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Test di laboratorio nel quale il sangue raccolto dal paziente viene
inoculato in flaconi contenenti terreno di coltura che consente la
crescita e la rilevazione di microrganismi causa di infezioni.
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IL RISULTATO OTTIMALE DI QUESTO ESAME DIPENDE DA
MOLTEPLICI FATTORI TRA CUI :
¾
¾
¾
¾
¾
IL MOMENTO DEL PRELIEVO
L’INTERVALLO ED IL NUMERO DI PRELIEVI
IL VOLUME DEL CAMPIONE
L’ACCURATEZZA DEL PRELIEVO
LE CARATTERISTICHE DEL MEZZO DI COLTURA
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¾
¾
¾
¾
Prima della terapia antibiotica
Prima della nuova somministrazione di antibiotico
60-90 minuti prima del rialzo febbrile (quando prevedibile)
Se questo non è prevedibile, allora eseguire il prelievo
all’inizio del rialzo febbrile
Molti pazienti possono essere ipotermici anche nella fase
batteriemica pertanto la febbre da sola non è un utile
indicatore, tenere sotto controllo i globuli bianchi, la
presenza/assenza di brivido, marcatori biologici come la
proteina C reattiva ( PCR )
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Eseguire 2 massimo 3 prelievi in rapida successione purché da
diversi siti anatomici
Tre prelievi ottimizzano la sensibilità dell’esame (96-99%)
Tre prelievi facilitano l’interpretazione dei risultati nel caso
di isolamento di germi di dubbio significato: patogeno o contaminante?
Un solo flacone positivo di emocoltura indicherà la presenza di un
contaminante , mentre se si positivizzano più set di emocolture provenienti
da differenti siti anatomici, questo indicherà la presenza di un’infezione del
torrente circolatorio
Mai effettuare un solo prelievo nell’adulto: lo scarso volume di sangue
analizzato potrebbe dar luogo a falso negativo, in caso di positività
sarebbe di difficile interpretazione: patogeno o contaminante?
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Per ogni prelievo utilizzare una coppia di flaconi:
FLAC AEROBIO + FLAC ANAEROBIO
Adulti: il volume ottimale da inoculare nel flacone
aerobio FA e nel flacone anaerobio FN è di 10
ml di sangue ciascuno
Pazienti pediatrici: il volume ottimale di sangue da
inoculare nel flacone pediatrico PF non è
stato definito con esattezza varia da 1 ml a 4
ml (basato sul peso corporeo del paziente)
Se il prelievo viene eseguito
utilizzando la siringa inoculare prima
il Flac ANAEROBIO e
successivamente il Flac AEROBIO
Se il prelievo viene eseguito
utilizzando il set di prelievo, inoculare
prima il Flac AEROBIO e
successivamente il Flac ANAEROBIO
AEROBIO
ANAEROBIO
PEDIATRICO
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VOLUME DEL CAMPIONE
Il volume di sangue prelevato è la causa della significativa variabilità nel recupero di
microrganismi da pazienti con infezioni del circolo ematico perciò è importante non
inoculare nei flaconi una quantità di sangue superiore a quella consigliata.
Tali quantità sono stabilite sulla conoscenza che un’emocoltura, perché diventi
positiva, deve contenere almeno XQLWj IRUPDQWLFRORQLD8)&SHUPO
Nei pazienti batteriemici la concentrazione per ml di sangue è di norma 0,1-1 UFC/ml,
il recupero di batteri dal sangue aumenta del 3% per ogni ml di campione raccolto,
quindi negli adulti sono necessari 10 ml per flacone, mentre sono sufficienti 1- 2 ml
nel flacone pediatrico, per la più alta carica riscontrabile nelle batteriemie di neonati
e infanti.
Inoltre è necessario rispettare tali quantità di inoculo per HYLWDUH LO ULOHYDPHQWR GL
IDOVLSRVLWLYL specialmente per quanto riguarda i batteri anaerobi, poiché i
leucociti presenti nel sangue producono una quantità di CO2 sufficiente a indicare
positività nella coltura .
I flaconi BacT/ALERT® possono essere utilizzati per valutare la presenza di
microrganismi nel sangue e in tutti i fluidi biologici (es.liquor,liquido
pleurico,liquido ascitico,liquido pericardico etc.) fatta eccezione per le urine.
I flaconi _BacT/ALERT® hanno ottenuto l’autorizzazione ufficiale (510(k) notification) dalla FDA (Food and Drug
Administration) Americana e marcati CE per l’utilizzo nello screening di fluidi biologici
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EMOCOLTURA : Modalità di prelievo
Disinfettare la membrana di gomma
con : clorexidina al 2% in alcool
isopropilico al 70%, o alcool
isopropilico al 70% o tintura di iodio
(utilizzando tamponi o ovatta nuovi)
Far asciugare la membrana di gomma
del flacone per ottenere una
disinfezione totale
Praticare una pulizia sul
sito cutaneo identificato
per un diametro di circa
7 -8 cm con alcool etilico
al 70% procedendo dal
centro alla periferia
Lasciare asciugare prima
della tecnica di antisepsi
del sito di prelievo
Disinfettare la cute
lasciando in sede per
almeno 30 secondi un
impacco con clorexidina al
2% in alcool isopropilico
al 70%, o alcool
isopropilico al 70%
Il sito di prelievo sarà
perfettamente pulito solo
se il disinfettante sarà
completamente evaporato
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Introdurre l’ago senza
ripalpare la zona
disinfettata, se fosse
necessario utilizzare
guanti sterili
Durante il prelievo
mantenere il flacone in
posizione verticale,
posizionandolo su un piano
d’appoggio in modo da
controllare la quantità di
sangue aspirata
Terminato il prelievo
agitare delicatamente il
flacone per consentire al
liquido di mescolarsi al
sangue e per evitare la
formazione di coaguli
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¾ Mantenere i flaconi a temperatura ambiente
¾ Consegnare possibilmente entro 2 ore;
¾ E’ possibile consegnare in qualsiasi
momento al laboratorio emocolture accettate
come routine
La data di accettazione deve essere quella del
giorno in cui viene eseguito il prelievo
anche se festivo
Non appena i campioni arrivano in laboratorio
vengono alloggiati nel sistema analitico di
rilevazione microbica BacT/ALERT 3D che inizia
il monitoraggio della crescita batterica
Se il flacone non viene caricato tempestivamente
potrebbe verificarsi una mancata rilevazione da
parte dello strumento di positività, poiché la
crescita batterica ha già raggiunto il plateau
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Principio di rilevamento
Il cuore del sistema BacT/ALERT 3D è il sensore colorimetrico contenuto nel flacone di coltura in grado di determinare
la crescita batterica all’interno del flacone di coltura mediante sistema di lettura non invasivo e completamente
automatico.
In caso di crescita batterica l’aumento della concentrazione di CO2 disciolta nel brodo di coltura, provoca una
variazione di pH.
L’abbassamento del pH, che si verifica con la diffusione di CO2, provoca un cambiamento di colore dell’indicatore
contenuto all’interno del sensore. A differenza di altri tipi di sensori fluorescenti, il sensore colorimetrico BacT/ALERT
3D è poco influenzato dalla luce e garantisce una maggiore affidabilità dei risultati, ciò soprattutto nei casi di
introduzione ritardata del flacone. Una volta introdotti nella cella di incubazione, i flaconi sono monitorati
continuamente, 24 ore su 24, per la creazione della curva di crescita. Durante la lettura un led, situato sul fondo di ogni
cella di incubazioneemette un fascio di luce diretto verso il sensore colorimetrico.
La quantità di luce riflessa dal sensore viene rilevata da un reflettometro che trasmetterà la lettura al computer
gestionale per l’analisi algoritmica, in base alla quale verrà discriminato il campione in positivo o negativo.
Il software di gestione, mediante l’utilizzo di sofisticati algoritmi, è anche in grado di distinguere tra la CO2 prodotta dai
microrganismi e quella generata dal campione ematico in analisi (processi catabolici del sangue e attività residua dei
globuli bianchi). Il monitoraggio dei flaconi in incubazione è continuo, le letture vengono eseguite ogni 10 minuti fino
alla formulazione del risultato
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Con i sistemi automatici i flaconi vengono incubati a 35°C per 5 giorni
Non è necessario protrarre l’incubazione nel sospetto di endocardite o
Brucellosi se vengono rispettati il n°di campioni e il volume di sangue
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Sistemi automatizzati
¾
57% = 12 ore
¾
82% = 24 ore
¾
95-97% entro tre - quattro giorni anche per germi
tradizionalmente ritenuti difficili: Brucella,
Capnocytophaga, Campylobacter o HACEK(Haemophilus,
Actinobacillus, Cardiobacterium, Eikenella, Kingella)
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ƐĂŵĞŵŝĐƌŽƐĐŽƉŝĐŽ
Da ogni flacone positivo viene
effettuato un esame microscopico per
confermare la presenza di batteri
o miceti, il risultato viene prontamente
refertato in attesa di identificazione
biochimica ed antibiogramma
E’ possibile avere informazioni
telefoniche preliminari sull’andamento
delle colture e referto scritto del
microscopico eseguito su campioni
positivi
Laboratorio di Microbiologia
Tel 236.427
Il progetto LaSER Lotta alla Sepsi nell’AOU FE:
2007-2010
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Identificazione e
antibiogramma sulle
colonie isolate
