iodio modifica l’espressione delle patologie tiroidee. Le manifestazioni cliniche che risultano dalla reazione autoimmune indotta dallo iodio, in soggetti geneticamente predisposti, possono variare da un fenotipo lieve di TCA in cui si ritrovano solo bassi livelli sierici di autoanticorpi, in particolare degli AbTg, a forme più avanzate, caratterizzate da alti livelli di AbTg e AbTPO e infiltrazione linfocitaria della tiroide, e infine all’ipotiroidismo43. 10 Patogenesi Nella patogenesi della TCA sia l’autoimmunità umorale che quella cellulo-mediata hanno un ruolo importante. Una serie di fattori endogeni, ambientali e genetici interagiscono tra loro portando all’attivazione di cellule T autoreattive e, eventualmente, all’ipotiroidismo determinando infiammazione e distruzione immuno-mediata del tessuto tiroideo. In questo processo sono coinvolti numerosi meccanismi3. Meccanismi umorali I tre antigeni tiroidei principali contro cui si attiva l’autoimmunità sono la tireoglobulina (Tg), la tireoperossidasi (TPO) e il recettore del TSH (TSH-R) (Figura 1). I meccanismi umorali dell’autoimmunità si manifestano attraverso la produzione di autoanticorpi, principalmente di classe IgG, diretti contro questi antigeni44. Sono stati descritti anche AbTg e AbTPO di classe IgA45. Il fatto che nello stesso paziente questi autoanticorpi si presentino con una notevole varietà sia delle catene pesanti che della catene leggere, e che siano presenti diversi geni codificanti per le catene pesanti, le catene leggere e la regione V degli AbTg e AbTPO46 sta ad indicare che molto probabilmente nella TCA avviene una stimolazione policlonale dei linfociti B. Per la produzione di questi autoanticorpi è fondamentale il continuo stimolo antigenico da parte degli antigeni tiroidei47. 11 Figura 1 Figura 1- Caratteristiche degli autoantigeni tiroidei che possono contribuire alla loro immunogenicità. 2 La tireoglobulina (Tg), precursore degli ormoni tiroidei, viene internalizzata dai tireociti e successivamente degradata con la liberazione degli ormoni tiroidei in essa contenuti. Tuttavia una modesta quantità di Tg viene rilasciata in circolo dove è accessibile alle cellule immunocompetenti. L’immunizzazione con Tg di ceppi di topi suscettibili determina lo sviluppo di una tiroidite negli animali, indicando che la Tg può comportarsi come un autoantigene patogenetico48. Modificazioni post-trascrizionali quale iodazione43 e glicosilazione49, possano giocare un ruolo nell’antigenicità50. Gli AbTg sono stati i primi autoanticorpi descritti da Roitt nel 1956 51. Gli AbTg non possono fissare il complemento, ma possono formare complessi immuni lungo la membrana basale dei follicoli tiroidei, inducendo 12 l'attacco del complemento ed il rilascio successivo di molecole proinfiammatorie. Attraverso il legame con il recettore per la porzione Fc delle immunoglobuline presente sulle cellule NK, gli AbTg, come anche gli AbTPO, possono attivare il meccanismo della citotossicità cellula-mediata anticorpo dipendente (ADCC), ma l'importanza di questo meccanismo nella TCA è poco chiaro52. È stato ipotizzato che la tolleranza immunitaria dei linfociti B venga persa prima nei confronti della Tg e successivamente della TPO, quindi la produzione degli AbTg potrebbe essere il momento iniziale nello sviluppo dell’autoimmunità tiroidea. Nello studio di Chen et al1 si dimostra che nei topi immunizzati gli AbTg si positivizzano prima degli AbTPO, e inoltre che nei sieri di 4 famiglie con un soggetto affetto da TCA giovanile si riscontra una maggior prevalenza degli AbTg nei soggetti giovani, mentre in coloro che avevano entrambi gli autoanticorpi gli AbTPO avevano un titolo molto più elevato (Figura 2 A-B). Questa ipotesi è in accordo con alcuni, ma non con tutti i dati biochimici, genetici e immunologici presenti su questi antigeni. Da un lato i peptidi della Tg sono gli unici ad essere stati ritrovati da un eluizione di complessi di immuno-istocompatibilità purificati presenti nel tessuto tiroideo53. Inoltre polimorfismi della Tg (e non della TPO) insieme all’HLA-DR conferiscono la suscettibilità allo sviluppo di tireopatie autoimmuni50,54. Dall’altro lato la tolleranza immunitaria centrale nei confronti della Tg dovrebbe essere maggiore di quella nei confronti della TPO, dato che la Tg è maggiormente espressa a livello timico55. Anche la tolleranza dei linfociti B dovrebbe essere maggiore nei confronti della Tg dato che questa è riscontrabile nel siero56, a differenza della TPO57. Quindi per lo sviluppo dell’autoimmunità tiroidea sembra essere meno importante la tolleranza immunitaria centrale rispetto all’immunogenicità dell’antigene 13 unito ai polimorfismi genetici, che conferiscono la predisposizione genetica allo sviluppo della malattia (Figura 2C).2 Figura 2 Figura 2- Sviluppo spontaneo degli autoanticorpi tiroidei: A- nei topi NOD.H2h4, B- negli umani con TCA giovanile; da Chen et al. 1 C- previsioni e osservazioni per lo sviluppo degli autoanticorpi tiroidei a confronto 2. La tireoperossidasi (TPO)58 è espressa sulla superficie dei tireociti, dove è coinvolta nella iodazione della Tg44. Gli epitopi riconosciuti dagli anticorpi sono costanti nello stesso paziente, suggerendo che siano determinati geneticamente59. Gli AbTPO sono una delle principali caratteristiche della TCA. È stato visto che gli AbTPO in vitro hanno un effetto citotossico, legando la TPO espressa sulla membrana dei tireociti attivano il complemento determinando così il danno cellulare60. La citotossicità degli AbTPO non è correlata con la loro concentrazione60, ed è stata dimostrata solo per la sottoclasse IgG1, almeno in vitro61. In vivo però la TPO è espressa solo sulla membrana interna 14 al follicolo e non è quindi accessibile agli autoanticorpi circolanti. Per questo è stato ipotizzato che l’effetto citotossico di questi autoanticorpi sia un effetto secondario alla distruzione dei follicoli da parte dei linfociti T autoreattivi62. Infatti il passaggio transplacentare di questi autoanticorpi non determina distruzione della tiroide nel feto, e i bambini nascono con una tiroide perfettamente normale63. Quindi è stato ipotizzato un ruolo predominante nella patogenesi della TCA dell’immunità cellulo mediata64. Nonostante questo, studi autoptici forniscono una forte evidenza che siano gli AbTPO ad essere correlati all’infiltrazione linfocitaria della ghiandola, anche in assenza di una malattia clinicamente manifesta65 e sempre gli AbTPO (e non gli AbTg) secondo studi epidemiologici sarebbero correlati direttamente con lo di sviluppo dell’ipotiroidismo8,9. Inoltre, secondo alcuni autori, avrebbero anche un’azione diretta nei confronti della TPO andando a inibire la sua funzione66. Questa funzione però non è stata confermata da altri studi67,68. Il recettore del TSH (TSH-R) è un membro della famiglia dei recettori accoppiati alle proteine G69. Questi recettori sono caratterizzati dalla presenza di 7 segmenti transmebrana, collegati da 3 anse extracellulari e 3 intracellulari, la porzione N-terminale extracellulare e una coda C-terminale intracitoplasmatica3. Gli anticorpi diretti contro il recettore del TSH (TSH-receptor antibody, TRAb) sono una famiglia funzionalmente eterogenea di autoanticorpi dotati di attività stimolante o inibente la funzione tiroidea70. I TRAb capaci di stimolare la funzione tiroidea (thyroid stimulating antibody, TSAb) sono responsabili dell'ipertiroidismo nel morbo di Basedow. I più rari TRAb con azione inibente la funzione ed il trofismo tiroideo (TSH-blocking 15 antibody, TBAb) contribuiscono alla patogenesi dell'ipotiroidismo nella tiroidite di Hashimoto e nella tiroidite atrofica. I TBAb sono presenti nel 20% dei soggetti con ipotiroidismo autoimmune, si ritrovano soprattutto nella forma atrofica e il loro passaggio transplacentare può produrre ipotiroidismo neonatale transitorio. In rari casi i pazienti possono presentare entrambe le tipologie di TRAb e conseguentemente l’attività tiroidea può oscillare tra l’ipertiroidismo e l’ipotiroidismo71. Meccanismi cellulo mediati L’ipotesi iniziale che la patogenesi fosse dovuta agli autoanticorpi72 è stata messa in dubbio da studi che hanno dimostrato che questi non hanno alcun effetto sulle colture monostrato di cellule tiroidee non pretrattate con tripsina62. Quindi è diventato chiaro che gli autoanticorpi non sono un fattore fondamentale nella patogenesi della TCA. Roitt et al62 hanno suggerito che gli autoanticorpi potessero agire solo su cellule già danneggiate, e che questo danno potesse essere causato da cellule linfoidi sensibilizzate infiltranti la tiroide. Il ruolo centrale dei linfociti T nell’indurre la TCA è stato confermato da uno studio condotto su topi transgenici incapaci di produrre autoanticorpi in cui era comunque possibile indurre un ipotiroidismo associato alle classiche modificazioni istologiche e all’infiltrato linfocitario tiroideo presenti nella TCA73. Dopo la stimolazione antigenica, i linfociti T CD4 possono differenziarsi in due sotto-popolazioni74: Th1 e Th2. Le cellule Th1 secernono Il-2, IFN-γ a TNF-α, regolano la risposta immunitaria cellulo mediata e attivano i linfociti citotossici. Le cellule Th2 secernono principalmente IL-4, IL-5, IL-6 e IL-10 e attivano la produzione di anticorpi da parte dei linfociti B. 16 I linfociti T CD4 riconoscono l’antigene presentato in associazione con molecole HLA di classe II espresse sulla superficie delle cellule presentanti l’antigene (APCs). Il complesso antigene-HLA presente sull’APC interagisce con il recettore dei linfociti T (TCR). Per indurre l’attivazione dei linfociti T a questo primo segnale deve essere associato un secondo stimolo, il più efficace è il legame della molecola “co-stimolatoria” B7, presente sulle APCs, con il CD28, espresso sulla membrana dei linfociti T. Sui linfociti T attivati viene espressa anche la molecola cytolytic T lymphocyte associated antigen-4 (CTLA-4) che compete con il CD28 per il legame con B7 inducendo anergia75. La proteina CTLA-4 quindi è coinvolta nell’arresto della risposta immunitaria. Polimorfismi di questa proteina sono stati associati a patologie autoimmuni ed in particolare alla TCA29. I linfociti T citotossici svolgono un ruolo diretto nel danno cellulare, attraverso il rilascio di mediatori citolitici solubili, come le perforine76. Altro meccanismo coinvolto nel danno cellulare nella TCA è quello costituito da FAS-FAS-ligando77, che induce l’apoptosi. 17 Figura 3 Fattori Genetici e Fattori Ambientali Costituzionali Danno tiroideo e rilascio di auto-antigeni (Ag) Presentazione degli Ag dalle APCs Anergia Interazione B7 – CTLA-4 Interazione B7 – CD28 Attivazione dei linfociti T CD4+ Il-2; IFN-γ; TNF-β IL-4; IL-10; IL-13 Risposta prevalente Th1 Risposta prevalente Th2 Attivazione Linfociti citotossici Attivazione Linfociti B Produzione di Ab Danno tireociti TgAb, TPOAb TRAb TSHBAb Tiroidite Cronica Autoimmune TSAb Morbo di Basedow Figura 3- Rappresentazione schematica dei meccanismi immunitari coinvolti nella patogenesi delle malattie autoimmuni tiroidee. 18 Anatomia patologica Le alterazioni macroscopiche presenti nei pazienti con TCA sono variabili e vanno dalla presenza di una ghiandola aumentata di volume nella tiroidite di Hashimoto propriamente detta, alla riduzione di volume nella forma atrofica. Da un punto di vista istologico78 la TCA è caratterizzata da una distruzione dei follicoli tiroidei, dalla presenza di un infiltrato linfocitario più o meno marcato e da fibrosi (Figura 4). I tireociti appaiono ingranditi ed assumano una colorazione acidofila (cellule di Hürthle o Askanazy). L’infiltrato linfocitario, costituito sia da cellule B che T79,80, può essere diffuso e può organizzarsi in modo da formare veri e propri follicoli linfatici. Questi processi coinvolgono solitamente l’intera ghiandola, ma possono anche essere focali (tiroidite focale). La fibrosi è più abbondante nella forma atrofica81. Figura 4 Figura 4- Caratteristiche istologiche della tiroidite cronica autoimmune con infiltrato linfocitario diffuso. 19 Clinica La presentazione clinica della TCA è variabile. Quando l’ipotiroidismo acquisito autoimmune insorge precocemente, intorno ai sei mesi di vita, i segni e i sintomi sono simili a quelli di bambini con ipotiroidismo congenito sfuggiti allo screening17. Un segno inziale dell’ipotiroidismo nei bambini può essere una crescita inferiore alla norma. Nei bambini più grandi e negli adolescenti i sintomi sono simili a quelli dell’adulto3. Frequentemente però sia gli adulti che i bambini affetti da TCA sono completamente asintomatici e i motivi per cui vengono fatti accertamenti sulla funzione tiroidea possono essere la familiarità o il riscontro di una funzione tiroidea alterata nel corso di altre indagini14. Sul piano clinico la tiroidite di Hashimoto è caratterizzata dalla presenza di un gozzo di consistenza gommosa alla palpazione13, che raramente può raggiungere dimensioni tali da determinare sintomi da compressione (disfagia, dispnea e/o sensazione di “ingombro” al livello del collo). Il gozzo può rimanere stazionario o ridursi gradualmente nel tempo. Spesso i pazienti presentano una normale funzione tiroidea al momento della diagnosi e nel corso di mesi o anni si può assistere alla graduale evoluzione verso l’ipotiroidismo. Nella variante atrofica di TCA, la tiroide non è palpabile e i pazienti presentano spesso un ipotiroidismo clinico o subclinico già alla diagnosi. Questa forma di tiroidite è inoltre responsabile del mixedema idiopatico dell’adulto, una forma oggi molto rara di ipotiroidismo grave che può presentarsi in soggetti, spesso donne anziane, in cui l’ipotiroidismo è rimasto a lungo misconosciuto. 20 Nelle forme giovanili si possono distinguere, come nell’adulto, sia la variante con gozzo (tiroidite di Hashimoto) sia la forma atrofica17. La forma atrofica sembra essere più comune nei bambini, la variante con gozzo negli adolescenti. La TCA può manifestarsi da sola o può essere associata ad altre malattie autoimmuni, in particolare al diabete mellito di tipo1. Infatti nei pazienti affetti da TCA si possono ritrovare autoanticorpi diretti contro la corteccia surrenale (1-2%), le cellule parietali gastriche (10-30%), le cellule delle isole pancreatiche (1-3%), il fattore intrinseco (1%), il DNA, le IgG o i fosfolipidi82. La combinazione della TCA con altre malattie autoimmuni organo specifiche è denominata Sindrome Polighiandolare Autoimmune (APS)13. Nella storia naturale della TCA la positività dei marker di autoimmunità tiroidea è il primo evento e può precedere anche di molti anni l’insorgenza dell’ipotiroidismo. Al momento della diagnosi la TCA si può associare all’eutiroidismo, più frequentemente, all’ipotiroidismo subclinico, all’ipotiroidismo clinico, ma anche alla più rara tireotossicosi (Hashitossicosi)83,84. Numerosi studi12,85,86 hanno dimostrato che la TCA giovanile si associa più tipicamente all’eutiroidismo al momento della diagnosi. I fattori principali che influenzano lo stato della funzionalità tiroidea al momento della diagnosi sono l’età, i disordini cromosomici, altre patologie autoimmuni e fattori ambientali. In particolare sembrano essere correlati ad una maggiore disfunzione tiroidea le forme più precoci3 e quelle associate ad alcune sindromi cromosomiche come la sindrome di Down o la sindrome di Turner. Alcune patologie autoimmuni sembrano invece ridurre il rischio di disfunzione tiroidea85,87. Il rilievo occasionale di un TSH superiore alla norma associato alla presenza del gozzo può essere la prima manifestazione clinica dell’ipotiroidismo indotto dalla TCA. In presenza di un valore del TSH 21 superiore alla norma, il dosaggio degli ormoni tiroidei (in particolare della FT4) permette di distinguere l’ipotiroidismo subclinico (ormoni tiroidei normali) da quello clinico (ormoni tiroidei ridotti). La positività degli AbTPO e il TSH superiore alla norma sembrano essere i fattori più importanti nel prevedere la progressione verso l’ipotiroidismo clinico negli adulti8,9, infatti in presenza di entrambi questi fattori la progressione è del 5% per anno88. In un recente studio il valore di TSH superiore alla norma sembra essere un fattore di rischio molto più forte rispetto alla positività per gli AbTPO89. Anche l’ipoecogenicità della tiroide all’ecografia permette di indentificare quei soggetti che sono a rischio di progressione verso l’ipotiroidismo clinico90. Anche la TCA giovanile è caratterizzata dalla tendenza a progredire verso l’ipotiroidismo clinico. La presenza del gozzo e degli AbTg elevati al momento della diagnosi, insieme al progressivo aumento sia degli AbTPO che del valore del TSH superiore alla norma possono essere considerati come fattori predittivi della progressione verso l’ipotiroidismo20. Il valore del TSH superiore alla norma sembra essere, come per gli adulti89, il fattore predittivo più importante21. Secondo una studio condotto da Fava et al91 anche l’ecografia, come negli adulti90, potrebbe essere un mezzo per identificare quei soggetti che sono a maggior rischio di progredire verso un ipotiroidismo clinicamente manifesto. Raramente si osserva l’evoluzione da ipotiroidismo a tireotossicosi (Hashitossicosi). Tale fenomeno è dovuto a processi di distruzione dei follicoli tiroidei causati da meccanismi immunitari, con rapida dismissione in circolo di ormoni tiroidei immagazzinati nella ghiandola con conseguente tireotossicosi transitoria. Infine, è rara l’evoluzione della TCA verso il morbo di Basedow 92. Secondo un recente studio, in almeno il 3,7% dei bambini e 22 adolescenti con Morbo di Basedow, l'insorgenza di ipertiroidismo può essere preceduta da una diagnosi TCA giovanile, sia con ipotiroidismo che con eutiroidismo93. Un meccanismo che potrebbe essere ipotizzato per tenere conto del cambiamento della TCA a morbo di Basedow è l'alterazione nell'attività biologica dei TRAb da anticorpi prevalentemente tiroidebloccanti, durante la fase di ipotiroidismo, ad anticorpi stimolanti la tiroide quando si manifesta l’ipertiroidismo94. Diagnosi La diagnosi di TCA si basa sulla presenza degli autoanticorpi (AbTg e AbTPO) e sull’aspetto ipoecogeno della tiroide all’ecografia. Questi due marcatori permettono di differenziare la forma autoimmune da altre forme di ipotiroidismo95. Negli adulti ci possono essere anche rari casi di ipertireotropinemia isolata, (valori di TSH superiori alla norma con normali livelli degli ormoni tiroidei e normoecogenicità della tiroide). Questo quadro può essere dovuto a mutazioni che inattivano parzialmente il recettore del TSH, a resistenza agli ormoni tiroidei (sindrome di Refetoff) o a altri difetti96. Alcuni casi di ipertireotropinemia isolata sono stati recentemente associati alla presenza di autoanticorpi eterofili diretti contro il TSH che formano nel siero macrocomplessi, definiti macroTSH, che sono difficilmente eliminabili, biologicamente non attivi, ma che vengono rilevati con le tecniche di dosaggio del TSH97,98. Soprattutto nei bambini è comune il rilievo di una ipertireotropinemia isolata di incerto significato clinico. Spesso sono forme di ipotiroidismo congenito insorte tardivamente e sfuggite allo screening neonatale. Ci possono essere anche forme di disgenesia tiroidea, come una ghiandola ectopica, o difetti congeniti nella catena di sintesi degli ormoni tiroidei99. È stato dimostrato che il riscontro di 23 un’ipertireotropinemia isolata è più frequente nei bambini prematuri100 e in coloro che sono nati da tecniche di fecondazione assistita101. Un’altra diagnosi differenziale importante è con l’ipertireotropinemia associata all’obesità, condizione sempre più frequente. Oltre all’aumento del TSH in questi soggetti si ritrova anche l’ipoecogenicità della tiroide, dovuta dalla presenza di abbondante tessuto adiposo a livello del collo102, che complica la diagnosi differenziale102-104. Autoanticorpi La presenza di AbTg e AbTPO è estremamente frequente nella TCA degli adulti, infatti gli AbTPO si ritrovano in circa il 90% dei pazienti105 e gli AbTg nel 70% circa106. Non è infrequente trovare elevati valori degli AbTPO con gli AbTg negativi, mentre il rilievo contrario è molto raro nell’adulto8. Per questo gli AbTg spesso vengono dosati solo nel sospetto di TCA quando gli AbTPO sono negativi. Nelle forme giovanili di TCA invece gli autoanticorpi anti-tiroide sono più frequentemente negativi o a più basso titolo107. Bassi titoli di AbTg e AbTPO si possono ritrovare anche nei soggetti affetti da patologie tiroidee non autoimmuni, come il gozzo multinodulare e il carcinoma papillare della tiroide, e anche in soggetti sani. Dallo studio NHANESIII8 è emerso che nella popolazione generale la positività degli AbTPO è del 13±0,4% e quella degli AbTg è dell’11,5±0,5%. La percentuale è più elevata nel sesso femminile e aumenta con l’età. Anche nella popolazione esente da malattia è riscontrabile una certa percentuale di soggetti con positività per gli AbTg. Nei bambini e negli adolescenti non sembrano esserci grosse differenze rispetto agli adulti per quanto riguarda la positività degli 24 autoanticorpi. Infatti considerando la popolazione caucasica tra i 12 e i 19 anni è stato rilevato che la prevalenza degli AbTg è simile a quella degli AbTPO e la prevalenza di entrambi aumenta con l’età8. Risultati simili sono emersi da un altro studio di Prentice et al19, in cui sono stati valutati soggetti fino a 18 anni. Invece nello studio di Chen et al1 si evidenzia che, a differenza della popolazione adulta, nei bambini è più facile ritrovare gli AbTg positivi e gli AbTPO negativi rispetto al contrario. Questi dati sono in parte confermati anche da un altro recente studio20. Mettendo in relazione il valore del TSH aumentato (>4,5 mI.U./L) e l’ipotiroidismo clinico con la positività degli autoanticorpi si vede che nell’adulto entrambi correlano in modo significativo con gli AbTPO e non con gli AbTg8. Inoltre in nessun soggetto con ipotiroidismo clinico sono presenti gli AbTg in assenza degli AbTPO. Sono infatti gli AbTPO ad essere maggiormente associati all’infiltrato linfocitario65 e al rischio di sviluppare ipotiroidismo8,9. Nei bambini, come negli adulti, è stata rilevata una relazione tra l’insorgenza dell’ipotiroidismo e la positività degli AbTPO, o di entrambi gli autoanticorpi, ma non per quella isolata degli AbTg12; anche se in un altro studio20 viene dimostrato che esiste una correlazione positiva tra il valore del TSH superiore alla norma e la positività sia degli AbTg che degli AbTPO. L'assenza di AbTPO e/o AbTg circolanti non esclude la diagnosi di TCA, poiché in una minoranza di pazienti con questa malattia, specie nelle prime decadi di vita107,108, gli autoanticorpi possono risultare entrambi negativi. Questa forma prende il nome di TCA "sieronegativa", la cui prevalenza nell’adulto è stimata intorno al 5% dei soggetti con ipotiroidismo108. In questi casi è necessario eseguire l’ecografia tiroidea. 25 Ecografia Nella TCA l’ecografia è essenziale per la diagnosi permettendo di determinare la forma, il volume e soprattutto la struttura della tiroide. Sia negli adulti che nei bambini l’aspetto tipico della tiroide è quello di una ghiandola aumentata di volume, con ecostruttura disomogenea con aree ipoecogene109 o con un’ipoecogenicità diffusa110. Questo caratteristico pattern ecografico è dovuto alla diffusa infiltrazione linfocitaria su base autoimmune della ghiandola. Con l’utilizzo del color-doppler si può evidenziare una diffusa vascolarizzazione ghiandolare nelle forme di ipotiroidismo non trattato, per stimolazione da parte del TSH111. Anche l’elastosonografia può aiutare nella diagnosi indicando una consistenza aumentata del tessuto tiroideo 112. Numerosi studi, condotti sia su soggetti affetti da tiroidite di Hashimoto113, sia sulla popolazione generale114, dimostrano che l’ipoecogenicità della tiroide, e anche l’aspetto disomogeneo del tessuto ghiandolare, correlano con la positività degli AbTPO, più che degli AbTg (Figura 5). Anche nei bambini un pattern eterogeneo del tessuto tiroideo all’ecografia è più comune nei soggetti con AbTPO positivi, anche se non c’è correlazione con il titolo115. 26 Figura 5 Figura 5- Percentuale di soggetti con tiroide ipoecogena all’ecografia in relazione con il titolo degli AbTg e degli AbTPO 114. Secondo alcuni studi l’ipoecogenicità della tiroide sarebbe un segno utile non solo per la diagnosi di ipotiroidismo ma anche nell’identificare quei soggetti che sono predisposti a svilupparlo nel tempo 90. Quindi l’ecografia tiroidea insieme al dosaggio degli autoanticorpi anti-tiroide è utile per identificare soggetti con una malattia tiroidea autoimmune preclinica o coloro a rischio di svilupparla nell'ambito di una popolazione apparentemente sana110,116. Inoltre, negli adulti, sembrerebbe un marker più sensibile rispetto alla positività degli autoanticorpi per la diagnosi e nel predire una disfunzione tiroidea116. Quindi alcuni autori sostengono che il pattern ipoecogeno della tiroide rappresenti uno stadio precoce della TCA90. L’ecografia è importante per la diagnosi anche nelle forme di TCA giovanile117, però la sua sensibilità sembra essere minore rispetto all’adulto118. Inoltre sarebbe anche meno sensibile rispetto alla positività degli autoanticorpi119. In un recente studio infatti è stato dimostrato che la 27 percentuale di soggetti con aspetto ipoecogeno della tiroide al momento della diagnosi di TCA è del 37%, ed aumenta nel corso del follow up119. Quindi nei bambini l’ipoecogenicità potrebbe non essere un segno di autoimmunità. D’altra parte un’ecogenicità eterogenea è stata descritta di tanto in tanto prima della comparsa degli autoanticorpi13, e sembrerebbe essere un segno di progressione verso l’ipotiroidismo clinico91. Quindi l’ipoecogenicità potrebbe rappresentare, come negli adulti90, uno stadio precoce della storia naturale della TCA. Terapia Nei rarissimi casi con gozzo di grandi dimensioni e con compressione tracheale è indicato l’intervento di tiroidectomia, mentre il paziente senza gozzo o con gozzo di piccole dimensioni e con eutiroidismo non richiede alcun trattamento. La conseguenza più frequente della TCA è l’insorgenza di ipotiroidismo il cui trattamento è agevole con la terapia ormonale sostitutiva. La terapia sostitutiva ideale è quella in grado di fornire l’esatta proporzione di T4 e T3 secrete dalla ghiandola in condizioni normali. Iniziali tentativi di riprodurre la secrezione tiroidea mediante la somministrazione contemporanea di T4 e T3 furono rapidamente abbandonati poiché i pazienti presentavano manifestazioni di tireotossicosi120; da allora le linee guida indicano la T4 come ormone di scelta nella terapia dell’ipotiroidismo121. Nei soggetti con ipotiroidismo clinico la terapia sostitutiva è obbligatoria mentre il dibattito è ancora aperto per quanto riguarda la terapia dell’ipotiroidismo subclinico122. Tutti gli autori concordano nel trattare l’ipotiroidismo subclinico quando il TSH è maggiore di 10 mU.I./L, mentre 28 un gruppo di esperti si è recentemente dichiarato contrario al trattamento di pazienti con ipotiroidismo subclinico quando il TSH è compreso tra 4,5 e 10 mI.U./L123. Queste conclusioni sono comunque state contestate da un consenso raggiunto dall’ American Association of Clinical Endocrinologists (AACE), dall’ American Thyroid Association (ATA) e dall’ Endocrine Society (TES)124. La dose iniziale di levo-tiroxina è basata sul peso, sul sesso e sull’età. In genere nell’adulto si calcola una dose di L-T4 pari a 1,6 µg/Kg di peso corporeo al giorno. Nelle forme di TCA giovanile invece si può cominciare con una dose di 25 µg/die per i bambini e 50 µg/die per gli adolescenti3. La concentrazione sierica di TSH è il più sensibile indice di efficacia degli ormoni tiroidei125,126 e nell’ipotiroidismo primitivo rappresenta dunque il valore più utile per regolare la dose di L-T4. La maggior parte degli esperti concorda nel porre come obiettivo valori di TSH compresi tra 0,5 e 2 mU.I./L121. E’ stato ipotizzato che nelle forme di tiroidite di Hashimoto il trattamento con L-T4 possa determinare la riduzione del volume del gozzo. Tale ipotesi è stata recentemente confermata in uno studio condotto su bambini affetti da TCA127. Tuttavia non sono presenti al momento sufficienti evidenze per raccomandare il trattamento con L-T4 a tale scopo. 29 3. SCOPO DELLA TESI L’obiettivo di questo studio retrospettivo è stato la caratterizzazione della TCA giovanile. Abbiamo valutato la positività degli AbTg, degli AbTPO, l’ipoecogenicità della tiroide all’ecografia, il valore del TSH e come questi si correlavano tra di loro. Inoltre abbiamo valutato come questi elementi si distribuivano nelle varie fasce di età per indentificare la manifestazione clinica più precoce della TCA giovanile. 30 4. MATERIALI E METODI Gruppo di studio Sono stati selezionati tutti i pazienti di età inferiore ai 14 anni che avevano eseguito un prelievo per dosare gli autoanticorpi tiroidei (AbTg e AbTPO) presso il laboratorio di Endocrinologia dal 2003 al 2013, nel sospetto di una patologia tiroidea autoimmune. I motivi principali per cui questi soggetti avevano eseguito la visita erano la familiarità per patologie tiroidee autoimmuni e il pregresso rilievo di un TSH superiore alla norma. 423 pazienti rispondevano a questi criteri. Venivano esclusi i soggetti con ipotiroidismo congenito (n=71), quelli con patologia nodulare incluso il carcinoma della tiroide (n=19), quelli con morbo di Basedow (n=8), e tutti quei soggetti che presentavano tiroide normofunzionante, normoecogenicità e autoanticorpi negativi (n=120). 205 pazienti (M=81; F=124; anni 8,4 ± 3,3) che presentavano un’alterazione del TSH o un pattern ipoecogeno della tiroide o la positività per gli AbTg o per gli AbTPO venivano inclusi nello studio. Venivano valutati: TSH, FT4, AbTg, AbTPO, ecografia tiroidea ed eventuale terapia con levo-tiroxina. Dosaggi di laboratorio L’FT4 (7-17 pg/mL) veniva dosato mediante dosaggio immunologico competitivo (VITROS ECi/ECiQ, Ortho-clinical Diagnostics, Johnson and Johnson, Buckinghamshire, UK). 31 Il TSH veniva dosato mediante dosaggio immunometrico in chemiluminescenza in fase solida a doppio sito (Immulite 2000, Euro/DPC, Siemens Healtcare Diagnostics, Gwynedd, UK; valori normali 0,4 – 3,6 µU/ml). Un valore del TSH≥4,5 mU.I./l veniva considerato patologico. Gli AbTg (positivi >30 U.I./ml) e gli AbTPO (positivi >10 U.I./ml) venivano dosati mediante dosaggio immunoenzimometrico (AIA-Pack, Tosoh Bioscience, Giappone). Ecografia L’ecografia tiroidea era stata eseguita mediante apparecchio Technos, Esaote Biomedica, Genova, Italia, con un trasduttore lineare a 7,5 MHz. In base all’ecogenicità i pazienti venivano classificati in due gruppi: - con tiroide normoecogena (inclusi quelli che avevano una tiroide solo lievemente ipoecogena). - con tiroide ipoecogena. Analisi statistica Per l’analisi statistica veniva usato il programma SPSS 13.0 per Windows. Il confronto tra percentuale di positività degli AbTg, degli AbTPO, ipoecogenicità e valore del TSH veniva eseguito mediante test del Chi-square. La differenza nella distribuzione per età veniva valutata utilizzando il test del Chi-square for trend. I valori di p < 0,05 erano considerati statisticamente significativi. 32 5. RISULTATI Autoanticorpi Nei 205 soggetti veniva valutata la positività degli AbTg e degli AbTPO (figura 6). - 112 soggetti (54,6%) presentavano sia gli AbTg che gli AbTPO negativi. - 63 soggetti (30,7%) presentavano sia gli AbTg che gli AbTPO positivi, con titolo medio di 642,3 U.I./ml per gli AbTg e di 405,3 U.I./ml per gli AbTPO. - 26 soggetti (12,7%) presentavano gli AbTg positivi (titolo medio 480,1 U.I/ml) e gli AbTPO negativi. - 4 soggetti (2%), presentavano gli AbTPO positivi (titolo medio 300,6 U.I./ml) e gli AbTg negativi. Ecogenicità L’ecografia tiroidea era disponibile in 197 pazienti dei 205 selezionati. Di questi, 92 (46,7%) presentavano un pattern normoecogeno e 105 (53,3%) un pattern ipoecogeno (figura 7). 43 soggetti (21,8%) avevano una ghiandola marcatamente ipoecogena TSH Un TSH superiore alla norma (≥4,5 mU.I./l) veniva rilevato al momento della visita o era stato evidenziato in precedenza in 109 dei 205 soggetti (53,2%). Di questi 49 erano già in terapia con levo-tiroxina, 6 33 avevano un ipotiroidismo clinico e 54 un ipotiroidismo subclinico non trattato. 96 pazienti (46,8%) presentavano invece un TSH sempre normale e non avevano mai eseguito terapia con levo-tiroxina (figura 8). Ecogenicità e autoanticorpi La presenza degli autoanticorpi veniva correlata con l’ecogenicità della ghiandola nei 197 in cui era disponibile un’ecografia tiroidea (figura 9). - 111 pazienti avevano gli AbTg negativi e 86 gli AbTg positivi. Tra i pazienti con AbTg negativi la ghiandola era normoecogena in 60 (54,1%) e ipoecogena in 51 (45,9%), mentre tra quelli con AbTg positivi la ghiandola era normoecogena in 32 (37,2%) e ipoecogena in 54 (62,8%) (p=0,024). - 132 pazienti avevano gli AbTPO negativi e 65 gli AbTPO positivi. Tra i pazienti con AbTPO negativi la ghiandola era normoecogena in 78 (59,1%) e ipoecogena in 54 (40,9%), mentre tra quelli con AbTPO positivi la ghiandola era normoecogena in 14 (21,5%) e ipoecogena in 51 (78,5%) (p<0,001). Valore del TSH, ecogenicità e autoanticorpi La positività degli autoanticorpi e l’ipoecogenicità della tiroide venivano correlati con il valore del TSH (figura 10). - Degli 89 pazienti con gli AbTg positivi 39 (43,8%) avevano il TSH normale e 50 (56,2%) il TSH superiore alla norma. 34 - Dei 67 pazienti con gli AbTPO positivi 28 (41,8%) avevano il TSH normale e 39 (58,2%) il TSH superiore alla norma. - Dei 105 pazienti con la ghiandola ipoecogena 55 (52,4%) avevano il TSH normale e 50 (47,6%) il TSH superiore alla norma. - Non c’era nessuna differenza nella percentuale dei soggetti con TSH superiore alla norma confrontando il gruppo con AbTg positivi con quello con AbTPO positivi (p=0,06) e con quello con ipoecogenicità (p=0,23). Allo stesso modo non c’era differenza nella percentuale dei soggetti con TSH superiore alla norma nel gruppo con AbTPO positivi rispetto a quello con ipoecogenicità (p=0,17). Stratificazione per età La distribuzione per fasce di età dei soggetti con TSH superiore alla norma, di quelli con AbTg positivi, di quelli con AbTPO positivi e di quelli con tiroide ipoecogena è riportato nella figura 11. - Dei 16 bambini con età inferiore a due anni, 12 (75%) presentavano il TSH superiore alla norma e nessuno presentava gli AbTg positivi, gli AbTPO positivi e l’ecografia ipoecogena. - Dei 14 bambini di età tra 2 e 4 anni, 11 (78,6%) avevano il TSH superiore alla norma, nessuno presentava gli AbTg e/o gli AbTPO positivi, e 3 (21,4%) avevano un pattern ipoecogeno. - Dei 19 bambini di età fra 4 e 6 anni, 13 (68,4%) presentavano il TSH superiore alla norma, 9 (47,4%) gli AbTg positivi e 2 (10,5%) gli AbTPO positivi. Dei 17 pazienti in cui era disponibile l’ecografia la ghiandola era ipoecogena in 4 (23,5%). 35 - Dei 42 bambini di età fra 6 e 8 anni, 19 (45,2%) presentavano il TSH superiore alla norma, 20 (47,6%) gli AbTg positivi e 15 (35,7%) gli AbTPO positivi. Dei 41 pazienti in cui era disponibile l’ecografia la ghiandola era ipoecogena in 26 (63,4%). - Dei 42 bambini di età fra 8 e 10 anni, 22 (46,8%) presentavano il TSH superiore alla norma, 25 (53,2%) gli AbTg positivi e 18 (38,3%) gli AbTPO positivi. Dei 45 pazienti in cui era disponibile l’ecografia la ghiandola era ipoecogena in 25 (55,6%). - Dei 47 bambini di età fra 10 e 12 anni, 26 (55,3%) presentavano il TSH superiore alla norma, 24 (51,1%) gli AbTg positivi e 22 (46,8%) gli AbTPO positivi. Dei 46 pazienti in cui era disponibile l’ecografia la ghiandola era ipoecogena in 34 (73,9%). - Dei 20 adolescenti di età tra 12 e 14 anni, 6 (30%) avevano il TSH superiore alla norma, 11 (55%) gli AbTg positivi, 10 (50%) gli AbTPO positivi, e 13 (65%) avevano un pattern ipoecogeno. Vi era una differenza significativa nelle distribuzione per età sia del valore del TSH superiore alla norma, sia della positività degli AbTg, sia di quella degli AbTPO, come pure della ipoecogenicità: TSH (p=0,003), AbTg (p<0,001), AbTPO (p<0,001), ipoecogenicità (p<0,001). 36 Figure risultati Figura 6 Figura 6- Negatività e positività degli AbTg e degli AbTPO. Figura 7 Figura 7- Ecogenicità tiroidea. 37 Figura 8 Figura 8- Percentuale di soggetti con TSH normale e con TSH superiore alla norma. Figura 9 p=0,024 p<0,001 Figura 9- Correlazione degli AbTg e degli AbTPO con l’ecogenicità della tiroide. 38 Figura 10 n.s. n.s. n.s. Figura 10- AbTg positivi, AbTPO positivi, ipoecogenictà e TSH superiore alla norma. 39 Figura 11 Figura 11- Valore del TSH superiore alla norma, positività degli AbTg, positività degli AbTPO e ipoecogenicità della tiroide in rapporto all’età. 40 6. DISCUSSIONE Il nostro studio retrospettivo aveva lo scopo di caratterizzare la TCA giovanile, in particolare abbiamo valutato l’età di insorgenza, la presenza degli autoanticorpi e l’ipoecogenicità della tiroide. Inoltre abbiamo cercato di identificare la prima manifestazione clinica della TCA. Abbiamo valutato una popolazione di 205 bambini e adolescenti (età inferiore ai 14 anni) che si erano presentati all’ U.O. di Endocrinologia nel sospetto di una patologia autoimmune tiroidea. La valutazione era stata effettuata soprattutto per la familiarità per tireopatie, o per il riscontro di un valore del TSH superiore alla norma. Abbiamo escluso i soggetti con diagnosi di ipotiroidismo congenito o con altre patologia tiroidee e tutti quelli che avevano sia valori normali del TSH, sia autoanticorpi negativi, sia la tiroide normoecogena. Più della metà dei soggetti aveva sia gli AbTg che gli AbTPO negativi, mentre un terzo li aveva entrambi positivi. Tra coloro che avevano una positività isolata di uno dei due autoanticorpi nella maggior parte dei casi era degli AbTg. Per quanto le concentrazioni degli autoanticorpi non possono essere paragonate in valore assoluto, la concentrazione degli AbTg era superiore a quella degli AbTPO sia nei soggetti positivi per entrambi gli autoanticorpi sia in quelli positivi per uno soltanto. Per quanto riguarda l’ecogenicità della tiroide, circa la metà dei soggetti aveva un pattern ipoecogeno. Allo stesso modo circa la metà avevano un TSH superiore alla norma al momento della valutazione o in una visita precedente, e l’altra metà aveva avuto il TSH sempre nella norma. In poco più del 50% dei casi la negatività degli AbTg e degli AbTPO si correlava con una ghiandola normoecogena. Al contrario la positività degli 41 autoanticorpi, e in particolare degli AbTPO si correlava con una ghiandola ipoecogena nella maggior parte dei casi. Poco più del 50% dei soggetti con AbTg o AbTPO positivi avevano il valore del TSH superiore alla norma. Solo la metà dei soggetti con ghiandola ipoecogena presentavano il TSH superiore alla norma. Abbiamo infine valutato la percentuale di soggetti con TSH superiore alla norma, quelli con AbTg positivi, quelli con AbTPO positivi e quelli con ipoecogenicità della tiroide nelle varie fasce d’età. Dall’analisi di questi dati emerge che vi era una differenza significativa nelle distribuzione per età sia del valore del TSH superiore alla norma, sia della positività degli AbTg, sia di quella degli AbTPO, come pure della ipoecogenicità. Fino a 4 anni la percentuale di soggetti con TSH superiore alla norma era elevata (>70%), mentre gli autoanticorpi erano assenti in tutti e la ghiandola ipoecogena in pochi soggetti. La percentuale dei soggetti con TSH superiore alla norma si riduceva progressivamente nelle successive fasce di età. Gli autoanticorpi cominciavano a comparire dai 4 anni d’età. Soprattutto nel gruppo tra 4 e 6 anni la percentuale di bambini con AbTg positivi era maggiore di quella con AbTPO positivi e anche se la percentuale di positività degli AbTPO saliva progressivamente nelle fasce di età successive, comunque non superava mai quella degli AbTg. Per quanto riguarda l’aspetto ipoecogeno della tiroide questo compariva precocemente, tra i 2 e i 4 anni di età, anche se in un numero molto limitato di soggetti, per poi aumentare progressivamente nelle fasce di età successive. La popolazione da noi studiata includeva un gruppo di pazienti con “ipertireotropinemia isolata” in cui era presente un TSH superiore alla norma in assenza di autoanticorpi e di alterazioni ecografiche della tiroide. Questo rilievo era più frequente nelle prime fasce di età, in particolare fino a quattro 42 anni. Il rilievo di un TSH superiore alla norma isolato riconosce probabilmente una patogenesi diversa da quella autoimmune, e può essere dovuto a forme di ipotiroidismo congenito ad insorgenza tardiva sfuggite allo screening neonatale99, oppure a forme di resistenza al TSH, o a macro TSH98. A conferma c’è il rilievo che il 60% dei nostri soggetti con ipertireotropinemia isolata sono di sesso maschile, mentre la patologia autoimmune tiroidea è più frequente nel sesso femminile12. Sulla base dei nostri dati possiamo confermare che nei primi 4 anni di età la patologia tiroidea autoimmune è estremamente rara, come già riportato in letteratura3,17. Il rilievo di un TSH superiore alla norma in questa fascia di età, che viene comunemente definito ipertireotropinemia isolata, identifica una condizioni diversa dalla TCA giovanile. Nelle successive fasce di età la percentuale di soggetti con TSH superiore alla norma si riduceva progressivamente. Nei soggetti di età superiore ai 4 anni la negatività degli autoanticorpi può essere giustificata sia dall’inclusione di alcuni soggetti con ipertireotropinemia isolata, sia di altri con TCA giovanile sieronegativa, che è riportata con una frequenza maggiore nella forma giovanile rispetto alla forma degli adulti107,108. La positività degli AbTg iniziava a comparire nei soggetti di 4 anni di età, in una percentuale più elevata rispetto a quella degli AbTPO. Questo rilievo si discosta da quello che si ritrova nell’adulto, in cui spesso gli AbTPO sono presenti in assenza degli AbTg mentre il rilievo opposto è molto raro8. Quindi il dosaggio degli AbTg è fondamentale per la diagnosi di TCA giovanile. La percentuale di positività degli AbTPO saliva poi progressivamente nelle fasce di età successive. I nostri risultati confermano l’ipotesi proposta da Chen et al1, secondo cui la perdita di tolleranza immunitaria nei confronti della Tg sarebbe il primo momento nella storia 43 naturale della TCA. Questa sarebbe probabilmente la conseguenza di modificazioni post-trascrizionali della Tg indotte dallo iodio. E’ stato infatti dimostrato che lo iodio smaschera degli epitopi criptici della Tg rendendola maggiormente immunogenica e questo, in soggetti geneticamente predisposti, potrebbe indurre l’autoimmunità43. Viceversa la TCA dell’adulto è caratterizzata dalla positività degli AbTPO. Sono questi infatti che si correlano maggiormente nelle forme conclamate8 con il rischio di sviluppare l’ipotiroidismo8,9,88 e con l’infiltrazione linfocitaria della tiroide113-115. Gli AbTg invece sono più spesso assenti nell’adulto 8. È pertanto verosimile che ci sia un inversione della risposta anticorpale dagli AbTg agli AbTPO nel corso della storia naturale della malattia1. Circa la metà dei soggetti inclusi in questo studio aveva un pattern ipoecogeno della tiroide. Già nei bambini tra 2 e 4 anni c’era una, seppur piccola, percentuale di soggetti con ghiandola ipoecogena e autoanticorpi negativi e anche nelle successive fasce di età vi erano soggetti con ghiandola ipoecogena e autoanticorpi negativi. I dati presenti in letteratura riguardo l’ipoecogenicità nella TCA giovanile sono contradditori. Alcuni lavori riportano che nella TCA giovanile l’ecografia è meno sensibile per la diagnosi rispetto all’adulto118, ed è anche meno sensibile rispetto agli autoanticorpi119. Altri lavori viceversa hanno descritto la comparsa di un’ecogenicità eterogenea prima di quella degli autoanticorpi13,107, e il suo valore predittivo per la comparsa dell’ipotiroidismo clinico91. È necessario uno studio longitudinale che valuti l’andamento del TSH e degli autoanticorpi nei soggetti con ipoecogenicità per poter confermare o meno che questa rappresenti un indice precoce di autoimmunità nei giovani. La correlazione diretta tra ipoecogenicità e la positività degli autoanticorpi conferma i risultati di studi precedenti condotti sia negli 44 adulti113,114 che nei bambini115. In particolare la correlazione è maggiore per gli AbTPO rispetto agli AbTg. La positività degli AbTg e quella degli AbTPO si correlava in maniera simile con un valore del TSH superiore alla norma. Questo è in accordo con alcuni studi condotti sui bambini con TCA20. Altri studi comunque hanno rilevato una relazione esclusiva con la positività degli AbTPO, o di entrambi, ma non con quella isolata degli AbTg12. Invece negli adulti il valore del TSH superiore alla norma si correla esclusivamente con la positività degli AbTPO8,9,88. Infatti nello studio NHANES III8 vi era una correlazione tra i livelli superiori alla norma del TSH e l’ipotiroidismo clinico e la positività degli AbTPO ma non degli AbTg, inoltre in nessun soggetto con ipotiroidismo clinico erano presenti gli AbTg in assenza di AbTPO. La scarsa correlazione tra ipoecogenicità e valori superiori alla norma del TSH favorisce l’ipotesi che l’ipoecogenicità non sia un segno di autoimmunità nei bambini. Va comunque rilevato che uno studio ha dimostrato che l’ipoecogenicità della tiroide nei bambini è un segno predittivo di progressione da eutiroidismo ad ipotiroidismo91, così come nell’adulto8,9,88. 45 7. CONCLUSIONI I nostri risultati confermano che la TCA giovanile è rara prima dei 4 anni di età. Quindi un rilievo del TSH superiore alla norma (“ipertireotropinemia isolata”) in questa fascia di età identifica condizioni diverse dalla TCA giovanile. Nella TCA giovanile gli AbTg si positivizzano prima degli AbTPO, e una buona percentuale di soggetti presenta positività solo per i primi. Pertanto, a differenza degli adulti, per la diagnosi di TCA giovanile è essenziale il dosaggio degli AbTg in aggiunta a quello degli AbTPO. Inoltre i nostri dati sostengono l’ipotesi che nello sviluppo dell’autoimmunità tiroidea la risposta alla Tg preceda quella alla TPO. Il valore dell’ecografia per la diagnosi di TCA giovanile resta dubbio. 46 8. INDICE FIGURE Figura 1- Caratteristiche degli autoantigeni tiroidei che possono contribuire alla loro immunogenicità. 2 ........................................................................................................... 12 Figura 2- Sviluppo spontaneo degli autoanticorpi tiroidei: A- nei topi NOD.H2h4, Bnegli umani con TCA giovanile; da Chen et al. 1 C- previsioni e osservazioni per lo sviluppo degli autoanticorpi tiroidei a confronto 2. ....................................................... 14 Figura 3- Rappresentazione schematica dei meccanismi immunitari coinvolti nella patogenesi delle malattie autoimmuni tiroidee. .............................................................. 18 Figura 4- Caratteristiche istologiche della tiroidite cronica autoimmune con infiltrato linfocitario diffuso. ......................................................................................................... 19 Figura 5- Percentuale di soggetti con tiroide ipoecogena all’ecografia in relazione con il titolo degli AbTg e degli AbTPO 114. ............................................................................. 27 Figura 6- Negatività e positività degli AbTg e degli AbTPO. ........................................ 37 Figura 7- Ecogenicità tiroidea........................................................................................ 37 Figura 8- Percentuale di soggetti con TSH normale e con TSH superiore alla norma. .. 38 Figura 9- Correlazione degli AbTg e degli AbTPO con l’ecogenicità della tiroide. ...... 38 Figura 10- AbTg positivi, AbTPO positivi, ipoecogenictà e TSH superiore alla norma. ........................................................................................................................................ 39 Figura 11- Valore del TSH superiore alla norma, positività degli AbTg, positività degli AbTPO e ipoecogenicità della tiroide in rapporto all’età. .............................................. 40 47 9. BIBLIOGRAFIA 1. Chen CR, Hamidi S, Braley-Mullen H, et al. Antibodies to thyroid peroxidase arise spontaneously with age in NOD.H-2h4 mice and appear after thyroglobulin antibodies. Endocrinology 2010; 151(9): 4583-93. 2. McLachlan SM, Rapoport B. Breaking tolerance to thyroid antigens: changing concepts in thyroid autoimmunity. Endocrine reviews 2014; 35(1): 59-105. 3. Latrofa F, Pinchera A. Autoimmune Hypothyroidism. In: Weetman AP, ed. Autoimmune Diseases in Endocrinology. Humana Press Inc., Totowa, NJ; 2008. 4. Hashimoto H. Zur Kenntniss der lymphomatösen Veränderung der schilddrüse (struma lymphomatosa). arch Klin Chir 1912; 97: 219-48. 5. Hunter I, Greene SA, MacDonald TM, Morris AD. Prevalence and aetiology of hypothyroidism in the young. Archives of disease in childhood 2000; 83(3): 207-10. 6. Akamizu T, Amino N, DeGroot LJ. Hashimoto’s thyroiditis. thyroid Disease Manager; 2012. 7. Williams ED, Doniach I. The post-mortem incidence of focal thyroiditis. The Journal of pathology and bacteriology 1962; 83: 255-64. 8. Hollowell JG, Staehling NW, Flanders WD, et al. Serum TSH, T(4), and thyroid antibodies in the United States population (1988 to 1994): National Health and Nutrition Examination Survey (NHANES III). The Journal of clinical endocrinology and metabolism 2002; 87(2): 489-99. 9. Vanderpump MP, Tunbridge WM, French JM, et al. The incidence of thyroid disorders in the community: a twenty-year follow-up of the Whickham Survey. Clinical endocrinology 1995; 43(1): 55-68. 10. Rallison ML, Dobyns BM, Meikle AW, Bishop M, Lyon JL, Stevens W. Natural history of thyroid abnormalities: prevalence, incidence, and regression of thyroid diseases in adolescents and young adults. The American journal of medicine 1991; 91(4): 363-70. 11. Wasniewska M, Vigone MC, Cappa M, et al. Acute suppurative thyroiditis in childhood: relative frequency among thyroid inflammatory diseases*. Journal of endocrinological investigation 2007; 30(4): 346-7. 12. Skarpa V, Kousta E, Tertipi A, et al. Epidemiological characteristics of children with autoimmune thyroid disease. Hormones (Athens, Greece) 2011; 10(3): 207-14. 48 13. Brown RS. Autoimmune thyroiditis in childhood. Journal of clinical research in pediatric endocrinology 2013; 5 Suppl 1: 45-9. 14. de Vries L, Bulvik S, Phillip M. Chronic autoimmune thyroiditis in children and adolescents: at presentation and during long-term follow-up. Archives of disease in childhood 2009; 94(1): 33-7. 15. Demirbilek H, Kandemir N, Gonc EN, Ozon A, Alikasifoglu A, Yordam N. Hashimoto's thyroiditis in children and adolescents: a retrospective study on clinical, epidemiological and laboratory properties of the disease. Journal of pediatric endocrinology & metabolism : JPEM 2007; 20(11): 1199-205. 16. Gopalakrishnan S, Chugh PK, Chhillar M, Ambardar VK, Sahoo M, Sankar R. Goitrous autoimmune thyroiditis in a pediatric population: a longitudinal study. Pediatrics 2008; 122(3): e670-4. 17. Foley TP, Jr., Abbassi V, Copeland KC, Draznin MB. Brief report: hypothyroidism caused by chronic autoimmune thyroiditis in very young infants. The New England journal of medicine 1994; 330(7): 466-8. 18. De Luca F, Santucci S, Corica D, Pitrolo E, Romeo M, Aversa T. Hashimoto's thyroiditis in childhood: presentation modes and evolution over time. Italian journal of pediatrics 2013; 39: 8. 19. Prentice LM, Phillips DI, Sarsero D, Beever K, McLachlan SM, Smith BR. Geographical distribution of subclinical autoimmune thyroid disease in Britain: a study using highly sensitive direct assays for autoantibodies to thyroglobulin and thyroid peroxidase. Acta endocrinologica 1990; 123(5): 493-8. 20. Radetti G, Gottardi E, Bona G, Corrias A, Salardi S, Loche S. The natural history of euthyroid Hashimoto's thyroiditis in children. The Journal of pediatrics 2006; 149(6): 827-32. 21. Radetti G, Maselli M, Buzi F, et al. The natural history of the normal/mild elevated TSH serum levels in children and adolescents with Hashimoto's thyroiditis and isolated hyperthyrotropinaemia: a 3-year follow-up. Clinical endocrinology 2012; 76(3): 394-8. 22. Hasham A, Tomer Y. Genetic and epigenetic mechanisms in thyroid autoimmunity. Immunologic research 2012; 54(1-3): 204-13. 23. Burek CL, Hoffman WH, Rose NR. The presence of thyroid autoantibodies in children and adolescents with autoimmune thyroid disease and in their siblings and parents. Clinical immunology and immunopathology 1982; 25(3): 395-404. 24. Doniach D, Nilsson LR, Roitt IM. Autoimmune Thyroiditis in Children and Adolescents. Ii. Immunological Correlations and Parent Study. Acta paediatrica Scandinavica 1965; 54: 260-74. 49 25. Jaume JC, Burek CL, Hoffman WH, Rose NR, McLachlan SM, Rapoport B. Thyroid peroxidase autoantibody epitopic 'fingerprints' in juvenile Hashimoto's thyroiditis: evidence for conservation over time and in families. Clinical and experimental immunology 1996; 104(1): 115-23. 26. Brix TH, Kyvik KO, Hegedus L. A population-based study of chronic autoimmune hypothyroidism in Danish twins. The Journal of clinical endocrinology and metabolism 2000; 85(2): 536-9. 27. Dayan CM, Daniels GH. Chronic autoimmune thyroiditis. The New England journal of medicine 1996; 335(2): 99-107. 28. Ban Y, Greenberg DA, Concepcion E, Skrabanek L, Villanueva R, Tomer Y. Amino acid substitutions in the thyroglobulin gene are associated with susceptibility to human and murine autoimmune thyroid disease. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 2003; 100(25): 15119-24. 29. Ueda H, Howson JM, Esposito L, et al. Association of the T-cell regulatory gene CTLA4 with susceptibility to autoimmune disease. Nature 2003; 423(6939): 506-11. 30. Tomer Y, Davies TF. Searching for the autoimmune thyroid disease susceptibility genes: from gene mapping to gene function. Endocrine reviews 2003; 24(5): 694-717. 31. Barbesino G, Chiovato L. The genetics of Hashimoto's disease. Endocrinology and metabolism clinics of North America 2000; 29(2): 357-74. 32. McHardy-Young S, Doniach D, Polani PE. Thyroid function in Turner's syndrome and allied conditions. Lancet (London, England) 1970; 2(7684): 1161-4. 33. Friedman DL, Kastner T, Pond WS, O'Brien DR. Thyroid dysfunction in individuals with Down syndrome. Archives of internal medicine 1989; 149(9): 1990-3. 34. Kennedy RL, Jones TH, Cuckle HS. Down's syndrome and the thyroid. Clinical endocrinology 1992; 37(6): 471-6. 35. Olsen NJ, Kovacs WJ. Gonadal steroids and immunity. Endocrine reviews 1996; 17(4): 369-84. 36. Chiovato L, Lapi P, Fiore E, Tonacchera M, Pinchera A. Thyroid autoimmunity and female gender. Journal of endocrinological investigation 1993; 16(5): 384-91. 37. Wick G, Brezinschek HP, Hala K, Dietrich H, Wolf H, Kroemer G. The obese strain of chickens: an animal model with spontaneous autoimmune thyroiditis. Advances in immunology 1989; 47: 433-500. 38. Phillips DI, Osmond C, Baird J, Huckle A, Rees-Smith B. Is birthweight associated with thyroid autoimmunity? A study in twins. Thyroid : official journal of the American Thyroid Association 2002; 12(5): 377-80. 50 39. Li Y, Teng D, Shan Z, et al. Antithyroperoxidase and antithyroglobulin antibodies in a five-year follow-up survey of populations with different iodine intakes. The Journal of clinical endocrinology and metabolism 2008; 93(5): 1751-7. 40. Harach HR, Escalante DA, Onativia A, Lederer Outes J, Saravia Day E, Williams ED. Thyroid carcinoma and thyroiditis in an endemic goitre region before and after iodine prophylaxis. Acta endocrinologica 1985; 108(1): 55-60. 41. Aghini Lombardi F, Fiore E, Tonacchera M, et al. The effect of voluntary iodine prophylaxis in a small rural community: the Pescopagano survey 15 years later. The Journal of clinical endocrinology and metabolism 2013; 98(3): 1031-9. 42. Braverman LE, Ingbar SH, Vagenakis AG, Adams L, Maloof F. Enhanced susceptibility to iodide myxedema in patients with Hashimoto's disease. The Journal of clinical endocrinology and metabolism 1971; 32(4): 515-21. 43. Latrofa F, Fiore E, Rago T, et al. Iodine contributes to thyroid autoimmunity in humans by unmasking a cryptic epitope on thyroglobulin. The Journal of clinical endocrinology and metabolism 2013; 98(11): E1768-74. 44. McLachlan SM, Rapoport B. The molecular biology of thyroid peroxidase: cloning, expression and role as autoantigen in autoimmune thyroid disease. Endocrine reviews 1992; 13(2): 192-206. 45. McLachlan SM, Rapoport B. Why measure thyroglobulin autoantibodies rather than thyroid peroxidase autoantibodies? Thyroid : official journal of the American Thyroid Association 2004; 14(7): 510-20. 46. Latrofa F, Pichurin P, Guo J, Rapoport B, McLachlan SM. Thyroglobulinthyroperoxidase autoantibodies are polyreactive, not bispecific: analysis using human monoclonal autoantibodies. The Journal of clinical endocrinology and metabolism 2003; 88(1): 371-8. 47. Chiovato L, Latrofa F, Braverman LE, et al. Disappearance of humoral thyroid autoimmunity after complete removal of thyroid antigens. Annals of internal medicine 2003; 139(5 Pt 1): 346-51. 48. Rose NR, Twarog FJ, Crowle AJ. Murine thyroiditis: importance of adjuvant and mouse strain for the induction of thyroid lesions. Journal of immunology 1971; 106(3): 698-704. 49. Yuan S, Li Q, Zhang Y, et al. Changes in anti-thyroglobulin IgG glycosylation patterns in Hashimoto's thyroiditis patients. The Journal of clinical endocrinology and metabolism 2015; 100(2): 717-24. 50. Jacobson EM, Tomer Y. The genetic basis of thyroid autoimmunity. Thyroid : official journal of the American Thyroid Association 2007; 17(10): 949-61. 51 51. Roitt IM, Doniach D, Campbell PN, Hudson RV. Auto-antibodies in Hashimoto's disease (lymphadenoid goitre). Lancet (London, England) 1956; 271(6947): 820-1. 52. Wenzel BE, Chow A, Baur R, Schleusener H, Wall JR. Natural killer cell activity in patients with Graves' disease and Hashimoto's thyroiditis. Thyroid : official journal of the American Thyroid Association 1998; 8(11): 1019-22. 53. Muixi L, Carrascal M, Alvarez I, et al. Thyroglobulin peptides associate in vivo to HLA-DR in autoimmune thyroid glands. Journal of immunology 2008; 181(1): 795807. 54. Jacobson EM, Yang H, Menconi F, et al. Employing a recombinant HLA-DR3 expression system to dissect major histocompatibility complex II-thyroglobulin peptide dynamism: a genetic, biochemical, and reverse immunological perspective. The Journal of biological chemistry 2009; 284(49): 34231-43. 55. Misharin AV, Rapoport B, McLachlan SM. Thyroid antigens, not central tolerance, control responses to immunization in BALB/c versus C57BL/6 mice. Thyroid : official journal of the American Thyroid Association 2009; 19(5): 503-9. 56. Feldt-Rasmussen U, Hyltoft Petersen P, Date J. Sex and age correlated reference values of serum thyroglobulin measured by a modified radioimmunoassay. Acta endocrinologica 1979; 90(3): 440-50. 57. Premawardhana LD, Kiso Y, Phillips DI, Morteo C, Furmaniak J, Rees Smith B. Is TPO detectable in the circulation? Thyroid : official journal of the American Thyroid Association 1993; 3(3): 225-8. 58. Portmann L, Hamada N, Heinrich G, DeGroot LJ. Anti-thyroid peroxidase antibody in patients with autoimmune thyroid disease: possible identity with antimicrosomal antibody. The Journal of clinical endocrinology and metabolism 1985; 61(5): 1001-3. 59. Jaume JC, Guo J, Pauls DL, et al. Evidence for genetic transmission of thyroid peroxidase autoantibody epitopic "fingerprints". The Journal of clinical endocrinology and metabolism 1999; 84(4): 1424-31. 60. Chiovato L, Bassi P, Santini F, et al. Antibodies producing complementmediated thyroid cytotoxicity in patients with atrophic or goitrous autoimmune thyroiditis. The Journal of clinical endocrinology and metabolism 1993; 77(6): 1700-5. 61. Guo J, Jaume JC, Rapoport B, McLachlan SM. Recombinant thyroid peroxidase-specific Fab converted to immunoglobulin G (IgG) molecules: evidence for thyroid cell damage by IgG1, but not IgG4, autoantibodies. The Journal of clinical endocrinology and metabolism 1997; 82(3): 925-31. 62. Doniach D, Roitt IM. Auto-immunity and disease. What's new 1962; 229: 22-6. 52 63. Dussault JH, Letarte J, Guyda H, Laberge C. Lack of influence of thyroid antibodies on thyroid function in the newborn infant and on a mass screening program for congenital hypothyroidism. The Journal of pediatrics 1980; 96(3 Pt 1): 385-9. 64. Rotondi M, Chiovato L, Romagnani S, Serio M, Romagnani P. Role of chemokines in endocrine autoimmune diseases. Endocrine reviews 2007; 28(5): 492520. 65. Yoshida H, Amino N, Yagawa K, et al. Association of serum antithyroid antibodies with lymphocytic infiltration of the thyroid gland: studies of seventy autopsied cases. The Journal of clinical endocrinology and metabolism 1978; 46(6): 859-62. 66. Okamoto Y, Hamada N, Saito H, et al. Thyroid peroxidase activity-inhibiting immunoglobulins in patients with autoimmune thyroid disease. The Journal of clinical endocrinology and metabolism 1989; 68(4): 730-4. 67. Saller B, Hormann R, Mann K. Heterogeneity of autoantibodies against thyroid peroxidase in autoimmune thyroid disease: evidence against antibodies directly inhibiting peroxidase activity as regulatory factors in thyroid hormone metabolism. The Journal of clinical endocrinology and metabolism 1991; 72(1): 188-95. 68. Nishikawa T, Jaume JC, McLachlan SM, Rapoport B. Human monoclonal autoantibodies against the immunodominant region on thyroid peroxidase: lack of cross-reactivity with related peroxidases or thyroglobulin and inability to inhibit thyroid peroxidase enzymatic activity. The Journal of clinical endocrinology and metabolism 1995; 80(4): 1461-6. 69. Libert F, Lefort A, Gerard C, et al. Cloning, sequencing and expression of the human thyrotropin (TSH) receptor: evidence for binding of autoantibodies. Biochemical and biophysical research communications 1989; 165(3): 1250-5. 70. Rees Smith B, McLachlan SM, Furmaniak J. Autoantibodies to the thyrotropin receptor. Endocrine reviews 1988; 9(1): 106-21. 71. Jameson JL, Weetman AP. Thyroid disease. In: Longo DN, Kasper DL, Jameson JL, Fauci AS, Hauser SL, Loscalzo J, eds. Harrison's Principles of Internal Medicine: the McGraw-Hill Companies; 2012: 2882-910. 72. Forbes IJ, Roitt IM, Doniach D, Solomon IL. The thyroid cytotoxic autoantibody. The Journal of clinical investigation 1962; 41: 996-1006. 73. Quaratino S, Badami E, Pang YY, et al. Degenerate self-reactive human T-cell receptor causes spontaneous autoimmune disease in mice. Nature medicine 2004; 10(9): 920-6. 74. Mosmann TR, Sad S. The expanding universe of T-cell subsets: Th1, Th2 and more. Immunology today 1996; 17(3): 138-46. 53 75. Weetman AP. Autoimmune thyroid disease: propagation and progression. European journal of endocrinology / European Federation of Endocrine Societies 2003; 148(1): 1-9. 76. Wu Z, Podack ER, McKenzie JM, Olsen KJ, Zakarija M. Perforin expression by thyroid-infiltrating T cells in autoimmune thyroid disease. Clinical and experimental immunology 1994; 98(3): 470-7. 77. Giordano C, Stassi G, De Maria R, et al. Potential involvement of Fas and its ligand in the pathogenesis of Hashimoto's thyroiditis. Science 1997; 275(5302): 960-3. 78. Baloch ZW LV. Pathology. In: Braverman LE UR, ed. Werner & Ingbar’s The Thyroid: a fundamental and clinical text. Philadelphia: Lippincott Williams & Wilkins; 2005. 79. Binet JL, De Gennes JL, Decourt J. [Cytological Study by Electron Microscope of Lympho-Plasmocyte Infiltration in 2 Cases of Hashimoto's Thyroiditis]. Revue francaise d'etudes cliniques et biologiques 1963; 8: 1011-7. 80. Harris M. The cellular infiltrate in Hashimoto's disease and focal lymphocytic thyroiditis. Journal of clinical pathology 1969; 22(3): 326-33. 81. Katz SM, Vickery AL, Jr. The fibrous variant of Hashimoto's thyroiditis. Human pathology 1974; 5(2): 161-70. 82. Bottazzo GF, Mirakian R, Drexhage HA. Adrenalitis, oophoritis and autoimmune polyglandular disease. . In: Rich RR, Fleischer TA, Schwartz DB, Shearer WT, Strober W, eds. Clinical immunology, principles and practice. St.Louis: Mosby; 1996: 1523-36. 83. Zak T, Noczynska A, Wasikowa R, Zaleska-Dorobisz U, Golenko A. Chronic autoimmune thyroid disease in children and adolescents in the years 1999-2004 in Lower Silesia, Poland. Hormones (Athens, Greece) 2005; 4(1): 45-8. 84. Ozen S, Berk O, Simsek DG, Darcan S. Clinical course of Hashimoto's thyroiditis and effects of levothyroxine therapy on the clinical course of the disease in children and adolescents. Journal of clinical research in pediatric endocrinology 2011; 3(4): 192-7. 85. Corrias A, Cassio A, Weber G, et al. Thyroid nodules and cancer in children and adolescents affected by autoimmune thyroiditis. Archives of pediatrics & adolescent medicine 2008; 162(6): 526-31. 86. DeBoer MD, LaFranchi S. Differential presentation for children with autoimmune thyroiditis discovered because of symptom development or screening. Journal of pediatric endocrinology & metabolism : JPEM 2008; 21(8): 753-61. 54 87. Wasniewska M, Corrias A, Salerno M, et al. Thyroid function patterns at Hashimoto's thyroiditis presentation in childhood and adolescence are mainly conditioned by patients' age. Hormone research in paediatrics 2012; 78(4): 232-6. 88. Tunbridge WM, Brewis M, French JM, et al. Natural history of autoimmune thyroiditis. Br Med J (Clin Res Ed) 1981; 282(6260): 258-62. 89. Huber G, Staub JJ, Meier C, et al. Prospective study of the spontaneous course of subclinical hypothyroidism: prognostic value of thyrotropin, thyroid reserve, and thyroid antibodies. The Journal of clinical endocrinology and metabolism 2002; 87(7): 3221-6. 90. Marcocci C, Vitti P, Cetani F, Catalano F, Concetti R, Pinchera A. Thyroid ultrasonography helps to identify patients with diffuse lymphocytic thyroiditis who are prone to develop hypothyroidism. The Journal of clinical endocrinology and metabolism 1991; 72(1): 209-13. 91. Fava A, Oliverio R, Giuliano S, et al. Clinical evolution of autoimmune thyroiditis in children and adolescents. Thyroid : official journal of the American Thyroid Association 2009; 19(4): 361-7. 92. Champion B, Gopinath B, Ma G, El-Kaissi S, Wall JR. Conversion to Graves' hyperthyroidism in a patient with hypothyroidism due to Hashimoto's thyroiditis documented by real-time thyroid ultrasonography. Thyroid : official journal of the American Thyroid Association 2008; 18(10): 1135-7. 93. Wasniewska M, Corrias A, Arrigo T, et al. Frequency of Hashimoto's thyroiditis antecedents in the history of children and adolescents with graves' disease. Hormone research in paediatrics 2010; 73(6): 473-6. 94. Ludgate M, Emerson CH. Metamorphic thyroid autoimmunity. Thyroid : official journal of the American Thyroid Association 2008; 18(10): 1035-7. 95. Santini F, Pinchera A. Causes and laboratory investigation of hypothyroidism. In: Wass JAH, Shale SM, eds. Oxford textbook of endocrinology and diabetes. Oxford, New York: Oxford University Press Inc; 2006. 96. Pinchera A. Subclinical thyroid disease: to treat or not to treat? Thyroid : official journal of the American Thyroid Association 2005; 15(1): 1-2. 97. Rix M, Laurberg P, Porzig C, Kristensen SR. Elevated thyroid-stimulating hormone level in a euthyroid neonate caused by macro thyrotropin-IgG complex. Acta paediatrica 2011; 100(9): e135-7. 98. Kricka LJ. Human anti-animal antibody interferences in immunological assays. Clinical chemistry 1999; 45(7): 942-56. 55 99. Calaciura F, Motta RM, Miscio G, et al. Subclinical hypothyroidism in early childhood: a frequent outcome of transient neonatal hyperthyrotropinemia. The Journal of clinical endocrinology and metabolism 2002; 87(7): 3209-14. 100. Leitner AY, Pellegrini F, Beck-Peccoz P, Wanker P, Persani L, Radetti G. The natural history of the hyperthyrotropinemia of children born prematurely. Journal of endocrinological investigation 2012; 35(3): 260-4. 101. Sakka SD, Malamitsi-Puchner A, Loutradis D, Chrousos GP, KanakaGantenbein C. Euthyroid hyperthyrotropinemia in children born after in vitro fertilization. The Journal of clinical endocrinology and metabolism 2009; 94(4): 133841. 102. Rotondi M, Cappelli C, Leporati P, et al. A hypoechoic pattern of the thyroid at ultrasound does not indicate autoimmune thyroid diseases in patients with morbid obesity. European journal of endocrinology / European Federation of Endocrine Societies 2010; 163(1): 105-9. 103. Rotondi M, Magri F, Chiovato L. Thyroid and obesity: not a one-way interaction. The Journal of clinical endocrinology and metabolism 2011; 96(2): 344-6. 104. Rotondi M, Leporati P, La Manna A, et al. Raised serum TSH levels in patients with morbid obesity: is it enough to diagnose subclinical hypothyroidism? European journal of endocrinology / European Federation of Endocrine Societies 2009; 160(3): 403-8. 105. Mariotti S, Caturegli P, Piccolo P, Barbesino G, Pinchera A. Antithyroid peroxidase autoantibodies in thyroid diseases. The Journal of clinical endocrinology and metabolism 1990; 71(3): 661-9. 106. Mariotti S, Pisani S, Russova A, Pinchera A. A new solid-phase immunoradiometric assay for anti-thyroglobulin autoantibody. Journal of endocrinological investigation 1982; 5(4): 227-33. 107. Set PA, Oleszczuk-Raschke K, von Lengerke JH, Bramswig J. Sonographic features of Hashimoto thyroiditis in childhood. Clinical radiology 1996; 51(3): 167-9. 108. Rotondi M, Coperchini F, Magri F, Chiovato L. Serum-negative autoimmune thyroiditis: what's in a name? Journal of endocrinological investigation 2014; 37(6): 589-91. 109. Hong HS, Lee EH, Jeong SH, Park J, Lee H. Ultrasonography of various thyroid diseases in children and adolescents: a pictorial essay. Korean journal of radiology 2015; 16(2): 419-29. 110. Vitti P, Rago T. Thyroid ultrasound as a predicator of thyroid disease. Journal of endocrinological investigation 2003; 26(7): 686-9. 56 111. Vitti P, Rago T, Mazzeo S, et al. Thyroid blood flow evaluation by color-flow Doppler sonography distinguishes Graves' disease from Hashimoto's thyroiditis. Journal of endocrinological investigation 1995; 18(11): 857-61. 112. Ruchala M, Szmyt K, Slawek S, Zybek A, Szczepanek-Parulska E. Ultrasound sonoelastography in the evaluation of thyroiditis and autoimmune thyroid disease. Endokrynologia Polska 2014; 65(6): 520-6. 113. Willms A, Bieler D, Wieler H, Willms D, Kaiser KP, Schwab R. Correlation between sonography and antibody activity in patients with Hashimoto thyroiditis. Journal of ultrasound in medicine : official journal of the American Institute of Ultrasound in Medicine 2013; 32(11): 1979-86. 114. Vejbjerg P, Knudsen N, Perrild H, et al. The association between hypoechogenicity or irregular echo pattern at thyroid ultrasonography and thyroid function in the general population. European journal of endocrinology / European Federation of Endocrine Societies 2006; 155(4): 547-52. 115. Kambalapalli M, Gupta A, Prasad UR, Francis GL. Ultrasound characteristics of the thyroid in children and adolescents with goiter: a single center experience. Thyroid : official journal of the American Thyroid Association 2015; 25(2): 176-82. 116. Rago T, Chiovato L, Grasso L, Pinchera A, Vitti P. Thyroid ultrasonography as a tool for detecting thyroid autoimmune diseases and predicting thyroid dsfunction in apparently healthy subjects. Journal of endocrinological investigation 2001; 24(10): 763-9. 117. Fang J, Zhu M, Li C, Zhang Q, Wang M. The diagnosis of diffuse goitre by ultrasound imaging in children. Journal of Tongji Medical University = Tong ji yi ke da xue xue bao 1998; 18(1): 61-4. 118. Marwaha RK, Tandon N, Kanwar R, et al. Evaluation of the role of ultrasonography in diagnosis of autoimmune thyroiditis in goitrous children. Indian pediatrics 2008; 45(4): 279-84. 119. Vlachopapadopoulou E, Thomas D, Karachaliou F, et al. Evolution of sonographic appearance of the thyroid gland in children with Hashimoto's thyroiditis. Journal of pediatric endocrinology & metabolism : JPEM 2009; 22(4): 339-44. 120. Smith RN, Taylor SA, Massey JC. Controlled clinical trial of combined triiodothyronine and thyroxine in the treatment of hypothyroidism. British medical journal 1970; 4(5728): 145-8. 121. Woeber K. Treatment of hypothyroidism. In: LE B, RD U, eds. The thyroid a fundamental and clinical text Philadelphia: Lippincott Williams & Wilkins 2005: 864-9. 57 122. Biondi B, Cooper DS. The clinical significance of subclinical thyroid dysfunction. Endocrine reviews 2008; 29(1): 76-131. 123. Surks MI, Ortiz E, Daniels GH, et al. Subclinical thyroid disease: scientific review and guidelines for diagnosis and management. Jama 2004; 291(2): 228-38. 124. Gharib H, Tuttle RM, Baskin HJ, Fish LH, Singer PA, McDermott MT. Subclinical thyroid dysfunction: a joint statement on management from the American Association of Clinical Endocrinologists, the American Thyroid Association, and the Endocrine Society. The Journal of clinical endocrinology and metabolism 2005; 90(1): 581-5; discussion 6-7. 125. Surks MI, Chopra IJ, Mariash CN, Nicoloff JT, Solomon DH. American Thyroid Association guidelines for use of laboratory tests in thyroid disorders. Jama 1990; 263(11): 1529-32. 126. Keffer JH. Preanalytical considerations in testing thyroid function. Clinical chemistry 1996; 42(1): 125-34. 127. Svensson J, Ericsson UB, Nilsson P, et al. Levothyroxine treatment reduces thyroid size in children and adolescents with chronic autoimmune thyroiditis. The Journal of clinical endocrinology and metabolism 2006; 91(5): 1729-34. 58 RINGRAZIAMENTI Sembrava impossibile invece sono passati anche questi sei anni di Università. Sono stati sei anni lunghi e intensi, sei anni nei quali ho imparato tanto, sei anni grazie ai quali sono cresciuta sia sul piano professionale che umano, sei anni ricchi di persone, “vecchie” e “nuove”, che mi sembra doveroso ringraziare. Grazie al prof. Vitti che mi ha dato la possibilità di seguire questo studio, e grazie al prof. Francesco Latrofa che mi ha seguito, aiutato, supportato e sopportato durante tutto il periodo dello studio e di stesura della tesi, dal quale ho imparato molto e dal quale spero di poter continuare ad imparare. Grazie alle “bimbe dell’unipi”, con le quali ho condiviso gioie e dolori di questi sei anni. Esami, pianti, risate, tirocini, ore interminabili di lezione, ore altrettanto interminabili di studio, libretti da firmare, prof. introvabili da trovare, le varie segretarie, la “dispa”, tutto grazie a loro è sembrato più semplice. Un ringraziamento particolare va alla mia compagna di studio Giulia, ci siamo trovate ai tempi di “anatomia I” e da lì non ci siamo più lasciate. Posso dire con tutta serenità che senza di lei non ce l’avrei fatta, almeno non così “facilmente”, e posso altrettanto dire che oltre ad una compagna di studio ho trovato un’amica. Grazie ai miei Amici, quelli dalla A maiuscola; quelli che mi hanno riempito la vita da sempre, non solo in questi sei anni; quelli su cui posso contare; quelli che ognuno desidererebbe, i migliori del mondo, e lo so che lo dicono tutti ma sono sicura di averceli io. Grazie per esserci sempre. 59 Grazie al mio primo paziente Rocco. Grazie per le valvole di sfogo che mi ha offerto, per i “36 giorni prima dell’esame”, per essersi sforzato di capire le mie esigenze, e soprattutto per esserci riuscito. Ora cambierà di nuovo tutto e chissà cosa avrà in serbo la vita per noi, spero che continueremo a scoprirlo insieme. Grazie a Babbo e Mamma, che non si sono mai imposti e mi hanno lasciata libera di compiere le mie scelte senza mai subire pressioni, che mi hanno dato la possibilità di studiare con serenità, che mi hanno insegnato ad essere la persona che sono. Grazie anche a tutti coloro che non ho nominato ma ci sono stati, anche solo di passaggio, ci sono e ci saranno. 60