La relazione tra
progresso scientifico e
progresso tecnologico:
una spirale senza fine
GLI ANTICORPI RICONOSCONO LE PROTEINE IN MANIERA SPECIFICA
STRUTTURA DEGLI ANTICORPI
La papaina taglia le Ig in 3
frammenti costituiti dai due
bracci e dal gambo. Due di
questi sono identici e
costituiti dalla catena
leggera ancora legata ad un
pezzo di catena pesante. Dal
momento che la capacità di
legare l'antigene è
mantenuta vengono
chiamati frammenti con sito
di legame per
l'antigene (FAB = Fragment,
Antigen Binding). Il terzo
frammento è composto
dalle parti restanti delle
catene pesanti che tendono
ad aggregarsi e a
cristallizzare. Viene per
questo chiamato frammento
cristallizzabile (FC =
Fragment, crystallizable).
LA GENERAZIONE DELLA DIVERSITA’ DEGLI ANTICORPI
Il repertorio di anticorpi presente in un singolo individuo può arrivare a
più di 1012 molecole con distinte sequenze amminoacidiche
La diversità anticorpale è generata da un numero elevato, ma limitato di
geni che subiscono un riarrangiamento.
COME SI OTTIENE UN ANTICORPO SPECIFICO PER UNA PROTEINA
Anticorpi policlonali
Anticorpi monoclonali
GLI ANTICORPI CI CONSENTONO DI VISUALIZZARE LE PROTEIN
INDICATORI FLUORESCENTI: FLUOROFORI
MOLECOLE ORGANICHE
POLIAROMATICHE O ETEROICICLICHE
VENGONO ECCITATE DA LUCE UV
ED EMETTONO LUCE AD UNA l
MAGGIORE
Gli anticorpi contro epitopi contenenti singoli aminoacidi fosforilati ci
consentono di distinguere tra forme attive e inattive della stessa proteina.
SYTO-13
Localizazione di β-catenina TOTALE fosforilata (A) e di β-catenina
ATTIVA fosforilata (B). active β-catenina attiva marcata con il fluoroforo
Cy3 è in rosso, i nuclei marcati con il colorante SYTO-13 sono in giallo.
La β-catenina TOTALE,fosforilata e defosforilata (attiva) è espressa in
tutti gli stadi dello sviluppo dell’embrione pre-impianto, dall’ovocita
fecondato alla blastocisti. Si nota che la β-catenina attiva (defosforilata)
è principalmente localizzata nel nucleo di tutte le cellule prima della
morula e principalmente nel trofoectoderma della blastocisti.
LA GREEN FLUORESCENT PROTEIN GFP
