Elementi di Biologia Molecolare Docente: Guglielmo Rainaldi, [email protected]; ricevimento: Martedì e Giovedì dalle 10:00 alle 13:00 Anno di Corso e Semestre: 3°A, 1°S CFU: 4 Lez e 1 Lab Obiettivi del Corso Acquisire le conoscenze di base sulla struttura e proprietà del materiale genetico degli organismi viventi e sui meccanismi molecolari della trasmissione ed espressione dell’informazione genetica. Acquisire inoltre dimestichezza con le principali tecniche di laboratorio per l'analisi di acidi nucleici e proteine. Programma ORGANIZZAZIONE DEL MATERIALE GENETICO Proprietà – Organismi viventi: Procarioti ed Eucarioti – Mitosi e Meiosi. GENI E GENOMI Genomi procariotici ed Eucariotici – Il genoma Umano GENETICA MENDELIANA Le osservazioni di Mendel - Monoibridismo – Diibridismo - Triibridismo EREDITÀ LEGATA AL SESSO Le osservazioni di Morgan – Non disgiunzione cromosomica – Aneuploidia PRINCIPI DI MAPPATURA GENETICA Associazione genica – Mappatura- Reincrocio a 2 e 3 punti – Calcolo delle distanze di Mappa. STRUTTURA DEL DNA E TOPOLOGIA Basi azotate, nucleosidi, nucleotidi. Struttura degli acidi nucleici: la doppia elica del DNA, strutture insolite del DNA, strutture tridimensionali dell’RNA. Il DNA conserva l’informazione genetica. Denaturazione degli acidi nucleici. Idrolisi acidi nucleici. Speravvolgimento e topoisomerasi LA REPLICAZIONE DEL DNA Le DNA polimerasi. Altri enzimi e fattori proteici richiesti per la replicazione. Replicazione in E. coli. DNA polimerasi degli eucarioti – Replicazione mitocondriale e fagica CROMOSOMI CROMATINA E NUCLEOSOMI Impacchttamento e condensazione del DNA – Assemblaggio dei nucleosomi – Struttura di ordine superiore della cromatina LA TRASCRIZIONE RNA polimerasi batterica - Promotori - Terminazione della trascrizione - RNA polimerasi eucariotiche – Inibitori – Maturazione degli RNA – Splicing – tRNA - I ribosomi procariotici, eucariotici CODICE GENETICO E TRADUZIONE Codice a triplette, assegnazione dei codoni, codoni non senso, mutazioni. - Caratteristiche del codice genetico: universalità, degenerazione. Ciclo del ribosoma nell'allungamento della catena polipeptidica. Attivazione di aminoacidi, iniziazione, allungamento e teminazione della sintesi proteica. Fattori proteici di inizio, allungamento. Apparato della sintesi proteica e trasferimento. Inibitori della sintesi proteica. REGOLAZIONE DELL’ESPRESSIONE GENICA Regolazione negativa e positiva - Regolazione nei procarioti – Operone Lac – Operone Trp – Attenuazione - Enhancers – Attivatori e Silenziatori LE TECNICHE DELLA BIOLOGIA MOLECOLARE: Estrazione degli acidi nucleici. Dosaggio di acidi nucleici. Endonucleasi di Restrizione ed Elettroforesi su gel. Clonaggio. Marcatura acidi nucleici. Ibridazione molecolare. Chip DNA. PCR ed RT-PCR. Sequenziamento del DNA: metodo di Sanger - metodo automatizzato – NGS. Modalità di valutazione Fino a 10/30 per le tecniche di laboratorio ed esercitazioni; fino a 20/30 per la preparazione sulla parte teorica del programma. Materiale didattico APPUNTI DI LEZIONE TESTI DIDATTICI: Russel – Fondamenti di Genetica Amaldi – Benedetto – Pesole – Plevani - Biologia Molecolare B.Lewin – Il Gene X Watson - Biologia Molecolare del gene 2