Presentazione di PowerPoint

CITOMETRIA A FLUSSO:
STATO DELL’ARTE E PROSPETTIVE.
G. Mazzini Istituto di Genetica Molecolare CNR.
Sez. Istochimica e Citometria, Pavia
La citometria a flusso “nasce” in Anatomia Patologica …
Citologia e Istologia (istochimica)
Alterazioni morfologiche
Diagnostica (soggettiva)
Contenuto nucleare di DNA
Diploidia (normalità)
Anomalie di contenuto (aneuploidie)
Diagnostica (oggettiva)
CITOMETRIA A FLUSSO:

Che cos’è e come funziona

A che cosa serve
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I suoi principali vantaggi
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Alcuni importanti svantaggi

Che sviluppi ha avuto
La CITOMETRIA a FLUSSO…… in dieci puntate
Anni 60” nasce la Citometria a flusso.
2Dopo oltre dieci anni se ne riconoscono i limiti….
3Sviluppo dei MoAb fluorescenti e svolta….
4AIDS CD4 e conta assoluta.
5L’immunofluorescenza diventa anche quantitativa.
6Dalle cellule alle biglie….
7Le biglie diventano “magnetiche”…
8Dai grandi numeri agli eventi rari.
9Meno cellule ma con più dati (high content…)
10Oltre i numeri con le immagini……
1
Contatori di particelle
(contacellule, contaglobuli)
Principio di “Coulter”
(impedenziometrico)
Analizzatori di particelle
(citometri a flusso)
Principio del
“flusso laminare”
1. CAMPIONAMENTO DEL MATERIALE
2. CONSERVAZIONE
3. DISAGGREGAZIONE
4. COLORAZIONE
5. MISURA
6. VALUTAZIONE DEI RISULTATI
Are your cells properly stained…...
USE A FLUORESCENCE MICROSCOPE !!!!
Esempi di analisi
monoparametrica
del contenuto di
DNA
Campioni diploidi
Esempi di analisi
monoparametrica
del contenuto di
DNA
Campioni aneuploidi
2
Dopo oltre dieci anni se ne riconoscono i limiti….
1880 Vaccinazione con microrganismi attenutati o uccisi (Pasteur)
1883 Fagocitosi (Metnichoff)
1894 Complemento (Bordet)
1900 Gruppi sanguigni (Landsteiner)
1900 Ipotesi delle "catene laterali" Ehrlich
1901 Deviazione complemento (Bordet e Gengou)
1906 Allergia (von Pirquet)
1939 Identificazione Ab-gammaglobuline (Tiselius)
1941 Immunofluorescenza (Coons)
1942 trasferimento ipersensibilità con linfociti (Chase e Landsteiner)
1955 Teoria della selezione clonale (Jerne, Burnet)
1959 Struttura delle Ig (Edelman e Porter)
1966 T e B linfociti (autori vari)
1974 Restrizione genetica della risposta (Doherty e Zinkernagel, premio Nobel 1996)
1975 Anticorpi monoclonali (Kohler e Milstein)
1978 Riarrangiamento geni Ig (Tonegawa)
1983 T cell receptor (Haskins)
Analisi biparametrica DNA/BrdU
ESEMPI DI ANALISI
BIPARAMETRICA DNA/BRDU:
CAMPIONI CON CONTENUTO DI
DNA DIPLOIDE
ESEMPI DI ANALISI BIPARAMETRICA
DNA/BRDU:
CAMPIONI CON ANEUPLOIDIA POCO
RAPPRESENTATA
Analisi Multiplex
Amnis “ImageStream”
E’ assolutamente indiscutibile il valore diagnostico della
Microscopia in campo cito e istopatologico sicuramente per
quanto attiene l’ambito dei tumori solidi.
Per alcuni decenni (passati) sono state coltivate speranze di
“citodiagnostica automatizzata” basata sia sul microscopio
che sul citometro a flusso……ma sono rimaste solo speranze.
Di vero c’è che i “dati quantitativi” (difficilmente ottenibili al
microscopio) possono essere molto importanti e che si
ottengono facilmente con la Citometria a Flusso.
DOMANDE???
Noi siamo stati molto attenti……,
e infatti la tua presentazione era per noi (cioè da cani),
ma non abbiamo capito niente!!! Figurati loro!!!!!!!!!!!