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La relazione tra progresso scientifico e progresso tecnologico: una spirale senza fine GLI ANTICORPI RICONOSCONO LE PROTEINE IN MANIERA SPECIFICA STRUTTURA DEGLI ANTICORPI La papaina taglia le Ig in 3 frammenti costituiti dai due bracci e dal gambo. Due di questi sono identici e costituiti dalla catena leggera ancora legata ad un pezzo di catena pesante. Dal momento che la capacità di legare l'antigene è mantenuta vengono chiamati frammenti con sito di legame per l'antigene (FAB = Fragment, Antigen Binding). Il terzo frammento è composto dalle parti restanti delle catene pesanti che tendono ad aggregarsi e a cristallizzare. Viene per questo chiamato frammento cristallizzabile (FC = Fragment, crystallizable). LA GENERAZIONE DELLA DIVERSITA’ DEGLI ANTICORPI Il repertorio di anticorpi presente in un singolo individuo può arrivare a più di 1012 molecole con distinte sequenze amminoacidiche La diversità anticorpale è generata da un numero elevato, ma limitato di geni che subiscono un riarrangiamento. COME SI OTTIENE UN ANTICORPO SPECIFICO PER UNA PROTEINA Anticorpi policlonali Anticorpi monoclonali GLI ANTICORPI CI CONSENTONO DI VISUALIZZARE LE PROTEIN INDICATORI FLUORESCENTI: FLUOROFORI MOLECOLE ORGANICHE POLIAROMATICHE O ETEROICICLICHE VENGONO ECCITATE DA LUCE UV ED EMETTONO LUCE AD UNA l MAGGIORE Gli anticorpi contro epitopi contenenti singoli aminoacidi fosforilati ci consentono di distinguere tra forme attive e inattive della stessa proteina. SYTO-13 Localizazione di β-catenina TOTALE fosforilata (A) e di β-catenina ATTIVA fosforilata (B). active β-catenina attiva marcata con il fluoroforo Cy3 è in rosso, i nuclei marcati con il colorante SYTO-13 sono in giallo. La β-catenina TOTALE,fosforilata e defosforilata (attiva) è espressa in tutti gli stadi dello sviluppo dell’embrione pre-impianto, dall’ovocita fecondato alla blastocisti. Si nota che la β-catenina attiva (defosforilata) è principalmente localizzata nel nucleo di tutte le cellule prima della morula e principalmente nel trofoectoderma della blastocisti. LA GREEN FLUORESCENT PROTEIN GFP
