colorazione di nuclei e citoplasma con ematossilina

COLORAZIONE DI NUCLEI E CITOPLASMA CON EMATOSSILINAEOSINA
PREPARAZIONE DELL’EOSINA ALL’1%
•
Pesare 1 grammo di polvere di eosina in un’apposita vaschetta utilizzando la bilancia di
precisione e introdurlo in un beker.
•
Sciogliere la polvere di colorante pesata in 100 ml di acqua distillata e portarla in soluzione
utilizzando una agitatore magnetico.
•
Preparare un filtro di carta e porlo all’interno di un imbuto da posizionare superiormente ad
un tubo da 50ml.
•
Prelevare, con una pipetta Pasteur, 3 ml di colorante e introdurlo nell’imbuto ove è
posizionato il filtro per promuoverne la filtrazione. Il colorante filtrato sgocciolerà
all’interno del tubo da 50ml.
PROCEDURA DI COLORAZIONE
•
Con una pipetta Pasteur aspirare il terreno di coltura presente all’interno di una capsula Petri
dove si trovano le cellule piastrate su un vetrino.
•
Effettuare due lavaggi con PBS nella capsula Petri servendosi di una pipetta Pasteur.
•
Fissare le cellule presenti sul vetrino introducendo nella capsulina il metanolo.
•
Lasciare agire per 10 minuti a temperatura ambiente.
•
Effettuare due lavaggi con PBS nella capsulina servendosi di una pipetta Pasteur.
•
Colorare le cellule fissate sul vetrino introducendo nella capsulina, con una pipetta Pasteur,
qualche goccia di ematossilina.
•
Lasciare agire il colorante per 3 minuti a temperatura ambiente.
•
Effettuare qualche lavaggio con acqua distillata servendosi di una pipetta Pasteur. Terminare
i lavaggi quando l’acqua introdotta nella capsulina rimane trasparente.
•
Aggiungere nella capsulina l’eosina all’1% precedentemente preparata e farla agire per 1-5
minuti.
•
Effettuare qualche lavaggio con acqua distillata servendosi di una pipetta Pasteur. Terminare
i lavaggi quando l’acqua introdotta nella capsulina rimane trasparente.
•
Posizionare il vetrino, sul quale sono presenti le cellule colorate, su un vetrino portaoggetto
e promuoverne l’essiccamento.
•
Osservazione del vetrino al microscopio ottico. L’ematossilina colora in blu la cromatina
nucleare; l’eosina colora in rosa-rosso il citoplasma cellulare.